崔明超，程 斌，陳宏降，楊雄志，章璐幸

（浙江醫(yī)藥高等專科學(xué)校，浙江 寧波 315100）

玉涎膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

崔明超，程 斌，陳宏降，楊雄志，章璐幸

（浙江醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，浙江 寧波 315100）

目的 建立玉涎膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制方法。方法 采用 TLC法對(duì)制劑中的浙貝母、黨參、桔梗、甘草進(jìn)行鑒別；采用ELSD-HPLC法測(cè)定制劑中貝母素甲和貝母素乙的含量，采用 Agilent1260高效液相色譜儀，Agilent380蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，ZORBAX SB-C18色譜柱（5 μm，4.6 mm×25 cm）；流動(dòng)相：乙腈—水—二乙胺（70∶30∶0.03），流速：1.0 g·L-1；柱溫：30℃；漂移管溫度90℃；進(jìn)樣量：20 μL。結(jié)果 用薄層色譜法能較好的鑒別制劑中浙貝母、黨參、桔梗和甘草。用ELSD-HPLC法測(cè)定制劑中貝母素甲和貝母素乙的含量，貝母素甲、貝母素乙的線性范圍分別是 0.018 5～0.185 g·L-1（r＝0.999 8），0.018 8 ～0.188 g·L-1（r＝0.999 7）。平均加樣回收率為98.59%，RSD為1.27%（n＝6）。結(jié)論 該法操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于玉涎膠囊的質(zhì)量控制。

玉涎膠囊；薄層鑒別；含量測(cè)定

玉涎膠囊源自民間驗(yàn)方玉涎丹，玉涎丹對(duì)哮喘實(shí)癥具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值，對(duì)各型發(fā)作性哮喘（除腎不納氣者外）均有助益，多數(shù)病例服后喘促減緩，咳痰爽利，連續(xù)服用可以逐步治愈。玉涎膠囊是由蛞蝓、浙貝母、黨參、桔梗、甘草等藥材制備而成，用來(lái)治療支氣管性氣喘，療效顯著［1］。為保證本制劑的療效，控制制劑的質(zhì)量，對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究。

1 儀器與試藥

Agilent1260高效液相色譜儀，Agilent380蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。蛞蝓藥材采自寧波市鄞州區(qū)章水鎮(zhèn)，浙貝母、黨參、桔梗、甘草等藥材購(gòu)自寧波市鄞州藥材公司，均經(jīng)浙江醫(yī)藥高等專科學(xué)校楊雄志進(jìn)行品種鑒定。貝母素甲對(duì)照品（供含量測(cè)定用，批號(hào)：110750-201110），貝母素乙對(duì)照品（供含量測(cè)定用，批號(hào)：110751-201111），黨參炔苷（供含量測(cè)定用，批號(hào)：111732-201206），黨參對(duì)照藥材（1057-201211），桔梗對(duì)照藥材（121028-201207），甘草對(duì)照藥材（0904-201206）均由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供；乙醇、石油醚（60～90℃）等試劑由寧波化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，為分析純或色譜純。硅膠 G板由青島海洋化工分廠提供。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 浙貝母的鑒別

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 取貝母素甲對(duì)照品、貝母素乙對(duì)照品，加三氯甲烷制成含量各為 2 g· L-1的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備 取本品膠囊內(nèi)容物5 g，置具塞錐形瓶中，加乙醇50 mL，超聲處理 30min，提取液在水浴上蒸干，浸膏用2%鹽酸 15 mL溶解，濾過(guò)，酸水液用石油醚 20 mL萃取，棄去石油醚液，乙酸乙酯20 mL萃取，棄去乙酸乙酯液，酸水液用氨水調(diào)節(jié) pH至 10，三氯甲烷萃取 2次，每次10 mL，合并三氯甲烷萃取液，置水浴蒸干，殘?jiān)尤燃淄?1 mL使其溶解，作為供試品溶液［2］。

2.1.3 陰性對(duì)照溶液制備 取玉涎膠囊中除浙貝母外其他藥物，按工藝流程制備成膠囊，然后按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照液。

2.1.4 薄層色譜條件及結(jié)果 照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液10 μL、供試品溶液20 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯—甲醇—濃氨試液（17∶2∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以改良碘化鉍鉀試液。供試品色譜在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照液在相應(yīng)的位置無(wú)此斑點(diǎn)（見圖1）。

圖1 浙貝母的鑒別

2.2 黨參的鑒別

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 取黨參炔苷對(duì)照品，加甲醇制成 1 g·L-1的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品膠囊內(nèi)容物 5 g，加甲醇25 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?5 mL使溶解。水液通過(guò) D101型大孔吸附樹脂柱（柱高為10 cm，內(nèi)徑為1.5 cm），用水洗脫，洗至洗液 Molish反應(yīng)和茚三酮反應(yīng)呈陰性；棄去水液，再用50%乙醇50 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?1 mL使溶解，作為供試品溶液［3］。2.2.3 陰性對(duì)照溶液制備 取玉涎膠囊中除黨參外其他藥物，按工藝流程制備成膠囊，然后按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照液。

2.2.4 薄層色譜條件及結(jié)果 照薄層色譜法試驗(yàn)，分別吸取對(duì)照品溶液4 μL、供試品溶液10 μL，分別點(diǎn)于同一高效硅膠 G薄層板上，以正丁醇—冰乙酸—水（7∶1∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在 105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光下檢視。在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，供試品色譜顯相同顏色的斑點(diǎn)（見圖2）。

圖2 黨參的鑒別

2.3 桔梗的鑒別

2.3.1 供試品溶液的制備 取本品膠囊內(nèi)容物5 g，加7%的硫酸乙醇—水（1∶3）混合液20 mL，超聲30 min，放冷，用三氯甲烷萃取 2次，每次 10 mL，合并萃取液，置水浴蒸干，殘?jiān)蛹状?1 mL使溶解，作為供試品溶液［4-5］。

2.3.2 對(duì)照藥材溶液的制備 取桔梗對(duì)照藥材3 g，按2.3.1項(xiàng)下方法制得對(duì)照藥材溶液。

2.3.3 陰性對(duì)照溶液制備 取玉涎膠囊中除桔梗外其他藥物，按工藝流程制備成膠囊，然后按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照液。

2.3.4 薄層色譜條件及結(jié)果 吸取上述2種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷—乙醚（1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照液無(wú)此斑點(diǎn)（見圖3）。

2.4 甘草的鑒別

2.4.1 供試品溶液的制備 取本品膠囊內(nèi)容物5 g，加鹽酸—石油醚（1∶15）的混合液 20 mL，超聲 30 min，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)邮兔? mL溶解，作為供試品溶液［6］。

圖3 桔梗的鑒別

2.4.2 對(duì)照藥材溶液的制備 取甘草對(duì)照藥材 1 g，按2.4.1項(xiàng)下方法制得對(duì)照藥材溶液。

2.4.3 陰性對(duì)照溶液制備 取玉涎膠囊中除甘草外其他藥物，按工藝流程制備成膠囊，然后按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照液。

2.4.4 薄層色譜條件及結(jié)果 照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚—甲苯—乙酸乙酯—冰乙酸（10∶20∶7∶0.5）為展開劑，展開，取出晾干，噴以5%的磷鉬酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上，供試品色譜顯相同顏色的斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照液無(wú)此斑點(diǎn)（見圖4）。

2.5 含量測(cè)定 玉涎膠囊主要用來(lái)治療哮喘，浙貝母為其中主藥之一，而浙貝母中鎮(zhèn)咳祛痰的主要有效成分為生物堿類，其中貝母素甲和貝母素乙因藥理活性強(qiáng)，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，故用來(lái)作為含測(cè)為指標(biāo)。

2.5.1 色譜條件［3］ZORBAX SB-C18色譜柱（5 μm，4.6 mm×25 cm）；流動(dòng)相：乙腈—水—二乙胺（70∶30∶0.03），流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20 μL。Agilent380蒸發(fā)光散射檢測(cè)器條件：漂移管溫度：90℃，氮?dú)饬魉?.2 L·min-1。

2.5.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取對(duì)照品貝母素甲和貝母素乙，加甲醇制成含貝母素甲1.850 g· L-1、貝母素乙 1.880 g·L-1的混和溶液，搖勻，作為母液。然后稀釋制成含貝母素甲0.185 g·L-1、貝母素乙0.188 g·L-1的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。

圖4 甘草的鑒別

2.5.3 供試品溶液制備 取本品膠囊內(nèi)容物約2 g，精密稱定，置燒瓶中，加濃氨試液4 mL浸潤(rùn)1 h，精密加入三氯甲烷—甲醇（4∶1）的混合溶液40 mL，稱定重量，混勻，置80℃水浴中加熱回流30 min，放冷，再稱定重量，加上述混合溶液補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液10 mL，置蒸發(fā)皿中蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙獠⑥D(zhuǎn)移至 2 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.5.4 陰性對(duì)照溶液制備 取玉涎膠囊中除浙貝母外其他藥物，按工藝流程制備成膠囊，然后按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照液［7］。

2.5.5 系統(tǒng)適應(yīng)性考察 分別精密吸取含貝母素甲 0.185 g·L-1和貝母素乙0.188 g·L-1的對(duì)照液10 μL和供試品溶液20 μL，注入 HPLC。理論塔板數(shù)分別以貝母素甲峰和貝母素乙峰計(jì)，均不低于2 000。此時(shí)，貝母素甲峰、貝母素乙峰均與其它相鄰峰基線分離，分離度 R＞1.5，保留時(shí)間分別約為9 min和11 min（見圖5）。

圖5 玉涎膠囊HPLC色譜圖

2.5.6 線性關(guān)系考察 分別精密吸取濃度為含貝母素甲0.185 g·L-1和貝母素乙0.188 g·L-1混合對(duì)照品溶液1.0、2.0、3.0、5.0、7.0、9.0 mL定容至10 mL量瓶中，制成系列溶液。

精密吸取上述對(duì)照液各10 μL，注入液相色譜儀，每對(duì)照品重復(fù)進(jìn)針2次。以濃度 X（g·L-1）的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，以貝母素甲／貝母素乙峰面積的對(duì)數(shù)值Y為縱坐標(biāo)，使用 SPSS軟件進(jìn)行線性回歸，得方程：lgY1＝1.573lgX1+2.295（r＝0.999 8），線性范圍是 0.018 5～0.166 5 g·L-1，lgY2＝1.545 lgX2+2.269（r＝0.999 7），線性范圍是0.018 8～0.169 2 g·L-1。貝母素甲和貝母素乙在范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，以樣品中貝母素甲和貝母素乙的總含量計(jì)算RSD，RSD＝0.69%（n＝6），表明該方法精密度良好。

2.5.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 0、2、4、8 h各精密吸取供試液20 μL，進(jìn)樣1次，計(jì)算貝母素甲和貝母素乙峰面積值RSD為0.76%和0.25%，顯示供試液8 h內(nèi)穩(wěn)定［8］。2.5.9 專屬性試驗(yàn) 按照2.5.1項(xiàng)下的色譜條件，精密吸取陰性對(duì)照液20 μL，進(jìn)樣3次，圖譜顯示陰性沒有干擾，顯示在本品中，所檢測(cè)成分的專屬性良好。2.5.10 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱定同一批號(hào)（121101）樣品6份，每份約2 g，按上述方法測(cè)定，測(cè)得貝母素甲和貝母素乙的總含量，計(jì)算RSD為2.25%，顯示具有較好的重復(fù)性。

2.5.11 加樣回收率試驗(yàn) 取同一批號(hào)膠囊（121101）內(nèi)容物1 g，精密稱定6份，各精密加入濃度為0.373 g·L-1的貝母素甲和貝母素乙的混合對(duì)照液3.6 mL，用與2.5.3項(xiàng)下的方法制得供試液并檢測(cè)其含量（見表1）。

表1 貝母素甲和貝母素乙加樣回收率試驗(yàn)

2.5.12 樣品測(cè)定 精密吸取供試液各20 μL，重復(fù)進(jìn)針2次。采用外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程定量（見表2）。

表2 玉涎膠囊含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

玉涎丹處方的君藥為浙貝母和蛞蝓。上述實(shí)驗(yàn)中，本品的鑒別曾參考2010版藥典中浙貝母的定性鑒別方法，因存在動(dòng)物藥蛞蝓及含有多糖較多的黨參等，提取液黏稠，難于點(diǎn)樣，且雜質(zhì)較多，影響薄層展開效果。方法改進(jìn)后的，鑒別專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好。處方中主藥之一的蛞蝓鑒別曾采用氨基酸的薄層鑒別方法，但由于陰性有干擾，所建方法專屬性不強(qiáng)，未被采用。因此，進(jìn)一步研究采用PCR、實(shí)時(shí)細(xì)胞電子分析技術(shù)等生物技術(shù)對(duì)藥物中的蛞蝓進(jìn)行定性鑒別［9］。桔梗鑒別中參考藥典鑒別方法，但是展開效果不佳，展開劑比例做了適當(dāng)調(diào)整。對(duì)于處方中其他藥物如黨參、甘草均建立了定性鑒別方法，且具有良好的重現(xiàn)性。

含量測(cè)定中對(duì)膠囊中主藥之一浙貝母所含的貝母素甲和貝母素乙進(jìn)行了含量測(cè)定，從精密度試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)和加樣回收試驗(yàn)結(jié)果可以看出，HPLC-ELSD方法重復(fù)性好，準(zhǔn)確度高，可以同時(shí)測(cè)定貝母素甲和貝母素乙兩種成分，適用于本膠囊生物堿含量的測(cè)定，可以較好的控制膠囊的質(zhì)量。

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Quality standard of yuxian capsules

CUI Ming-chao，CHENG Bin，CHEN Hong-jiang，et al
（Zhejiang Pharmaceutical College，Ningbo，Zhejiang 315100，China）

Objective To establish the quality standard of Yuxian Capsules.Methods Fritillariae thunbergii bulbus.，Codonopsis radix，Platycodonis radix and Glycyrrhizae radix et rhizoma were identified by TLC.The contents of peimine and peiminine were determined by ELSD-HPLC（Agilent380，Agilent1260）.The optimal conditions of the separation and detection were achieved on a ZORBAX SB-C18column with a mobile phase consisting of acetonitrile-water-diethylamine（70∶30∶0.03）at the flow-rate of 1.0 g·L-1.The temperature for the detector drift tube was set at 90℃ and the nitrogen flow-rate was at 2.2 L·min-1，20 μL as the injection volume.Results TLC was effective for discrimination of Fritillariae thunbergii bulbus.，Codonopsis radix，Platycodonis radix and Glycyrrhizae radix et rhizoma.The calibration curves for peimine and peiminine were linear over the range of 0.018 5～0.185 g·L-1（r＝0.999 8）and 0.018 8～0.188 g·L-1（r＝0.999 7），respectively.The average recovery was 98.59%，RSD＝1.27%（n＝6）.Conclusions

The method is simple，accurate，reproducible and suitable for the quality control of Yuxian Capsules.

yuxian capsules；TLC；content determination

10.3969／j.issn.1009-6469.2014.05.007

2013-11-05，

2014-01-13）

浙江醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校校級(jí)科研課題（No ZPCSR2 010007）