馮庭平，黃順旺，陳 曼，宋少江

（1.安徽省立醫(yī)院藥劑科，安徽 合肥 230001；2.安徽省藥物研究所，安徽 合肥 230022 3.安徽大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，安徽 合肥 230601；4.沈陽藥科大學(xué)中藥學(xué)院，遼寧 沈陽 110016）

HPLC法測(cè)定金馬肝泰分散片中淫羊藿苷的含量

馮庭平1，黃順旺2，4，陳 曼3，宋少江4

（1.安徽省立醫(yī)院藥劑科，安徽 合肥 230001；2.安徽省藥物研究所，安徽 合肥 230022 3.安徽大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，安徽 合肥 230601；4.沈陽藥科大學(xué)中藥學(xué)院，遼寧 沈陽 110016）

目的 建立高效液相色譜法測(cè)定金馬肝泰分散片中淫羊藿苷（C33H40O15）含量的方法。方法 采用 Diamonsil-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；以乙腈—水（25∶75）為流動(dòng)相，流速為1.2 mL·min-1，檢測(cè)波長：270 nm。結(jié)果 淫羊藿苷對(duì)照品在0.255 5～0.766 5 μg范圍內(nèi)成良好的線性關(guān)系（r＝0.999 9），平均回收率為99.67%（n＝5），RSD為1.00%。結(jié)論 此法簡便、快速、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)，適用于金馬肝泰分散片中淫羊藿苷（C33H40O15）的含量測(cè)定。

高效液相色譜法；金馬肝泰分散片；淫羊藿苷

“金馬肝泰顆粒”［1］是在貴州苗族驗(yàn)方的基礎(chǔ)上，以中醫(yī)理論為指導(dǎo)加以篩選研制而成的，處方有馬蹄金、鐵包金、馬鞭草、防己、敗醬草、淫羊藿、黃芪、赤芍、丹參等九味藥材組成，功能為清熱解毒，健脾利濕，活血化瘀，用于肝膽濕熱，氣滯血瘀所致的急、慢性肝炎。收載于《國家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編》肝膽科分冊(cè)，是目前國內(nèi)治療肝炎疾病的首選中成藥之一［2］。目前，該藥國內(nèi)上市的有顆粒、片劑、膠囊，金馬肝泰分散片為改劑型新藥。

原劑型質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只是對(duì)本品中赤芍的有效成分芍藥苷 （C23H28O11）進(jìn)行含量測(cè)定研究，為了更好的控制本品質(zhì)量，確保臨床用藥的有效性，我們參照有關(guān)文獻(xiàn)［3-5］，采用高效液相色譜法，對(duì)金馬肝泰分散片中淫羊藿的有效成分淫羊藿苷 （C33H40O15）進(jìn)行含量測(cè)定，尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。

1 儀器與試藥

二元高壓梯度高效液相色譜系統(tǒng)，包括紫外／可見可變波長檢測(cè)器；METTLER TOLEDO AB135-S雙量程電子天平（梅特勒—托利多儀器上海有限公司）DZF-1型真空干燥箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠）；AS2060B超聲波清洗機(jī)（天津奧特賽恩斯儀器有限公司）。

淫羊藿苷對(duì)照品（批號(hào)110737-200810，含量測(cè)定用），購自中國藥品生物制品檢定所，金馬肝泰分散片樣品（批號(hào)110401、110402，110403、規(guī)格：每片0.5 g）以及缺味陰性樣品為自制。乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 采用 Diamonsil-C18色譜柱（4.6 mm ×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈—水（25∶75）；流速1.2 mL· min-1；檢測(cè)波長：270 nm，柱溫：40℃。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取五氧化二磷減壓干燥24 h的淫羊藿苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含50 μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取本品10片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取細(xì)粉約0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，超聲處理20 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，混勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性對(duì)照溶液的制備 按處方組成，取除淫羊藿外的其余藥材，按制備工藝要求，制成不含淫羊藿的分散片，按供試品溶液制備項(xiàng)下的方法，制成陰性對(duì)照溶液。

2.5 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 精密吸取淫羊藿苷對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各10 μL，注入液相色譜儀，在此條件下淫羊藿苷分離效果好，峰形較好；供試品溶液色譜圖中淫羊藿苷保留時(shí)間與對(duì)照品一致，而陰性對(duì)照無干擾；淫羊藿苷對(duì)照品溶液色譜圖中，理論塔板數(shù)為7 339（n＝3），因此將理論塔板數(shù)定為不少于3 500。供試品溶液色譜圖中，測(cè)得淫羊藿苷的分離度R＝2.114（n＝3）（應(yīng)大于1.5），淫羊藿苷拖尾因子 T＝1.04（0.95＜T＜1.05）符合《中國藥典》2010年版一部規(guī)定。見圖1～3。

圖1 淫羊藿苷對(duì)照品 HPLC圖譜

圖2 陰性樣品 HPLC圖譜

圖3 供試品 HPLC圖譜

2.6 線性關(guān)系考察 分別精密吸取淫羊藿苷對(duì)照品溶液（51.1 mg·L-1）5.0、7.5、10.0、12.5、15.0 μL，依次注入液相色譜儀，按上述色譜條件，分別進(jìn)行分析，測(cè)定其峰面積值，并以對(duì)照品量（X）為橫坐標(biāo)，峰面積值（Y）為縱坐標(biāo)，得淫羊藿苷回歸方程：Y＝948 928.6X-10 116.5，r＝0.999 9，n＝5。結(jié)果表明：淫羊藿苷對(duì)照品在0.255 5～0.766 5 μg范圍內(nèi)成良好的線性關(guān)系。

2.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取上述對(duì)照品溶液 10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，連續(xù)進(jìn)樣 5次，測(cè)定峰面積值，經(jīng)計(jì)算RSD＝1.34%。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液（批號(hào)110401），每隔一定的時(shí)間（2 h）進(jìn)樣、測(cè)定一次，經(jīng)計(jì)算淫羊藿苷的 RSD＝1.76%，結(jié)果表明：供試品溶液至少在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)（110401）的樣品，分別制備 5份供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，淫羊藿苷的平均含量為每片 2.87 mg，RSD為0.98%（n＝5），表明本方法重復(fù)性良好。

2.10 加樣回收率試驗(yàn) 取已知淫羊藿苷含量（每片2.87 mg）的樣品5份，每份約0.1 g，分別精密加入淫羊藿苷對(duì)照品溶液（0.6447 g·L-1）1 mL，按2.3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法進(jìn)行制備，測(cè)定，結(jié)果淫羊藿苷平均回收率為99.67%，RSD為1.00%，表明：本法測(cè)定淫羊藿苷含量準(zhǔn)確度高。見表1。

2.11 樣品測(cè)定 經(jīng)對(duì)自制 3批次樣品（批號(hào)：110401、110402，110403）進(jìn)行淫羊藿苷含量測(cè)定，含量測(cè)定結(jié)果分別為每片2.86、3.06、2.99 mg（n＝3），RSD分別為1.21%、1.13%、0.97%。

表1 淫羊藿苷含量測(cè)定加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝5）

3 討論

3.1 提取方法選擇 本研究比較了2種提取方法：即回流提取和超聲提取。結(jié)果由于2種方法在同一時(shí)間（20 min）內(nèi)測(cè)得的結(jié)果非常相近，考慮到超聲提取比回流提取更簡便快捷，故本研究采用超聲提取方法提取淫羊藿苷。

3.2 提取溶劑的選擇 取本品研細(xì)的細(xì)粉約 0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入甲醇、稀乙醇兩種溶劑各 25 mL，稱定重量，超聲處理20 min，分別測(cè)定其峰面積，兩種提取溶劑峰面積比較，甲醇提取的峰面積高，故提取溶劑選擇甲醇。

3.3 提取時(shí)間的選擇 取本品研細(xì)細(xì)粉約0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 25 mL，超聲處理20、40、60 min，分別測(cè)定其峰面積，結(jié)果提取20、40、60 min淫羊藿苷含量很接近，20 min就可基本提取完全，故提取時(shí)間選擇20 min。

試驗(yàn)表明采用HPLC法測(cè)定金馬肝泰分散片中淫羊藿苷的含量，方法準(zhǔn)確、快速、方便、重復(fù)性好，對(duì)進(jìn)一步完善該品種的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

［1］國家食品藥品監(jiān)督管理局.國家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編肝膽科分冊(cè)［S］.2002：金馬肝泰顆粒WS-10313（ZD-0313）-2002.

［2］ 劉三都，王吉超，舒德云，等.金馬肝泰治療慢性乙型肝炎肝纖維化的臨床研究.世界中西醫(yī)結(jié)合大會(huì)論文摘要集［C］.1997：200.

［3］ 陳 玲，劉 智，楊桂芬，等.金馬肝泰片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.貴州醫(yī)藥，2013，37（4）：361-363.

［4］ 丁偉杰，胡 盈，白敦耀.加味五子補(bǔ)腎丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［J］.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2008，13（28）：1118-1119.

［5］ 國家藥典委員會(huì).中國藥典：一部［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：306.

Assay of icarrin in jinma gantai dispersible tablets by HPLC

FENG Ting-ping1，HUANG Shun-wang2，4，CHEN Man3，et al
（1.Department of Pharmacy，Anhui Provincial Hospital，Hefei 230001，China；2.Anhui Provincial Institute of Pharmacology，Hefei 230022，China；3.College of Chemical Engineering，Anhui University，Hefei 230601，China；4.School of Chinese Materia Medicia，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110016，China）

Objective To establish an HPLC method for assay of Icarrin in jinma gantai dispersible tablets.Methods The assay was performed on a Diamonsil-C18column（4.6 mm×250 mm，5 μm）.The mobile phase was composed of acetonitrile∶water（25：75）.The flow rate was 1.2 mL·min-1.The detection wavelength was 270 nm.Results Icarrin showed a good linear（r＝0.9999）in the range of 0.255 5～0.766 5 μg.The average recovery was 99.67%（n＝5），and RSD was 1.00%.Conclusions The method might be simple，rapid，accurate and specific，which is suitable for the assay of Icarrin（C33H40O15）in jinma gantai dispersible tablets.

HPLC；jinma gantai dispersible tablets；assay

10.3969／j.issn.1009-6469.2014.03.014

2013-10-29，

2013-12-08）

黃順旺，男，副主任藥師，研究方向：新藥研究與開發(fā)，E-mail：huangsw5503＠163.com