尹明華

摘要：探討了激動素（KT）和萘乙酸（NAA）對知母（Anemarrhena asphodeloides）分蘗生長發(fā)育和生理生化指標(biāo)的影響。結(jié)果表明，知母分蘗生長發(fā)育的最佳培養(yǎng)基為MS+KT 4 mg/L+NAA 0.1 mg/L，此培養(yǎng)基條件下，知母分蘗的總?cè)~綠素含量、可溶性總糖含量和可溶性蛋白質(zhì)含量最高；而低濃度的KT與高濃度的NAA組合下知母試管苗總?cè)~綠素含量、可溶性總糖含量和可溶性蛋白質(zhì)含量較低。

關(guān)鍵詞：知母（Anemarrhena asphodeloides）；激動素（KT）；萘乙酸（NAA）；分蘗生長發(fā)育；生理生化指標(biāo)

中圖分類號：S567.23 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）03-0607-02

知母（Anemarrhena asphodeloides）為百合科（Liliaceae）知母屬（Anemarrhena Bunge）多年生宿根植物，其根、莖為常用中藥材，藥用歷史悠久，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品，味苦、寒，具有清熱瀉火、潤腸滑燥、止渴除煩等功效[1]。在中國主要分布于河北、山西、內(nèi)蒙古、遼寧、黑龍江、吉林等省（區(qū)）[2]。知母皂苷元為知母的主要活性成分，已有研究表明，知母皂苷具有提高多種擬癡呆動物的學(xué)習(xí)記憶功能和對抗β-淀粉樣蛋白引起的神經(jīng)細(xì)胞凋亡的作用[3]。

目前國內(nèi)外主要對知母的化學(xué)成分[4]、提取工藝[5]、藥理作用[6]、臨床應(yīng)用[7]和栽培管理[8]等方面進(jìn)行了研究，而關(guān)于知母組織培養(yǎng)的研究較少[9，10]。試驗(yàn)探討了NAA（萘乙酸）和KT（激動素）對知母分蘗生長發(fā)育和生理生化指標(biāo)的影響，旨在為知母組培快繁和種質(zhì)保存提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試材料知母分蘗由上饒師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院植物組織培養(yǎng)室提供。

1.2 方法

選取相同條件下生長良好的知母分蘗，切除根，留莖1.5 cm，每瓶接種5個知母分蘗，培養(yǎng)基如下：①M(fèi)S（CK）；②MS+KT 2 mg/L+NAA 0.1 mg/L；③MS+KT 2 mg/L+NAA 0.5 mg/L；④MS+KT 4 mg/L+NAA 0.1 mg/L；⑤MS+KT 4 mg/L+NAA 0.5 mg/L。培養(yǎng)基中均加入30 g/L蔗糖和0.5 g/L瓊脂，調(diào)pH為5.8～6.0。培養(yǎng)條件為：光照時間14 h/d；光照度1 000～2 000 lx；溫度（25±1） ℃；相對濕度70%～80%。在60 d內(nèi)統(tǒng)計(jì)知母分蘗生長發(fā)育情況。60 d后測定5組試管苗的生理生化指標(biāo)，總?cè)~綠素（葉綠素a和葉綠素b）含量的測定采用丙酮比色法[11]，可溶性蛋白質(zhì)含量的測定采用考馬斯亮藍(lán)G-250染色法[12]，可溶性總糖含量的測定采用蒽酮比色法[12]。試驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，數(shù)據(jù)用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 KT和NAA對知母分蘗生長發(fā)育的影響

從表1可知，沒有添加激素的對照組，不僅芽少芽短，而且根少根短。添加激素后，總體上可以促進(jìn)知母分蘗的生長發(fā)育。當(dāng)KT濃度為2 mg/L時，隨著NAA濃度的升高，新生芽數(shù)極顯著增加，但新生芽長、新生根數(shù)和新生根長無顯著變化。當(dāng)KT濃度為4 mg/L時，隨著NAA濃度的升高，新生芽數(shù)和新生芽長極顯著下降，而新生根數(shù)和新生根長無顯著變化。當(dāng)NAA濃度為0.1 mg/L時，隨著KT濃度的升高，新生根數(shù)無顯著變化，但新生芽數(shù)、新生芽長和新生根長極顯著增加。當(dāng)NAA濃度為0.5 mg/L時，隨著KT濃度的升高，新生芽數(shù)和新生根數(shù)無顯著變化，但新生根長極顯著增加，而新生芽長極顯著下降。因此，知母分蘗生長發(fā)育的最佳培養(yǎng)基為MS+KT 4 mg/L+NAA 0.1 mg/L。

2.2 KT和NAA對知母試管苗生理生化指標(biāo)的影響

從表2可知，沒有添加激素的對照組，總?cè)~綠素含量、可溶性蛋白質(zhì)含量和可溶性總糖含量均較低。添加激素后，總體上可以促進(jìn)總?cè)~綠素含量、可溶性蛋白質(zhì)含量和可溶性總糖含量的增加。當(dāng)KT濃度為2 mg/L時，隨著NAA濃度的升高，總?cè)~綠素含量、可溶性蛋白質(zhì)含量和可溶性總糖含量極顯著增加。當(dāng)KT濃度為4 mg/L時，隨著NAA濃度的升高，總?cè)~綠素含量和可溶性蛋白質(zhì)含量極顯著下降，而可溶性總糖含量無顯著變化。當(dāng)NAA濃度為0.1 mg/L時，隨著KT濃度的升高，總?cè)~綠素含量、可溶性蛋白質(zhì)含量和可溶性總糖含量極顯著增加。當(dāng)NAA濃度為0.5 mg/L時，隨著KT濃度的升高，總?cè)~綠素含量和可溶性蛋白質(zhì)含量無顯著變化，但可溶性總糖含量極顯著增加。因此，從生理生化指標(biāo)的變化來看，知母分蘗生長發(fā)育的最佳培養(yǎng)基為MS+KT 4 mg/L+NAA 0.1 mg/L。

3 小結(jié)

植物材料的器官再生途徑一般是由細(xì)胞分裂與生長素的比例來控制的[5]。KT和NAA是兩種常用的植物生長調(diào)節(jié)劑，分別屬于細(xì)胞分裂素類和生長素類，它們在生產(chǎn)上尤其在組織培養(yǎng)中應(yīng)用較廣，KT和NAA在培養(yǎng)基中的含量及其比例不同都可以影響培養(yǎng)材料的生長[13]。試驗(yàn)結(jié)果表明，知母分蘗生長發(fā)育的最佳培養(yǎng)基為MS+KT 4 mg/L+NAA 0.1 mg/L，在此培養(yǎng)基下，知母分蘗的新生芽數(shù)、新生芽長、新生根數(shù)和新生根長總體上明顯增加。生理生化指標(biāo)測定結(jié)果也表明，此種培養(yǎng)基有利于知母試管苗的總?cè)~綠素含量、可溶性蛋白質(zhì)含量以及可溶性總糖含量的提高。劉小鳳等[14]研究了不同濃度的NAA和KT對馬鈴薯組培苗鮮重、根重、須根數(shù)和腋芽數(shù)的影響，發(fā)現(xiàn)最佳的濃度組合為NAA 0.05～0.08 mL/L、KT 0.4～0.6 mL/L。祝紅藝等[13]也研究了培養(yǎng)基中KT與NAA含量對馬鈴薯組培苗生長的影響，發(fā)現(xiàn)當(dāng)KT為0.4 mg/L、NAA為0.04 mg/L時，組培苗鮮重、根重、根數(shù)、腋芽發(fā)生數(shù)及腋芽發(fā)生百分比顯著增加。徐恒戩[15]對KT和NAA對黑籽南瓜器官離體再生的影響研究發(fā)現(xiàn)，最佳的再生培養(yǎng)基為MS+KT 2.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L，此培養(yǎng)基下可獲得較高的不定芽誘導(dǎo)率，與本研究結(jié)果基本一致。

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