程世云，徐國(guó)兵

（1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)，安徽 合肥 230031；2.安徽省食品藥品檢驗(yàn)所，安徽 合肥 230051）

HPLC-ELSD法測(cè)定復(fù)方麝香注射液中聚山梨酯80的含量

程世云1，2，徐國(guó)兵1，2

（1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)，安徽 合肥 230031；2.安徽省食品藥品檢驗(yàn)所，安徽 合肥 230051）

目的 采用高效液相色譜—蒸發(fā)光散射法建立復(fù)方麝香注射液中聚山梨酯80的含量測(cè)定方法。方法 采用高效液相色譜法測(cè)定。色譜柱：TSK GEL G2000SWxl色譜柱（7.8 mm×300 mm，5 μm），流動(dòng)相：乙腈—0.01 mol·L-1乙酸銨溶液（8∶92），流速：0.8 mL·min-1，柱溫：30℃，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器漂移管溫度 103℃，載氣為氮?dú)?，流量?2.5 L·min-1。結(jié)果 聚山梨酯80進(jìn)樣量在 2.515～100.6 μg范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，r＝0.999 6；平均加樣回收率為 100.87%（n＝6，RSD＝0.65%）。結(jié)論 試驗(yàn)表明，該方法操作簡(jiǎn)單、快速，重復(fù)性好，可以作為復(fù)方麝香注射液中聚山梨酯80的質(zhì)量控制方法。

復(fù)方麝香注射液；聚山梨酯80；含量測(cè)定；HPLC；蒸發(fā)光散射

復(fù)方麝香注射液是由人工麝香、郁金、廣藿香、石菖蒲、冰片和薄荷腦等六味中藥制成的復(fù)方制劑，標(biāo)準(zhǔn)收載于國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局國(guó)家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編經(jīng)絡(luò)肢體腦系分冊(cè)［1］，具有豁痰開(kāi)竅，醒腦安神的功效，用于痰熱內(nèi)閉所致的中風(fēng)昏迷。輔料聚山梨酯 80又稱(chēng)吐溫80，其對(duì)脂溶性成分有較好的助溶作用，是復(fù)方麝香注射液中的助溶劑，本身有很強(qiáng)的細(xì)胞膜破碎作用而導(dǎo)致刺激性、溶血性和組胺釋放（過(guò)敏），如果用量不當(dāng)可導(dǎo)致不良反應(yīng)，為此，本次試驗(yàn)參考部分文獻(xiàn)報(bào)道［2-11］，建立了復(fù)方麝香注射液中聚山梨酯 80的含量測(cè)定方法，該方法方便、快捷，方法學(xué)驗(yàn)證符合要求，可用于復(fù)方麝香注射液中聚山梨酯80的含量測(cè)定。

1 儀器與試藥

Agilent1200系 列 高 效液相 色 譜 儀，Alltech ELSD 2000ES檢測(cè)器；乙腈為色譜純，水為純化水，其它試劑為分析純；聚山梨酯80（BESTOWN-振翔公司提供，批號(hào)G0I359）；復(fù)方麝香注射液9批，分別由吉林省集安益盛藥業(yè)股份有限公司（標(biāo)為廠家1）和安徽金太陽(yáng)生化藥業(yè)有限公司（標(biāo)為廠家2）提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：TSK GEL G2000SWxl色譜柱（7.8 mm×300 mm，5 μm），流動(dòng)相：乙腈—0.01 mol·L-1乙酸銨溶液（8∶92），流速：0.8 mL· min-1，檢測(cè)器：蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10 μL。理論板數(shù)按聚山梨酯80峰計(jì)算不低于1 500，分離度大于1.5。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取聚山梨酯 80對(duì)照品0.251 5 g，置50 mL量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL中含5.03 mg聚山梨酯80的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密量取復(fù)方麝香注射液1 mL，置10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 按處方組成比例，將人工麝香、郁金、廣藿香、石菖蒲加水蒸氣蒸餾得初餾液，再進(jìn)行重蒸餾，收集重蒸液，將冰片、薄荷腦共研，用上述蒸餾液分次溶解；再按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.3 線(xiàn)性關(guān)系考察 分別精密量取上述對(duì)照品溶液0.5、1、2、4、8、16、20 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，峰面積分別為：154.8、490.5、1 203.9、3 151.0、8 645.2、23 884.5、31 907.2。以峰面積的自然對(duì)數(shù)值（Y）為縱坐標(biāo)，以聚山梨酯 80進(jìn)樣量的自然對(duì)數(shù)值（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，經(jīng)回歸處理，方程：Y＝1.430X+1.646，r＝0.999 6，結(jié)果表明，聚山梨酯80進(jìn)樣量在2.515～100.6 μg范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

圖1 色譜圖（1.聚山梨酯80）

2.4 精密度考察 精密吸取同一對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，每次4 μL，測(cè)定峰面積分別為：3 199.1、3 137.9、3 146.0、3 144.5、3 139.6、3 138.6。峰面積平均為 3 151.0，RSD為0.76%，表明精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱(chēng)取同一批號(hào)（13020713）樣品6份按供試液制備方法制備，依法測(cè)定。結(jié)果聚山梨酯 80含量分別為（g·L-1）：14.55、14.68、14.62、14.54、14.37、14.41，平均含量是14.53 g· L-1，其 RSD為 0.84%，表明本品測(cè)定方法重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液分別在配制后 0、4、8、12、24 h進(jìn)樣 10 μL，測(cè)定峰面積分別為：2 057.7、2 125.8、2 097.4、2 055.7、2 069.9。RSD 為1.44%，結(jié)果顯示，供試品溶液在 24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 專(zhuān)屬性試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液，按本文條件各進(jìn)樣10 μL，色譜圖見(jiàn)圖1，在本文條件下，陰性對(duì)照無(wú)干擾。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取已知含量的同一批（批號(hào)：13020713，含量：14.53 g·L-1）的樣品 6份，每份0.5 mL，分別精密加入聚山梨酯80對(duì)照品溶液（濃度為5.03 g·L-1）1.5 mL，置10 mL量瓶中，按上述含量測(cè)定方法測(cè)定，結(jié)果平均回收率為100.9%，RSD＝0.65%，具體結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品含量測(cè)定 取不同廠家的 9批復(fù)方麝香注射液樣品，按供試品溶液的配制項(xiàng)下制備供試品溶液，每個(gè)批次的樣品平行制備 2份，測(cè)定復(fù)方麝香注射液中輔料聚山梨酯80的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 復(fù)方麝香注射液中聚山梨酯80的含量（n＝2）

3 討論

3.1 檢測(cè)器的選擇 聚山梨酯80本身沒(méi)有紫外吸收，故不能選擇紫外檢測(cè)器，而蒸發(fā)光散射檢測(cè)器為通用型檢測(cè)器，對(duì)所有化合物均有相應(yīng)，故此次試驗(yàn)采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，進(jìn)行復(fù)方麝香注射液中聚山梨酯80的含量檢測(cè)。

3.2 色譜柱的選擇 聚山梨酯 80為極性化合物，在常規(guī)的C18柱上幾乎無(wú)保留，無(wú)法測(cè)定。此次試驗(yàn)采用的凝膠色譜柱TSK GEL G2000SWxl（7.8 mm ×300 mm，5 μm）為排阻色譜柱，其鍵合相能與聚山梨酯80選擇性作用，達(dá)到分離檢測(cè)的結(jié)果。

3.3 流動(dòng)相與流速的選擇 此次試驗(yàn)分別比較了乙腈—水（8∶92）、乙腈—0.02 mol·L-1乙酸銨溶液（8∶92）和乙腈—0.01 mol·L-1乙酸銨溶液（8∶92）三種不同的流動(dòng)相，結(jié)果顯示以乙腈—0.01 mol· L-1乙酸銨溶液（8∶92）為流動(dòng)相時(shí)，聚山梨酯 80得到較好的分離及較高的理論塔板數(shù)。同時(shí)此次試驗(yàn)還比較了0.6、0.8和1.0 mL·min-1三種不同流速，結(jié)果顯示 0.6 mL·min-1的流速出峰時(shí)間晚且峰較寬，1.0 mL·min-1的流速出峰時(shí)間較早且柱壓增大，采用 0.8 mL·min-1的流速時(shí)峰型較好，出峰時(shí)間適中，故選用 0.8 mL·min-1的流速。

4 小結(jié)

本研究首次建立復(fù)方麝香注射液中聚山梨酯80的HPLC-ELSD測(cè)定方法，方法可靠，重現(xiàn)性好，考慮到聚山梨酯80的特殊生理作用且易誘發(fā)臨床不良反應(yīng)，建議在現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中增加聚山梨酯 80的含量測(cè)定檢查項(xiàng)目。

［1］ 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.國(guó)家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編中成藥地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)部分經(jīng)絡(luò)肢體腦分冊(cè)［S］，2002：240-244.

［2］ 高文分，袁文娟，王 梅.HPLC-ELSD法測(cè)定醒腦靜注射液中聚山梨酯80的含量［J］.云南中醫(yī)中藥雜志，2012，22（7）：59 -60.

［3］ 李櫻紅，黃琴偉，祝 明，等.高效液相色譜法-蒸發(fā)光散射法測(cè)定冠心寧注射液中聚山梨酯80的含量［J］.藥物分析雜志，2012，32（5）：826-828.

［4］ 王少敏，夏 晶，陳 潔，等.黃芪注射液中藥用輔料聚山梨酯80兩種含量測(cè)定方法的比較研究［J］.齊魯藥事，2011，30 （11）：19-21.

［5］ 尹利輝，范可青，朱 俐，等.凝膠色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法測(cè)定中藥注射液中聚山梨酯 80的含量［J］.藥物分析雜志，2012，32（9）：1686-1689.

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Determination of polysorbate 80 in compound shexiang injection by HPLC-ELSD

CHENG Shi-yun1，2，XU Guo-bing1，2
（1.Anhui University of Chinese Medicine，Hefei，Anhui 230031，China；2.Anhui Provincial Institute for Food and Drug Control，Hefei，Anhui 230051，China）

Objective To establish the method for determination of polysorbate 80 in compound shexiang injection by HPLC-ELSD.Methods It was performed by HPLC-ELSD with TSK GEL G2000SWxl（7.8 mm×300 mm，5 μm）column.Acetonitrile and 0.01 mol ·L-1ammonium acetate（8∶92）was used as mobile phase，the flow rate was 0.8ml·min-1，and the temperature was set at 30℃.The evaporated light scattering detector was adopted.The drift tube temperature was 103℃，and the gas flow rate was 2.5 L·min-1.Results The calibration cueve showed good linearity of polysorbate 80 in the test range from 2.515 to 100.6 μg（r＝0.999 9），and average recovety was 100.87% （n＝6，RSD＝0.65%）.Conclusion The method is simple，rapid，accurate and reliable，and it can be applied to control the quality of polysorbate 80 in compound shexiang injection.

Compound shexiang injection；polysorbate 80；determination；HPLC；ELSD

10.3969／j.issn.1009-6469.2014.03.016

2013-11-11，

2014-01-06）

國(guó)家藥典委員會(huì)中藥注射劑標(biāo)準(zhǔn)提高項(xiàng)目

程世云，女，碩士研究生

徐國(guó)兵，男，主任藥師，碩士生導(dǎo)師，研究方向：中藥質(zhì)量控制，Email：xgb119＠163.com