劉文光等

摘 要：

體外培養(yǎng)基抑菌試驗(yàn)表明：人工飼料專用消毒劑對(duì)靈菌、白僵菌、綠僵菌和曲霉菌的最低殺滅質(zhì)量濃度為0.5%；生物試驗(yàn)表明：含量為1.0%的消毒劑對(duì)家蠶的生長(zhǎng)發(fā)育無不良影響。

關(guān)鍵詞：家蠶；人工飼料；消毒劑；消毒效果

中圖分類號(hào)：S884.1+1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A 文章編號(hào)：1001-4942（2014）04-0097-03

人工飼料養(yǎng)蠶是適應(yīng)專業(yè)化、規(guī)模化蠶繭生產(chǎn)技術(shù)，提高養(yǎng)蠶工效、節(jié)省飼育設(shè)施的一條重要途徑[1，2]。家蠶人工飼料的主要組成成分是桑葉粉和大豆粉，其含水率高，營(yíng)養(yǎng)豐富，又需在高溫多濕的環(huán)境條件下用于養(yǎng)蠶，因此極易腐敗變質(zhì)，滋生細(xì)菌和真菌，誘發(fā)家蠶的細(xì)菌性敗血病和僵病，嚴(yán)重影響?zhàn)B蠶效果[3，4]。為防止人工飼料變質(zhì)并保持其品質(zhì)穩(wěn)定性，國(guó)內(nèi)外廣泛采用在人工飼料中添加防腐劑。防腐劑是一類能抑制微生物活動(dòng)、防止微生物造成飼料腐敗變質(zhì)，從而延長(zhǎng)保質(zhì)期的食品添加劑[5]。在高溫高濕特別是農(nóng)村比較簡(jiǎn)陋的養(yǎng)蠶條件下進(jìn)行人工飼料養(yǎng)蠶，僅靠添加防腐劑很難達(dá)到消毒及齡期末除濕干燥的要求，飼料極易霉變，誘發(fā)蠶病，影響家蠶就眠。因此，研制一種既能消毒殺菌又能在齡期末起到除濕止桑的多用途消毒劑，是人工飼育技術(shù)必須解決的問題。

氯溴異氰脲酸（C3HO3N3ClBr）是一種高效、廣譜的內(nèi)吸性殺菌劑，其水溶液呈酸性。將氯溴異氰脲酸藥液噴施在作物表面能緩慢地釋放次溴酸（HOBr）和次氯酸（HOCl），次溴酸的活性是次氯酸的4倍，對(duì)細(xì)菌和真菌有強(qiáng)烈的殺滅作用[6]。

膨潤(rùn)土是一種無機(jī)高活性火山灰粘土材料，具有強(qiáng)吸水性及離子吸附能力，其主要成分為蒙脫石[7，8]。鑒于氯溴異氰脲酸的殺菌效果和膨潤(rùn)土的強(qiáng)吸水性，本課題組以氯溴異氰脲酸和膨潤(rùn)土為原料配制成人工飼料專用消毒劑，對(duì)家蠶病原體進(jìn)行了消毒試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 材料與藥劑

供試家蠶品種：菁松×皓月，人工飼料飼育。

人工飼料：山東省蠶業(yè)研究所經(jīng)濟(jì)室配制。

供試病原：均由本所蠶病研究室保存。家蠶病原細(xì)菌為本所蠶病室保存的靈菌（Serratia marcescens Bizio），試驗(yàn)時(shí)取菌種一支，加水2～3 mL制成菌懸液，置冰箱中4℃保存?zhèn)溆?。家蠶病原真菌——白僵菌（Beauveria bassiana）、綠僵菌（Nomuraea rileyi Farlow）、黃曲霉（Aspergillus flavus）用蠶蛹培養(yǎng)基繁殖繼代獲取，取分生孢子加適量吐溫-80使其懸浮于滅菌蒸餾水中，經(jīng)2層紗布過濾，白僵菌稀釋至2.0×107 個(gè)/mL，綠僵菌和黃曲霉稀釋至5.0×107個(gè)/mL，置冰箱中4℃保存?zhèn)溆茫４鏁r(shí)間不超過30 d。

供試培養(yǎng)基：營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：蛋白胨10 g，牛肉膏5 g，氯化鈉5 g，瓊脂15 g，蒸餾水1 000 mL。加熱溶解后調(diào)pH值至 7.2～7.4，分裝，于121℃ 壓力蒸汽滅菌 20 min備用。沙堡瓊脂培養(yǎng)基：葡萄糖40 g，蛋白胨10 g，瓊脂20 g，蒸餾水1 000 mL。將上述成分混合后，加熱至完全溶解，調(diào)pH值至5.6±0.2，于115℃壓力蒸汽滅菌 30 min備用。

供試藥劑：50%氯溴異氰脲酸，由魯西愛農(nóng)化工有限公司提供；膨潤(rùn)土：由濰坊市坊子區(qū)興隆膨潤(rùn)土廠提供。

1.2 對(duì)病原細(xì)菌的消毒試驗(yàn)

向直徑90 mm的無菌平皿中注入20 mL熔化的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，凝固，冷卻至室溫。將配制好的靈菌菌液在每皿培養(yǎng)基上均勻涂抹3個(gè)直徑為20 mm的菌圈，然后把質(zhì)量濃度為0.05%、0.1%、0.2%、0.5%、1.0%的消毒劑按60 g/m2均勻撒在培養(yǎng)基上，密封培養(yǎng)皿，37℃ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h，觀察菌落生長(zhǎng)情況。以涂抹菌不做處理為毒對(duì)照，并以在培養(yǎng)基上涂抹無菌水作為空白對(duì)照。每處理重復(fù)3皿。

1.3 對(duì)病原真菌的消毒試驗(yàn)

向直徑90 mm的無菌平皿中注入20 mL熔化的沙堡瓊脂培養(yǎng)基，凝固，冷卻至室溫。將配制好的菌液在每皿培養(yǎng)基上均勻涂抹3個(gè)直徑為20 mm的菌圈，然后把質(zhì)量濃度為0.2%、0.5%、1.0%、2.0%的消毒劑按60 g/m2均勻撒在培養(yǎng)基上，密封培養(yǎng)皿，白僵菌、綠僵菌在25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h，黃曲霉在30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h，觀察菌落生長(zhǎng)情況。以涂抹菌不做處理為毒對(duì)照，并以在培養(yǎng)基上涂抹無菌水作為空白對(duì)照。每處理重復(fù)3皿。

1.4 對(duì)家蠶生理影響試驗(yàn)

二齡起蠶分區(qū)飼養(yǎng)2 d，剔除弱小蠶，定數(shù)，每區(qū)50頭，90%見眠后按60 g/m2撒含量為1.0%的人工飼料消毒劑，同時(shí)設(shè)不撒消毒劑為空白對(duì)照，調(diào)查起蠶率和起蠶體重。

1.5 藥物的穩(wěn)定性試驗(yàn)

配制質(zhì)量濃度為1.0%的消毒劑，置于密封的聚乙烯塑料袋內(nèi)，在溫度為40℃、濕度為80%的條件下保存，放置1、3、30 d后測(cè)其氯溴異氰脲酸的含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 人工飼料消毒劑對(duì)病原細(xì)菌和真菌的殺滅效果

結(jié)果（表1、表2）可以看出，人工飼料消毒劑對(duì)靈菌、白僵菌、綠僵菌和曲霉菌殺滅的臨界濃度均為0.5%。

2.2 人工飼料消毒劑對(duì)家蠶起蠶率和體重的影響

2.3 人工飼料消毒劑穩(wěn)定性

配制質(zhì)量濃度為1.0%的人工飼料消毒劑，置于密封的聚乙烯塑料袋內(nèi)，在溫度為40℃、濕度為80%的條件下保存，放置1、3、30 d后，有效氯分別下降了4.6%、13.0%、26.7%，表明氯溴異氰脲酸和膨潤(rùn)土混合在一起不太穩(wěn)定，應(yīng)當(dāng)分別包裝。

3 討論

本試驗(yàn)研究了以氯溴異氰脲酸和膨潤(rùn)土為原料的人工飼料專用消毒劑對(duì)家蠶病原的消毒效果。體外培養(yǎng)基抑菌試驗(yàn)表明，該消毒劑對(duì)靈菌、白僵菌、綠僵菌和曲霉菌的最低殺滅質(zhì)量濃度為0.5%，而且含量為1.0%的消毒劑對(duì)家蠶的起蠶率和體重?zé)o不良影響。穩(wěn)定性研究表明，氯溴異氰脲酸和膨潤(rùn)土混合在一起不太穩(wěn)定，應(yīng)當(dāng)分別包裝，配制后應(yīng)保存在密閉容器內(nèi)，并在24 h內(nèi)用完。綜上所述，人工飼料消毒劑對(duì)家蠶病原細(xì)菌和真菌有較好的殺滅效果，可以在人工飼料養(yǎng)蠶中推廣應(yīng)用。

參 考 文 獻(xiàn)：

[1]

張?jiān)氯A，徐安英.家蠶人工飼料研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2006，34（17）：4326-4327.

[2] 李化秀，張亞平，婁齊年.家蠶原蠶稚蠶人工飼料育研究初報(bào)[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005（3）：64-66.

[3] 顧寅鈺，李化秀，施新琴，等.家蠶人工飼料中桑葉粉及大豆粉含量與質(zhì)量對(duì)稚蠶、壯蠶及繭質(zhì)的影響[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，45（5）：105-107.

[4] 崔為正，王彥文，張國(guó)基，等.家蠶人工飼料防腐劑和抗菌素的篩選研究[J].山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1999，30（3）：219-225.

[5] 凌關(guān)庭.食品添加劑手冊(cè)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，1997.

[6] 師紅梅，毛紅彥，劉雅，等.氯溴異氰脲酸防治幾類主要病害藥效研究[J].河南科技學(xué)院學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2005，33（1）：63-65.

[7] 朱偉，林城，李磊，等.以膨潤(rùn)土為輔助添加劑固化/穩(wěn)定化污泥的試驗(yàn)研究[J].環(huán)境科學(xué)，2007，28（5）：1020-1024.

[8] 宋吉英.化學(xué)添加劑對(duì)玉米吸收汞的抑制作用研究[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009（8）：63-65.endprint

摘 要：

體外培養(yǎng)基抑菌試驗(yàn)表明：人工飼料專用消毒劑對(duì)靈菌、白僵菌、綠僵菌和曲霉菌的最低殺滅質(zhì)量濃度為0.5%；生物試驗(yàn)表明：含量為1.0%的消毒劑對(duì)家蠶的生長(zhǎng)發(fā)育無不良影響。

關(guān)鍵詞：家蠶；人工飼料；消毒劑；消毒效果

中圖分類號(hào)：S884.1+1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A 文章編號(hào)：1001-4942（2014）04-0097-03

人工飼料養(yǎng)蠶是適應(yīng)專業(yè)化、規(guī)模化蠶繭生產(chǎn)技術(shù)，提高養(yǎng)蠶工效、節(jié)省飼育設(shè)施的一條重要途徑[1，2]。家蠶人工飼料的主要組成成分是桑葉粉和大豆粉，其含水率高，營(yíng)養(yǎng)豐富，又需在高溫多濕的環(huán)境條件下用于養(yǎng)蠶，因此極易腐敗變質(zhì)，滋生細(xì)菌和真菌，誘發(fā)家蠶的細(xì)菌性敗血病和僵病，嚴(yán)重影響?zhàn)B蠶效果[3，4]。為防止人工飼料變質(zhì)并保持其品質(zhì)穩(wěn)定性，國(guó)內(nèi)外廣泛采用在人工飼料中添加防腐劑。防腐劑是一類能抑制微生物活動(dòng)、防止微生物造成飼料腐敗變質(zhì)，從而延長(zhǎng)保質(zhì)期的食品添加劑[5]。在高溫高濕特別是農(nóng)村比較簡(jiǎn)陋的養(yǎng)蠶條件下進(jìn)行人工飼料養(yǎng)蠶，僅靠添加防腐劑很難達(dá)到消毒及齡期末除濕干燥的要求，飼料極易霉變，誘發(fā)蠶病，影響家蠶就眠。因此，研制一種既能消毒殺菌又能在齡期末起到除濕止桑的多用途消毒劑，是人工飼育技術(shù)必須解決的問題。

氯溴異氰脲酸（C3HO3N3ClBr）是一種高效、廣譜的內(nèi)吸性殺菌劑，其水溶液呈酸性。將氯溴異氰脲酸藥液噴施在作物表面能緩慢地釋放次溴酸（HOBr）和次氯酸（HOCl），次溴酸的活性是次氯酸的4倍，對(duì)細(xì)菌和真菌有強(qiáng)烈的殺滅作用[6]。

膨潤(rùn)土是一種無機(jī)高活性火山灰粘土材料，具有強(qiáng)吸水性及離子吸附能力，其主要成分為蒙脫石[7，8]。鑒于氯溴異氰脲酸的殺菌效果和膨潤(rùn)土的強(qiáng)吸水性，本課題組以氯溴異氰脲酸和膨潤(rùn)土為原料配制成人工飼料專用消毒劑，對(duì)家蠶病原體進(jìn)行了消毒試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 材料與藥劑

供試家蠶品種：菁松×皓月，人工飼料飼育。

人工飼料：山東省蠶業(yè)研究所經(jīng)濟(jì)室配制。

供試病原：均由本所蠶病研究室保存。家蠶病原細(xì)菌為本所蠶病室保存的靈菌（Serratia marcescens Bizio），試驗(yàn)時(shí)取菌種一支，加水2～3 mL制成菌懸液，置冰箱中4℃保存?zhèn)溆?。家蠶病原真菌——白僵菌（Beauveria bassiana）、綠僵菌（Nomuraea rileyi Farlow）、黃曲霉（Aspergillus flavus）用蠶蛹培養(yǎng)基繁殖繼代獲取，取分生孢子加適量吐溫-80使其懸浮于滅菌蒸餾水中，經(jīng)2層紗布過濾，白僵菌稀釋至2.0×107 個(gè)/mL，綠僵菌和黃曲霉稀釋至5.0×107個(gè)/mL，置冰箱中4℃保存?zhèn)溆?，保存時(shí)間不超過30 d。

供試培養(yǎng)基：營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：蛋白胨10 g，牛肉膏5 g，氯化鈉5 g，瓊脂15 g，蒸餾水1 000 mL。加熱溶解后調(diào)pH值至 7.2～7.4，分裝，于121℃ 壓力蒸汽滅菌 20 min備用。沙堡瓊脂培養(yǎng)基：葡萄糖40 g，蛋白胨10 g，瓊脂20 g，蒸餾水1 000 mL。將上述成分混合后，加熱至完全溶解，調(diào)pH值至5.6±0.2，于115℃壓力蒸汽滅菌 30 min備用。

供試藥劑：50%氯溴異氰脲酸，由魯西愛農(nóng)化工有限公司提供；膨潤(rùn)土：由濰坊市坊子區(qū)興隆膨潤(rùn)土廠提供。

1.2 對(duì)病原細(xì)菌的消毒試驗(yàn)

向直徑90 mm的無菌平皿中注入20 mL熔化的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，凝固，冷卻至室溫。將配制好的靈菌菌液在每皿培養(yǎng)基上均勻涂抹3個(gè)直徑為20 mm的菌圈，然后把質(zhì)量濃度為0.05%、0.1%、0.2%、0.5%、1.0%的消毒劑按60 g/m2均勻撒在培養(yǎng)基上，密封培養(yǎng)皿，37℃ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h，觀察菌落生長(zhǎng)情況。以涂抹菌不做處理為毒對(duì)照，并以在培養(yǎng)基上涂抹無菌水作為空白對(duì)照。每處理重復(fù)3皿。

1.3 對(duì)病原真菌的消毒試驗(yàn)

向直徑90 mm的無菌平皿中注入20 mL熔化的沙堡瓊脂培養(yǎng)基，凝固，冷卻至室溫。將配制好的菌液在每皿培養(yǎng)基上均勻涂抹3個(gè)直徑為20 mm的菌圈，然后把質(zhì)量濃度為0.2%、0.5%、1.0%、2.0%的消毒劑按60 g/m2均勻撒在培養(yǎng)基上，密封培養(yǎng)皿，白僵菌、綠僵菌在25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h，黃曲霉在30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h，觀察菌落生長(zhǎng)情況。以涂抹菌不做處理為毒對(duì)照，并以在培養(yǎng)基上涂抹無菌水作為空白對(duì)照。每處理重復(fù)3皿。

1.4 對(duì)家蠶生理影響試驗(yàn)

二齡起蠶分區(qū)飼養(yǎng)2 d，剔除弱小蠶，定數(shù)，每區(qū)50頭，90%見眠后按60 g/m2撒含量為1.0%的人工飼料消毒劑，同時(shí)設(shè)不撒消毒劑為空白對(duì)照，調(diào)查起蠶率和起蠶體重。

1.5 藥物的穩(wěn)定性試驗(yàn)

配制質(zhì)量濃度為1.0%的消毒劑，置于密封的聚乙烯塑料袋內(nèi)，在溫度為40℃、濕度為80%的條件下保存，放置1、3、30 d后測(cè)其氯溴異氰脲酸的含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 人工飼料消毒劑對(duì)病原細(xì)菌和真菌的殺滅效果

結(jié)果（表1、表2）可以看出，人工飼料消毒劑對(duì)靈菌、白僵菌、綠僵菌和曲霉菌殺滅的臨界濃度均為0.5%。

2.2 人工飼料消毒劑對(duì)家蠶起蠶率和體重的影響

2.3 人工飼料消毒劑穩(wěn)定性

配制質(zhì)量濃度為1.0%的人工飼料消毒劑，置于密封的聚乙烯塑料袋內(nèi)，在溫度為40℃、濕度為80%的條件下保存，放置1、3、30 d后，有效氯分別下降了4.6%、13.0%、26.7%，表明氯溴異氰脲酸和膨潤(rùn)土混合在一起不太穩(wěn)定，應(yīng)當(dāng)分別包裝。

3 討論

本試驗(yàn)研究了以氯溴異氰脲酸和膨潤(rùn)土為原料的人工飼料專用消毒劑對(duì)家蠶病原的消毒效果。體外培養(yǎng)基抑菌試驗(yàn)表明，該消毒劑對(duì)靈菌、白僵菌、綠僵菌和曲霉菌的最低殺滅質(zhì)量濃度為0.5%，而且含量為1.0%的消毒劑對(duì)家蠶的起蠶率和體重?zé)o不良影響。穩(wěn)定性研究表明，氯溴異氰脲酸和膨潤(rùn)土混合在一起不太穩(wěn)定，應(yīng)當(dāng)分別包裝，配制后應(yīng)保存在密閉容器內(nèi)，并在24 h內(nèi)用完。綜上所述，人工飼料消毒劑對(duì)家蠶病原細(xì)菌和真菌有較好的殺滅效果，可以在人工飼料養(yǎng)蠶中推廣應(yīng)用。

參 考 文 獻(xiàn)：

[1]

張?jiān)氯A，徐安英.家蠶人工飼料研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2006，34（17）：4326-4327.

[2] 李化秀，張亞平，婁齊年.家蠶原蠶稚蠶人工飼料育研究初報(bào)[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005（3）：64-66.

[3] 顧寅鈺，李化秀，施新琴，等.家蠶人工飼料中桑葉粉及大豆粉含量與質(zhì)量對(duì)稚蠶、壯蠶及繭質(zhì)的影響[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，45（5）：105-107.

[4] 崔為正，王彥文，張國(guó)基，等.家蠶人工飼料防腐劑和抗菌素的篩選研究[J].山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1999，30（3）：219-225.

[5] 凌關(guān)庭.食品添加劑手冊(cè)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，1997.

[6] 師紅梅，毛紅彥，劉雅，等.氯溴異氰脲酸防治幾類主要病害藥效研究[J].河南科技學(xué)院學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2005，33（1）：63-65.

[7] 朱偉，林城，李磊，等.以膨潤(rùn)土為輔助添加劑固化/穩(wěn)定化污泥的試驗(yàn)研究[J].環(huán)境科學(xué)，2007，28（5）：1020-1024.

[8] 宋吉英.化學(xué)添加劑對(duì)玉米吸收汞的抑制作用研究[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009（8）：63-65.endprint

摘 要：

體外培養(yǎng)基抑菌試驗(yàn)表明：人工飼料專用消毒劑對(duì)靈菌、白僵菌、綠僵菌和曲霉菌的最低殺滅質(zhì)量濃度為0.5%；生物試驗(yàn)表明：含量為1.0%的消毒劑對(duì)家蠶的生長(zhǎng)發(fā)育無不良影響。

關(guān)鍵詞：家蠶；人工飼料；消毒劑；消毒效果

中圖分類號(hào)：S884.1+1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A 文章編號(hào)：1001-4942（2014）04-0097-03

人工飼料養(yǎng)蠶是適應(yīng)專業(yè)化、規(guī)?；Q繭生產(chǎn)技術(shù)，提高養(yǎng)蠶工效、節(jié)省飼育設(shè)施的一條重要途徑[1，2]。家蠶人工飼料的主要組成成分是桑葉粉和大豆粉，其含水率高，營(yíng)養(yǎng)豐富，又需在高溫多濕的環(huán)境條件下用于養(yǎng)蠶，因此極易腐敗變質(zhì)，滋生細(xì)菌和真菌，誘發(fā)家蠶的細(xì)菌性敗血病和僵病，嚴(yán)重影響?zhàn)B蠶效果[3，4]。為防止人工飼料變質(zhì)并保持其品質(zhì)穩(wěn)定性，國(guó)內(nèi)外廣泛采用在人工飼料中添加防腐劑。防腐劑是一類能抑制微生物活動(dòng)、防止微生物造成飼料腐敗變質(zhì)，從而延長(zhǎng)保質(zhì)期的食品添加劑[5]。在高溫高濕特別是農(nóng)村比較簡(jiǎn)陋的養(yǎng)蠶條件下進(jìn)行人工飼料養(yǎng)蠶，僅靠添加防腐劑很難達(dá)到消毒及齡期末除濕干燥的要求，飼料極易霉變，誘發(fā)蠶病，影響家蠶就眠。因此，研制一種既能消毒殺菌又能在齡期末起到除濕止桑的多用途消毒劑，是人工飼育技術(shù)必須解決的問題。

氯溴異氰脲酸（C3HO3N3ClBr）是一種高效、廣譜的內(nèi)吸性殺菌劑，其水溶液呈酸性。將氯溴異氰脲酸藥液噴施在作物表面能緩慢地釋放次溴酸（HOBr）和次氯酸（HOCl），次溴酸的活性是次氯酸的4倍，對(duì)細(xì)菌和真菌有強(qiáng)烈的殺滅作用[6]。

膨潤(rùn)土是一種無機(jī)高活性火山灰粘土材料，具有強(qiáng)吸水性及離子吸附能力，其主要成分為蒙脫石[7，8]。鑒于氯溴異氰脲酸的殺菌效果和膨潤(rùn)土的強(qiáng)吸水性，本課題組以氯溴異氰脲酸和膨潤(rùn)土為原料配制成人工飼料專用消毒劑，對(duì)家蠶病原體進(jìn)行了消毒試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 材料與藥劑

供試家蠶品種：菁松×皓月，人工飼料飼育。

人工飼料：山東省蠶業(yè)研究所經(jīng)濟(jì)室配制。

供試病原：均由本所蠶病研究室保存。家蠶病原細(xì)菌為本所蠶病室保存的靈菌（Serratia marcescens Bizio），試驗(yàn)時(shí)取菌種一支，加水2～3 mL制成菌懸液，置冰箱中4℃保存?zhèn)溆谩＜倚Q病原真菌——白僵菌（Beauveria bassiana）、綠僵菌（Nomuraea rileyi Farlow）、黃曲霉（Aspergillus flavus）用蠶蛹培養(yǎng)基繁殖繼代獲取，取分生孢子加適量吐溫-80使其懸浮于滅菌蒸餾水中，經(jīng)2層紗布過濾，白僵菌稀釋至2.0×107 個(gè)/mL，綠僵菌和黃曲霉稀釋至5.0×107個(gè)/mL，置冰箱中4℃保存?zhèn)溆?，保存時(shí)間不超過30 d。

供試培養(yǎng)基：營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：蛋白胨10 g，牛肉膏5 g，氯化鈉5 g，瓊脂15 g，蒸餾水1 000 mL。加熱溶解后調(diào)pH值至 7.2～7.4，分裝，于121℃ 壓力蒸汽滅菌 20 min備用。沙堡瓊脂培養(yǎng)基：葡萄糖40 g，蛋白胨10 g，瓊脂20 g，蒸餾水1 000 mL。將上述成分混合后，加熱至完全溶解，調(diào)pH值至5.6±0.2，于115℃壓力蒸汽滅菌 30 min備用。

供試藥劑：50%氯溴異氰脲酸，由魯西愛農(nóng)化工有限公司提供；膨潤(rùn)土：由濰坊市坊子區(qū)興隆膨潤(rùn)土廠提供。

1.2 對(duì)病原細(xì)菌的消毒試驗(yàn)

向直徑90 mm的無菌平皿中注入20 mL熔化的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，凝固，冷卻至室溫。將配制好的靈菌菌液在每皿培養(yǎng)基上均勻涂抹3個(gè)直徑為20 mm的菌圈，然后把質(zhì)量濃度為0.05%、0.1%、0.2%、0.5%、1.0%的消毒劑按60 g/m2均勻撒在培養(yǎng)基上，密封培養(yǎng)皿，37℃ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h，觀察菌落生長(zhǎng)情況。以涂抹菌不做處理為毒對(duì)照，并以在培養(yǎng)基上涂抹無菌水作為空白對(duì)照。每處理重復(fù)3皿。

1.3 對(duì)病原真菌的消毒試驗(yàn)

向直徑90 mm的無菌平皿中注入20 mL熔化的沙堡瓊脂培養(yǎng)基，凝固，冷卻至室溫。將配制好的菌液在每皿培養(yǎng)基上均勻涂抹3個(gè)直徑為20 mm的菌圈，然后把質(zhì)量濃度為0.2%、0.5%、1.0%、2.0%的消毒劑按60 g/m2均勻撒在培養(yǎng)基上，密封培養(yǎng)皿，白僵菌、綠僵菌在25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h，黃曲霉在30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h，觀察菌落生長(zhǎng)情況。以涂抹菌不做處理為毒對(duì)照，并以在培養(yǎng)基上涂抹無菌水作為空白對(duì)照。每處理重復(fù)3皿。

1.4 對(duì)家蠶生理影響試驗(yàn)

二齡起蠶分區(qū)飼養(yǎng)2 d，剔除弱小蠶，定數(shù)，每區(qū)50頭，90%見眠后按60 g/m2撒含量為1.0%的人工飼料消毒劑，同時(shí)設(shè)不撒消毒劑為空白對(duì)照，調(diào)查起蠶率和起蠶體重。

1.5 藥物的穩(wěn)定性試驗(yàn)

配制質(zhì)量濃度為1.0%的消毒劑，置于密封的聚乙烯塑料袋內(nèi)，在溫度為40℃、濕度為80%的條件下保存，放置1、3、30 d后測(cè)其氯溴異氰脲酸的含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 人工飼料消毒劑對(duì)病原細(xì)菌和真菌的殺滅效果

結(jié)果（表1、表2）可以看出，人工飼料消毒劑對(duì)靈菌、白僵菌、綠僵菌和曲霉菌殺滅的臨界濃度均為0.5%。

2.2 人工飼料消毒劑對(duì)家蠶起蠶率和體重的影響

2.3 人工飼料消毒劑穩(wěn)定性

配制質(zhì)量濃度為1.0%的人工飼料消毒劑，置于密封的聚乙烯塑料袋內(nèi)，在溫度為40℃、濕度為80%的條件下保存，放置1、3、30 d后，有效氯分別下降了4.6%、13.0%、26.7%，表明氯溴異氰脲酸和膨潤(rùn)土混合在一起不太穩(wěn)定，應(yīng)當(dāng)分別包裝。

3 討論

本試驗(yàn)研究了以氯溴異氰脲酸和膨潤(rùn)土為原料的人工飼料專用消毒劑對(duì)家蠶病原的消毒效果。體外培養(yǎng)基抑菌試驗(yàn)表明，該消毒劑對(duì)靈菌、白僵菌、綠僵菌和曲霉菌的最低殺滅質(zhì)量濃度為0.5%，而且含量為1.0%的消毒劑對(duì)家蠶的起蠶率和體重?zé)o不良影響。穩(wěn)定性研究表明，氯溴異氰脲酸和膨潤(rùn)土混合在一起不太穩(wěn)定，應(yīng)當(dāng)分別包裝，配制后應(yīng)保存在密閉容器內(nèi)，并在24 h內(nèi)用完。綜上所述，人工飼料消毒劑對(duì)家蠶病原細(xì)菌和真菌有較好的殺滅效果，可以在人工飼料養(yǎng)蠶中推廣應(yīng)用。

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