王洪波　陳美霞　趙從凱　侯術(shù)海　韓磊　丁雪珍

摘要：對適于蟹味菇（Hypsizygus marmoreus）液體培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進行了篩選研究，結(jié)果表明，其適宜的液體培養(yǎng)基組成為：3%玉米粉，1.5%麩皮水，0.3%維生素母液，KH2PO4 0.1%，MgSO4 0.5%；適宜搖瓶的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)基初始pH值為5.5，在25 ℃，160 r/min下，裝料系數(shù)60%，接種量1.5管，振蕩培養(yǎng)5 d。

關(guān)鍵詞：蟹味菇；發(fā)酵條件；培養(yǎng)基

中圖分類號：TQ920.6文獻標志碼：A文章編號：1002-1302（2014）01-0206-02

收稿日期：2013-05-19

基金項目：2010年山東省農(nóng)業(yè)良種化重點項目。

作者簡介：王洪波（1977—），男，山東淄博人，碩士，副教授，研究方向為微生物發(fā)酵與調(diào)控。E-mail：gongzuoxuexi@126.com。蟹味菇（Hypsizygus marmoreus）屬擔子菌亞門（Basidiomycotina）層菌綱（Hymenomycetes）傘菌目（Agaricales）白蘑科（Tricholomataceae）玉蕈屬（Hypsizygus），是一種大型木質(zhì)腐生真菌，主要分布于日本、歐洲、北美和西伯利亞地區(qū)。蟹味菇為中低溫和變溫結(jié)實型菌類，營養(yǎng)豐富，包括8 種人體必需氨基酸，其中賴氨酸、精氨酸含量高于一般菇類，對于增智、增高起著重要作用，同時蟹味菇有防止便秘、抗癌、防癌，提高免疫力的獨特功效。因此，蟹味菇作為一種低熱量、低脂肪的食品，受到人們的青睞，在國內(nèi)外市場上供不應求。

1材料和方法

1.1供試菌株

蟹味菇菌種由濰坊職業(yè)學院發(fā)酵實驗室提供。

1.2培養(yǎng)基

（1）平板培養(yǎng)基：馬鈴薯20%，葡萄糖1%，紅糖1%，酵母浸膏0.25%，牛肉膏3%，MgSO4 0.1%，KH2PO4 02%，維生素B1 10 mg/L，水 1 000 mL，pH值自然。（2）母種活化培養(yǎng)基（改良PDA培養(yǎng)基）：馬鈴薯200 g，蔗糖20 g，瓊脂20 g，MgSO4 0.5 g，KH2PO4 1.0 g，維生素母液2 mL，水 1 000 mL，pH自然。其中維生素母液配方為：鹽酸硫胺素（維生素B1）0.05%，煙酸（維生素PP）0.25%，鹽酸吡哆醇（維生素B6）005%，甘氨酸1%。 （3）碳源試驗基礎培養(yǎng)基為蛋白胨 20%，KH2PO4 01%，MgSO4 0.5%，維生素母液 2 mL/L，pH自然。（4）氮源試驗基礎培養(yǎng)基為葡萄糖2.0%，KH2PO4 01%，MgSO4 0.5%，維生素母液 2 mL/L，pH自然。

1.3方法

1.3.1母種活化將蟹味菇母種接入母種活化培養(yǎng)基斜面，25 ℃，培養(yǎng)8～10 d，每隔1 d觀察菌絲生長狀況，待菌絲長滿斜面，選擇菌絲生長健壯的斜面?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2最佳碳氮源篩選

1.3.2.1最佳碳源篩選[1]以碳源試驗基礎培養(yǎng)基為基礎，分別將2%葡萄糖、綿白糖、玉米粉、淀粉、紅糖、蔗糖加入到培養(yǎng)基，共設6個處理，每處理3次重復。培養(yǎng)瓶裝料系數(shù)為40%（250 mL培養(yǎng)瓶裝培養(yǎng)液100 mL），于25 ℃，140 r/min培養(yǎng)。每隔1 d鏡檢，振蕩培養(yǎng)5 d，取整瓶發(fā)酵液并測菌絲干質(zhì)量（105 ℃，烘干至恒質(zhì)量）。

1.3.2.2最佳氮源篩選以氮源試驗基礎培養(yǎng)基為基礎，分別將2%牛肉膏、蛋白胨、硝酸銨、尿素、麩皮水、酵母膏加入到培養(yǎng)基，共設6個處理，每處理3次重復。培養(yǎng)瓶裝料系數(shù)為40%（250 mL培養(yǎng)瓶裝培養(yǎng)液100 mL），于25 ℃，140 r/min 培養(yǎng)。每隔1 d鏡檢，振蕩培養(yǎng)5 d，取整瓶發(fā)酵液并測菌絲干質(zhì)量（105 ℃，烘干至恒質(zhì)量）。

1.3.3培養(yǎng)基最佳配方篩選[2]對最佳碳氮源濃度及維生素母液濃度進行3因素3水平正交試驗（表1）。培養(yǎng)瓶裝料系數(shù)為40%，于25 ℃，140 r/min培養(yǎng)。每隔1 d鏡檢，振蕩培養(yǎng)5 d，取整瓶發(fā)酵液并測菌絲干質(zhì)量（105 ℃，烘干至恒質(zhì)量）。共計9個處理，每個處理3次重復。

表1蟹味菇液體發(fā)酵條件L9（33）正交試驗因素和水平

A：碳源濃度（%）1B：氮源濃度（%）1C：維生素母液（%）111.010.3211.510.4312.010.5

1.3.4培養(yǎng)溫度篩選試驗以最佳培養(yǎng)基配方為基礎，培養(yǎng)瓶裝料系數(shù)為40%（250 mL培養(yǎng)瓶裝培養(yǎng)液100 mL），pH值自然。設20、25、30 ℃3個處理，每處理3次重復。 140 r/min 培養(yǎng)。每隔1 d鏡檢，振蕩培養(yǎng)5 d，取整瓶發(fā)酵液并測菌絲干質(zhì)量（105 ℃，烘干至恒質(zhì)量）。

1.3.5培養(yǎng)基初始pH值篩選試驗[3]以最佳培養(yǎng)基配方為基礎，培養(yǎng)瓶裝料系數(shù)為40%，設pH值為4.5、5.0、5.5、60、6.5、7.0、7.5，7個處理，每處理3次重復。于25 ℃下，140 r/min 培養(yǎng)。每隔1 d鏡檢，振蕩培養(yǎng)5 d，取整瓶發(fā)酵液并測菌絲干質(zhì)量（105 ℃，烘干至恒質(zhì)量）。

1.3.6搖床轉(zhuǎn)速篩選試驗以最佳培養(yǎng)基配方為基礎，培養(yǎng)瓶裝料系數(shù)為40%，自然pH。設120 、140 、160 、180 r/min 4個處理，每處理3次重復。于25 ℃培養(yǎng)。每隔1 d鏡檢，振蕩培養(yǎng)5 d，取整瓶發(fā)酵液并測菌絲干質(zhì)量（105 ℃，烘干至恒質(zhì)量）。

1.3.7培養(yǎng)時間篩選試驗以最佳培養(yǎng)基配方為基礎，培養(yǎng)瓶裝料系數(shù)為40%，自然pH值。設培養(yǎng)3、5、7 d，3個處理，每處理設3次重復。于25 ℃，140 r/min培養(yǎng)。每隔1 d鏡檢，振蕩培養(yǎng)5 d，取整瓶發(fā)酵液并測菌絲干質(zhì)量（105 ℃，烘干至恒質(zhì)量）。

1.3.8裝料系數(shù)篩選試驗以最佳培養(yǎng)基為基礎，分別設培養(yǎng)瓶裝料系數(shù)為20% 、40%、60% 3個處理，每處理3次重復。于25 ℃，140 r/min培養(yǎng)。每隔1 d鏡檢，振蕩培養(yǎng)5 d，取整瓶發(fā)酵液并測菌絲干質(zhì)量（105 ℃，烘干至恒質(zhì)量）。

1.3.9接種量篩選試驗以最佳培養(yǎng)基為基礎，分別設接種量0.5管、1管、1.5管、2管、2.5管、3管6個處理，每處理3次重復。培養(yǎng)瓶裝料系數(shù)為40%，于25 ℃，140 r/min培養(yǎng)。每隔1 d鏡檢，振蕩培養(yǎng)5 d，取整瓶發(fā)酵液并測菌絲干質(zhì)量（105 ℃，烘干至恒質(zhì)量）。

2結(jié)果與分析

2.1碳源對蟹味菇液體培養(yǎng)的影響

由表2可知，蟹味菇菌絲在添加2%玉米粉的碳源試驗基礎培養(yǎng)基中生長相對較好，菌絲量最大。其余碳源對蟹味菇菌絲生長影響大小依次為綿白糖>淀粉>紅糖>葡萄糖>蔗糖。

表2碳源對蟹味菇液體培養(yǎng)的影響

碳源1菌絲干質(zhì)量（mg/mL）葡萄糖13.4eE綿白糖15.5bB淀粉14.2cC玉米粉19.0aA紅糖13.8dD蔗糖13.2fE

2.2氮源對蟹味菇液體培養(yǎng)的影響

蟹味菇菌絲在添加2%麩皮水的氮源試驗基礎培養(yǎng)基中生長相對較好，菌絲量最大，其次為牛肉膏、蛋白胨、酵母膏。而尿素、硝酸銨作為氮源的效果較差（表3）。

表3氮源對蟹味菇液體培養(yǎng)的影響

氮源1菌絲干質(zhì)量（mg/mL）牛肉膏14.0bB蛋白胨14.0bB尿素10.8dD硝酸銨10.7dD麩皮水15.3aA酵母膏13.3cC

2.3培養(yǎng)基配方優(yōu)化

由表4可知，對蟹味菇菌絲生長影響大小的因素為玉米粉>麩皮水>維生素母液，即碳源濃度對蟹味菇菌絲生長的影響最大，其次為氮源濃度，維生素母液對蟹味菇菌絲生長的影響效果最小。根據(jù)正交試驗結(jié)果，蟹味菇液體培養(yǎng)的最佳配方為3%玉米粉，1.5%麩皮水，0.3%維生素母液。

2.4培養(yǎng)溫度對蟹味菇液體培養(yǎng)的影響

在25 ℃下，蟹味菇菌絲生長相對較好，其次分別為30 ℃，20 ℃（表5）。

2.5培養(yǎng)基初始pH值對蟹味菇液體培養(yǎng)的影響

由表6可知，蟹味菇菌絲在培養(yǎng)基初始pH值為5.5的酸性環(huán)境條件下生長最好，菌絲生長量最大，其次為培養(yǎng)基初

參考文獻：

[1]楊榮玲，陳衛(wèi)東，趙祥杰，等. 巴西蟲草液體培養(yǎng)條件的優(yōu)化[J]. 中國食用菌，2007，26（1）：50-54.

[2]張文雋，吳亞召，雷萍，等. 樺樹桑黃液體發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化研究[J]. 中國食用菌，2010，29（6）：24-25.

[3]江艷華，江曉路，王鵬，等. 白靈菇液體培養(yǎng)條件的研究及栽培試驗[J]. 食用菌學報，2005，12（1）：37-41.孫勇，蔣繼宏. 紅緣擬層孔菌的培養(yǎng)條件[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學，2014，42（1）：208-210.

1.3.9接種量篩選試驗以最佳培養(yǎng)基為基礎，分別設接種量0.5管、1管、1.5管、2管、2.5管、3管6個處理，每處理3次重復。培養(yǎng)瓶裝料系數(shù)為40%，于25 ℃，140 r/min培養(yǎng)。每隔1 d鏡檢，振蕩培養(yǎng)5 d，取整瓶發(fā)酵液并測菌絲干質(zhì)量（105 ℃，烘干至恒質(zhì)量）。

2結(jié)果與分析

2.1碳源對蟹味菇液體培養(yǎng)的影響

由表2可知，蟹味菇菌絲在添加2%玉米粉的碳源試驗基礎培養(yǎng)基中生長相對較好，菌絲量最大。其余碳源對蟹味菇菌絲生長影響大小依次為綿白糖>淀粉>紅糖>葡萄糖>蔗糖。

表2碳源對蟹味菇液體培養(yǎng)的影響

碳源1菌絲干質(zhì)量（mg/mL）葡萄糖13.4eE綿白糖15.5bB淀粉14.2cC玉米粉19.0aA紅糖13.8dD蔗糖13.2fE

2.2氮源對蟹味菇液體培養(yǎng)的影響

蟹味菇菌絲在添加2%麩皮水的氮源試驗基礎培養(yǎng)基中生長相對較好，菌絲量最大，其次為牛肉膏、蛋白胨、酵母膏。而尿素、硝酸銨作為氮源的效果較差（表3）。

表3氮源對蟹味菇液體培養(yǎng)的影響

氮源1菌絲干質(zhì)量（mg/mL）牛肉膏14.0bB蛋白胨14.0bB尿素10.8dD硝酸銨10.7dD麩皮水15.3aA酵母膏13.3cC

2.3培養(yǎng)基配方優(yōu)化

由表4可知，對蟹味菇菌絲生長影響大小的因素為玉米粉>麩皮水>維生素母液，即碳源濃度對蟹味菇菌絲生長的影響最大，其次為氮源濃度，維生素母液對蟹味菇菌絲生長的影響效果最小。根據(jù)正交試驗結(jié)果，蟹味菇液體培養(yǎng)的最佳配方為3%玉米粉，1.5%麩皮水，0.3%維生素母液。

2.4培養(yǎng)溫度對蟹味菇液體培養(yǎng)的影響

在25 ℃下，蟹味菇菌絲生長相對較好，其次分別為30 ℃，20 ℃（表5）。

2.5培養(yǎng)基初始pH值對蟹味菇液體培養(yǎng)的影響

由表6可知，蟹味菇菌絲在培養(yǎng)基初始pH值為5.5的酸性環(huán)境條件下生長最好，菌絲生長量最大，其次為培養(yǎng)基初

參考文獻：

[1]楊榮玲，陳衛(wèi)東，趙祥杰，等. 巴西蟲草液體培養(yǎng)條件的優(yōu)化[J]. 中國食用菌，2007，26（1）：50-54.

[2]張文雋，吳亞召，雷萍，等. 樺樹桑黃液體發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化研究[J]. 中國食用菌，2010，29（6）：24-25.

[3]江艷華，江曉路，王鵬，等. 白靈菇液體培養(yǎng)條件的研究及栽培試驗[J]. 食用菌學報，2005，12（1）：37-41.孫勇，蔣繼宏. 紅緣擬層孔菌的培養(yǎng)條件[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學，2014，42（1）：208-210.

1.3.9接種量篩選試驗以最佳培養(yǎng)基為基礎，分別設接種量0.5管、1管、1.5管、2管、2.5管、3管6個處理，每處理3次重復。培養(yǎng)瓶裝料系數(shù)為40%，于25 ℃，140 r/min培養(yǎng)。每隔1 d鏡檢，振蕩培養(yǎng)5 d，取整瓶發(fā)酵液并測菌絲干質(zhì)量（105 ℃，烘干至恒質(zhì)量）。

2結(jié)果與分析

2.1碳源對蟹味菇液體培養(yǎng)的影響

由表2可知，蟹味菇菌絲在添加2%玉米粉的碳源試驗基礎培養(yǎng)基中生長相對較好，菌絲量最大。其余碳源對蟹味菇菌絲生長影響大小依次為綿白糖>淀粉>紅糖>葡萄糖>蔗糖。

表2碳源對蟹味菇液體培養(yǎng)的影響

碳源1菌絲干質(zhì)量（mg/mL）葡萄糖13.4eE綿白糖15.5bB淀粉14.2cC玉米粉19.0aA紅糖13.8dD蔗糖13.2fE

2.2氮源對蟹味菇液體培養(yǎng)的影響

蟹味菇菌絲在添加2%麩皮水的氮源試驗基礎培養(yǎng)基中生長相對較好，菌絲量最大，其次為牛肉膏、蛋白胨、酵母膏。而尿素、硝酸銨作為氮源的效果較差（表3）。

表3氮源對蟹味菇液體培養(yǎng)的影響

氮源1菌絲干質(zhì)量（mg/mL）牛肉膏14.0bB蛋白胨14.0bB尿素10.8dD硝酸銨10.7dD麩皮水15.3aA酵母膏13.3cC

2.3培養(yǎng)基配方優(yōu)化

由表4可知，對蟹味菇菌絲生長影響大小的因素為玉米粉>麩皮水>維生素母液，即碳源濃度對蟹味菇菌絲生長的影響最大，其次為氮源濃度，維生素母液對蟹味菇菌絲生長的影響效果最小。根據(jù)正交試驗結(jié)果，蟹味菇液體培養(yǎng)的最佳配方為3%玉米粉，1.5%麩皮水，0.3%維生素母液。

2.4培養(yǎng)溫度對蟹味菇液體培養(yǎng)的影響

在25 ℃下，蟹味菇菌絲生長相對較好，其次分別為30 ℃，20 ℃（表5）。

2.5培養(yǎng)基初始pH值對蟹味菇液體培養(yǎng)的影響

由表6可知，蟹味菇菌絲在培養(yǎng)基初始pH值為5.5的酸性環(huán)境條件下生長最好，菌絲生長量最大，其次為培養(yǎng)基初

參考文獻：

[1]楊榮玲，陳衛(wèi)東，趙祥杰，等. 巴西蟲草液體培養(yǎng)條件的優(yōu)化[J]. 中國食用菌，2007，26（1）：50-54.

[2]張文雋，吳亞召，雷萍，等. 樺樹桑黃液體發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化研究[J]. 中國食用菌，2010，29（6）：24-25.

[3]江艷華，江曉路，王鵬，等. 白靈菇液體培養(yǎng)條件的研究及栽培試驗[J]. 食用菌學報，2005，12（1）：37-41.孫勇，蔣繼宏. 紅緣擬層孔菌的培養(yǎng)條件[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學，2014，42（1）：208-210.