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        β3-AR基因Trp64Arg位點多態(tài)性與男性青少年代謝綜合征患者運動康復(fù)效果的關(guān)聯(lián)研究

        2014-07-01 21:57:26張學(xué)領(lǐng)
        沈陽體育學(xué)院學(xué)報 2014年6期
        關(guān)鍵詞:青少年康復(fù)

        張學(xué)領(lǐng)

        (鄭州大學(xué)體育學(xué)院,河南鄭州450044)

        ?運動人體科學(xué)

        β3-AR基因Trp64Arg位點多態(tài)性與男性青少年代謝綜合征患者運動康復(fù)效果的關(guān)聯(lián)研究

        張學(xué)領(lǐng)

        (鄭州大學(xué)體育學(xué)院,河南鄭州450044)

        目的:探討β3-腎上腺素受體(β3-AR)基因Trp64Arg位點多態(tài)性與男性青少年代謝綜合征(MS)患者運動康復(fù)效果的關(guān)系,為制訂基于基因多態(tài)的特異性運動處方提供依據(jù)。方法:62名男性青少年MS患者進(jìn)行為期16周的有氧運動;聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)(PCR-RFLP)法測定β3-AR基因Trp64Arg位點多態(tài)性;運動前后測定身體形態(tài)學(xué)、血壓、血糖、血脂和MS z評分等相關(guān)指標(biāo);分析基因多態(tài)性與各指標(biāo)的關(guān)系。結(jié)果:β3-AR基因3種基因型頻率(Trp/Trp:66.1%,Trp/Arg:33.9%,Arg/Arg:0%)和等位基因頻率(Trp:83.1%,Arg:16.9%)符合H-W遺傳平衡定律。實驗前組間比較,Trp/Arg組身體形態(tài)學(xué)參數(shù)(BW、BMI、WC、BF%)、血糖參數(shù)(FBG、HbA1c、FIns、HOMA-IR)和MS z評分均高于Trp/Trp組(P<0.05或P<0.01)。實驗后,組內(nèi)與實驗前比較,Trp/Trp組WC、BF和MSz評分顯著性下降(P<0.05或P<0.01),Trp/Arg組BW、BMI、WC、BF%、FBG、FIns、HOMA-IR和MSz評分顯著性降低(P<0.05或P<0.01);組間比較,Trp/Arg組BW、BMI、WC、BF%、FBG、FIns、HOMA-IR和MS z評分的變化率顯著性高于Trp/Trp組(P<0.01)。結(jié)論:男性青少年MS易感性以及運動康復(fù)效果與β3-AR基因Trp64Arg位點多態(tài)有關(guān),Trp/Arg基因型患者易患MS,同時對于運動康復(fù)的效果較Trp/Trg基因型更為敏感。

        青少年;代謝綜合征;運動康復(fù);β3-腎上腺素受體;基因多態(tài)

        代謝綜合征(metabolic syndrome,MS)是指個體中多種代謝組分異常聚集的病理狀態(tài)。隨著經(jīng)濟(jì)發(fā)展和生活水平提高,生活方式發(fā)生了巨大轉(zhuǎn)變,MS及其所引起的心血管疾病的發(fā)病率在我國已快速增長,尤其是在青少年中的發(fā)病率日益攀升。朱建芳等的調(diào)查發(fā)現(xiàn),402例中、重度肥胖青少年中MS的發(fā)生率分別為17.81%和28.57%。有研究顯示,在肥胖兒童青少年中,高年齡組(10~16歲)MS的發(fā)生率要顯著高于低年齡組(7~10歲)。MS時發(fā)生的代謝異常不僅影響青少年的身心健康,更是成年期心腦血管疾病、糖尿病、痛風(fēng)等疾病的隱患。研究表明,適量的運動,特別是有氧運動可增加機(jī)體的能量消耗,對于MS的各個組分均有改善作用,如降低血壓、血糖、血脂,增加胰島素敏感性,以及減少脂肪堆積,并有效降低心血管事件的發(fā)生[1]。此外,抗阻訓(xùn)練可改善體成分、增加瘦體重,并提高安靜時的代謝率[2]。但不同個體對于運動干預(yù)的效果存在顯著個體差異,其原因可能與遺傳因素有關(guān)。β3-腎上腺素受體(β3-adrenoceptor,β3-AR)屬于G蛋白偶聯(lián)受體超家族,主要分布在脂肪組織,受體激動后可介導(dǎo)脂肪分解與產(chǎn)熱[3]。研究發(fā)現(xiàn),β3-AR基因Trp64Arg變異與MS易感性密切相關(guān)[4-5],而肥胖患者通過節(jié)食進(jìn)行體重控制的效果亦與該位點多態(tài)有關(guān)聯(lián)[6-7],但與運動康復(fù)效果的關(guān)聯(lián)性研究尚無報道。本課題組推測不同β3-AR基因型患者對于相同負(fù)荷運動的反應(yīng)與敏感性存在差異,進(jìn)而影響運動康復(fù)的療效。為證實上述假設(shè),選取男性青少年MS患者為受試對象,探討β3-AR基因Trp64Arg多態(tài)性與16周運動康復(fù)效果的關(guān)系,為制訂基于基因多態(tài)的特異性運動處方提供依據(jù)。

        1 研究對象和方法

        1.1 研究對象

        2013年4月—2013年6月,在鄭州市某中學(xué)選取15個班中符合本實驗要求的受試者62名。青少年MS的診斷標(biāo)準(zhǔn):腰圍大于或等于同年齡和性別青少年第90百分位數(shù)所對應(yīng)腰圍的臨界點,以及合并以下4項指標(biāo)中任意2項者:1)甘油三酯(triglyceride,TG)≥1.70 mmol/L(150 mg/dl);2)高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesferol,HDL-c)≤1.03 mmol/L(40 mg/dl);3)收縮壓≥130 mm-Hg和/或舒張壓≥85 mmHg;4)空腹血糖(fasting blood glucose,F(xiàn)BG)≥5.6 mmol/L(100 mg/dl)或已確診為2型糖尿?。?-9]。排除骨關(guān)節(jié)疾病者、繼發(fā)性肥胖者以及急慢性感染者。

        1.2 身體形態(tài)學(xué)參數(shù)測定

        包括身高、體重(body weight,BW)和身體質(zhì)量指數(shù)(body mass index,BMI)(BMI=體重/身高2)、腰圍和體脂百分比(percentage of body fat,BF%)。腰圍(waist circumference,WC)采用皮尺測量,方法:皮尺經(jīng)髂前上棘和第12肋下緣連線中點處,水平纏繞1周,于自然呼氣末測量其圍度。BF%采用身體組成成分儀(Inbody 4.0,韓國)測定,測試前空腹、排空大小便,以脂肪重量占體重的百分比表示。

        1.3 血壓測定

        受試者坐位休息15 min后,采用經(jīng)校正的標(biāo)準(zhǔn)臺式水銀柱血壓計進(jìn)行測試。測試時受試者取端坐位,測量右上臂肱動脈血壓,每次間隔10 min,連續(xù)測量3次,取均值,獲得收縮壓(systolic blood pressure,SBP)和舒張壓(diastolic blood pressure,DBP)。

        1.4 血液指標(biāo)測定

        受試者于清晨空腹?fàn)顟B(tài)下肘正中靜脈取血5 ml,其中3 mL于4℃離心提取血清待測血生化指標(biāo),另外2 ml全血用于提取白細(xì)胞基因組DNA。血脂各指標(biāo)包括TG、總膽固醇(total cholesterol,TC)、HDL-c和低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesferol,LDL-c)采用酶法;血糖各指標(biāo)中FBG采用葡萄糖氧化酶法,糖化血紅蛋白(glycosylated hemoglobin,HbA1c)采用高壓液相色譜法,空腹胰島素(fasting insulin,F(xiàn)Ins)采用放免法(試劑盒由南京建成生物工程研究所提供)測定,用穩(wěn)態(tài)模型評估法(homeostatic model assessment,HOMA)計算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-insulin resistance index,HOMAIR),計算公式:HOMA-IR=(FBG[mmol/L])×(FIns[μU/mL])/22.5。所有操作嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行,批內(nèi)和變異系數(shù)均<8.5%。

        1.5 MS z評分

        參照Potteiger等[10]提出方法計算MSz評分,該評分包含了MS五個危險因素(組分):HDL-c(mg/dl)、TG(mg/dl)、FPG(mg/dl)、WC(cm)和平均動脈壓(mean arterial pressure,MAP)(mmHg),其中MAP=DBP+(SBP-DBP)/3。根據(jù)個體數(shù)據(jù)、診斷標(biāo)準(zhǔn)和所有受試者的基線標(biāo)準(zhǔn)差(SD)進(jìn)行計算,公式:MS z評分=(40-HDL-c)/SD+(TG-150)/SD+(FBG-100)/SD+(WC-同年齡和性別第90百分位數(shù)所對應(yīng)腰圍臨界值)/SD+(MAP-100)/SD。

        1.6 β3-AR基因Trp64Arg位點多態(tài)測定

        采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段多態(tài)性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)法進(jìn)行基因分型。1)取100 μL全血用DNA提取試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司)提取白細(xì)胞基因組DNA。2)目的基因引物設(shè)計:上游5’-CGCCCAATACCGCCAACAC-3’,下游5’-CCACCAGGAGTCCCATCACC-3’。3)擴(kuò)增反應(yīng)體系:上下游引物各10 pmol,基因組DNA 2 μl,Taq DNA聚合酶1 U,10×buffer 7μl,MgCl22 mmol/L,dNTPs各0.01μmol,補(bǔ)三蒸水至25μl。反應(yīng)條件:預(yù)變性95℃10 min,變性94℃30 s,退火60℃1min,延伸72℃30 s,共40個循環(huán),終末延伸72℃5 min。4)限制性內(nèi)切酶消化:20μl反應(yīng)體系中PCR產(chǎn)物10μl,Bst NI內(nèi)切酶10 U,10×Buffer 2 μl,三蒸水7μl,混勻后37℃孵育10 h。5)取酶切產(chǎn)物10?l,EB染色,4%瓊脂糖凝電泳,經(jīng)電子凝膠成像系統(tǒng)分析結(jié)果。根據(jù)產(chǎn)物片段分為3型:野生型純合子(Trp/Trp)的酶切片段為99、62、30、12和7 bp;突變型雜合子(Trp/Arg)的酶切片段為161、99、62、30、12和7bp;突變型純合子(Arg/Arg)的酶切片段為161、30、12和7 bp。

        1.7 運動處方

        受試者除參加學(xué)校安排的體育課(2次/周,40 min/次)外,還需參加每周2次、每次持續(xù)60 min,共16周的運動處方干預(yù)。運動方案包括抗阻訓(xùn)練、有氧運動和游戲類活動。先進(jìn)行抗阻訓(xùn)練(仰臥起坐、俯臥撐、雙杠臂屈伸、單杠引體向上、蹲起,共兩組,組間間歇1~2min),中間穿插進(jìn)行有氧運動(慢跑、跳繩和健美操),最后進(jìn)行游戲類活動如足球、籃球、羽毛球、接力跑和上下樓梯。前8周運動強(qiáng)度為最大預(yù)測心率的50%~60%(最大預(yù)測心率計算公式[11]:HRmax=208-0.7×年齡),后8周為60%~70%HRmax,靶心率用遙測心率表(Polar FT4,芬蘭)持續(xù)監(jiān)控,受試者在運動中根據(jù)提前設(shè)定的心率范圍及時調(diào)整運動強(qiáng)度。運動開始前進(jìn)行10 min熱身以避免運動損傷,結(jié)束后進(jìn)行5~10 min主要肌肉群的拉伸練習(xí),以減輕延遲性肌肉酸痛。受試者在家長的陪同下,由體育教師、健身指導(dǎo)員和科研人員對訓(xùn)練過程進(jìn)行嚴(yán)格監(jiān)控并記錄訓(xùn)練日志,同時每周通過1~2次健康教育等方式提高依從性。

        1.8 統(tǒng)計方法

        所有數(shù)據(jù)用SPSS 14.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析處理?;蛐?、等位基因分布頻率、MS各組分的變化率用“%”表示,其他數(shù)據(jù)用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。MS各組分在運動前后的變化率(△%)=(運動后數(shù)值-運動前數(shù)值)/運動前數(shù)值×100%。按照β3-AR基因Trp64Arg多態(tài)分型將受試者分為Trp/Trp組和Trp/Arg組(本研究未發(fā)現(xiàn)Arg/Arg基因型者)。哈迪·溫伯格(Hardy-Weinberg,H-W)遺傳平衡使用卡方(χ2)檢驗,組內(nèi)實驗前后比較使用配對t檢驗,組間比較使用獨立樣本t檢驗。P<0.05為顯著性水平,P<0.01為非常顯著水平。

        2 結(jié)果

        2.1 β3-AR基因Trp64Arg多態(tài)性分布頻率與H-W平衡檢驗

        β3-AR基因3種基因型分布頻率(Trp/Trp:66.1%,Trp/Arg:33.9%,Arg/Arg:0%)和等位基因頻率(Trp:83.1%,Arg:16.9%)經(jīng)χ2檢驗P>0.05,符合H-W遺傳平衡定律,具有群體代表性(表1)。

        表1 β3-AR基因型及等位基因分布頻率

        2.2 不同β3-AR基因型受試者的基線特征比較

        受試者實驗前一般特征見表2。Trp/Arg組身體形態(tài)學(xué)參數(shù)(BW、BMI、WC、BF%)、血糖參數(shù)(FBG、HbA1c、FIns、HOMA-IR)和MS z評分均高于Trp/Trp組(P<0.05或P<0.01),血壓和血脂各參數(shù)在兩組間無顯著性差異(P>0.05)。

        表2 不同β3-AR基因型受試者的基線特征

        2.3 不同β3-AR基因型受試者實驗前后MS各組分的變化

        實驗后,組內(nèi)與實驗前比較,Trp/Trp組WC、BF和MS z評分顯著性下降(P<0.05或P<0.01),Trp/Arg組BW、BMI、WC、BF%、FBG、FIns、HOMA-IR和MS z評分顯著性降低(P<0.05或P<0.01);組間比較,Trp/Arg組BW、BMI、WC、BF%、FBG、 FIns、HOMA-IR和MS z評分的變化率顯著性高于Trp/Trp組(P<0.01)(表3)。

        表3 不同β3-AR基因型受試者各指標(biāo)的變化

        3 討論

        由于處于生長發(fā)育期,針對青少年MS患者不宜過分節(jié)食,也不提倡使用減肥藥物,主要應(yīng)通過合理的飲食結(jié)構(gòu)及適當(dāng)?shù)倪\動康復(fù)療法來控制體重。研究證實,運動對于MS的各個組分均有改善作用,如降低血壓、血糖、血脂,增加胰島素敏感性,以及減少脂肪堆積[1],但不同個體運動康復(fù)的療效存在顯著差異,其原因之一與某些基因的變異有關(guān)[12-13]。因此,把基因多態(tài)策略應(yīng)用于青少年MS患者的運動干預(yù)中,研究不同基因型患者對運動干預(yù)的敏感性差異,將來可以為患者制訂基于基因多態(tài)的運動處方,即根據(jù)個體的遺傳背景選擇個性化的運動強(qiáng)度和運動量,以取得更好的運動康復(fù)療效[14-15]。

        β3-AR主要分布在脂肪組織,在調(diào)控機(jī)體的脂解和生熱作用中扮演重要角色[3]。有報道指出,脂肪細(xì)胞中β3-AR表達(dá)下降將會導(dǎo)致實驗動物發(fā)生胰島素抵抗或者體重增加,而選擇性β3-AR激動劑能夠顯著增加能量消耗,減輕飲食所導(dǎo)致的肥胖,被廣泛認(rèn)為是治療肥胖癥和2型糖尿病的新型藥物。隨著β3-AR編碼基因的測序和克隆,發(fā)現(xiàn)該基因存在一功能性突變位點,即外顯子1上第190位胸腺嘧啶核苷酸(T)被胞嘧啶核苷酸(C)代替,導(dǎo)致其mRNA上64位色氨酸(Trp)密碼子被精氨酸(Arg)密碼子置換,形成Trp64Arg多態(tài),引起蛋白水平表達(dá)缺陷及信號受損,影響脂肪分解和生熱作用[16]。本研究未發(fā)現(xiàn)Arg/Arg基因型攜帶者,Trp/Arg基因型(突變雜合子)分布頻率為33.9%,Arg等位基因(突變等位基因)分布頻率為16.9%;與國內(nèi)[17]以及亞洲人[18]β3-AR基因變異分布的結(jié)果接近,但明顯低于歐美人[19],提示β3-AR基因Trp64Arg變異與種族與地區(qū)差異密切相關(guān)。

        在本研究中,Trp/Arg組身體形態(tài)學(xué)參數(shù)(BW、BMI、WC、BF%)、血糖參數(shù)(FBG、HbA1c、FIns、HOMA-IR)和MSz評分均高于Trp/Trp組,提示β3-AR基因Trp64Arg位點變異可導(dǎo)致MS發(fā)生的易感性增高。由于該位點變異發(fā)生在β3-AR的第1個胞內(nèi)環(huán),而此胞內(nèi)環(huán)被認(rèn)為是對于細(xì)胞表面受體運動及受體偶聯(lián)于細(xì)胞效應(yīng)器系統(tǒng)的功能至關(guān)重要。該突變影響β3-AR的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)異常,引起環(huán)磷酸腺苷(cyclic adenosine 3’,5’-monophosphate,cAMP)減少、解偶聯(lián)蛋白(uncoupling protein,UCP)表達(dá)下降,造成棕色脂肪分解作用和產(chǎn)熱作用出現(xiàn)缺陷,因而減弱對基礎(chǔ)代謝率的調(diào)控能力,最終引發(fā)MS。

        朱旅云等[20]報道,經(jīng)過節(jié)食減重干預(yù)后,Trp純合子(Trp/Trp)攜帶者組除HDL-c、LDL-c及空腹血糖無明顯變化外,其他各項包括體脂、血壓、血脂和血糖指標(biāo)均顯著降低,而Arg等位基因攜帶者(Trp/Arg、Arg/Arg)僅顯示BMI較實驗前降低,其余各項代謝指標(biāo)均無顯著性變化,提示節(jié)食減重干預(yù)對于β3-AR基因野生型純合子即Trp/Trp攜帶者是預(yù)防MS的有效措施。運動康復(fù)是MS患者減重的重要手段,但此多態(tài)位點與運動干預(yù)效果的關(guān)聯(lián)性研究鮮有報道。Garenc等[21]的報道指出,肥胖患者20周耐力訓(xùn)練后體重和體脂百分比顯著性下降,但運動效果與β3-AR基因Trp64Arg位點多態(tài)性并無關(guān)聯(lián)。Yoshida等[22]發(fā)現(xiàn)攜帶Arg等位基因的日本婦女的脂肪組織傾向于內(nèi)臟組織重新分布。在接受有氧運動后,減輕體重的效果要比Trp純合子的肥胖個體差一些。本研究發(fā)現(xiàn),16周運動康復(fù)(有氧運動+抗阻訓(xùn)練)干預(yù)后,Trp/Trp組WC、BF和MS z評分,Trp/Arg組BW、BMI、WC、BF%、FBG、FIns、HOMA-IR和MS z評分均較實驗前顯著性下降,但Trp/Arg組BW、BMI、WC、BF%、FBG、FIns、HOMAIR和MS z評分的變化率顯著性高于Trp/Trp組,說明運動康復(fù)療法對男性青少年MS患者的干預(yù)效果與β3-AR基因Trp64Arg位點多態(tài)性存在關(guān)聯(lián),Trp/Arg基因型患者對于運動康復(fù)的效果較Trp/Trg基因型更為敏感。本研究結(jié)果與Garenc等[21]和Yoshida等[22]的報道不同,可能與種族、運動方案、干預(yù)時間等因素有關(guān),具體機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。

        4 結(jié) 論

        男性青少年MS易感性以及運動康復(fù)效果與β3-AR基因Trp64Arg位點多態(tài)有關(guān),Trp/Arg基因型患者易患MS,同時對于運動康復(fù)的效果較Trp/Trg基因型更為敏感。

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        責(zé)任編輯:郭長壽

        Association ofβ3-AR Gene Trp64Arg Locus Polymorphism and Effectiveness of Exercise Rehabilitation on M ale Adolescents of M etabolic Syndrome

        ZHANG Xueling
        (Physical Education College of Zhengzhou University,Zhengzhou 450044,Henan,China)

        Objective:To determ ine the relationship ofβ3-adrenoceptor(β3-AR)gene Trp64Arg locus polymorphism and effectiveness of exercise rehabilitation onmale adolescents ofmetabolic syndrome(MS)and provide evidence for special exercise prescription based on gene polymorphism.Methods:Sixty-two male adolescents of MS patients performed a 16-week aerobic exercise training intervention.β3-AR gene Trp64Arg locus polymorphism was detected by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism(PCR-RFLP)method.Parameters ofmorphologic,blood pressure,glycem ic control,blood fat and MS z score were determined before and after test.Association between each parameter and gene polymorphism was analysed.Results:The genotype frequencies(Trp/Trp:66.1%,Trp/Arg:33.9%,Arg/Arg:0%)and allele frequencies(Trp:83.1%,A rg:16.9%)were coincident w ith Hardy-Weinberg equilibrium law.Compared between-group w ith defferent genotypes before test,parameters morphologic(BW,BM I,WC,BF%),glycem ic control(FBG,HbA1c,F(xiàn)Ins,HOMA-IR)and MS z score of Trp/Arg group were higher than those of Trp/Trp group(P<0.05 or P<0.01).After test,compared w ith pre-test w ithin group,WC,BF and MS z score of Trp/Trp group while BW,BM I,WC,BF%,F(xiàn)BG,F(xiàn)Ins,HOMA-IR and MS z score of Trp/Arg group reduced(P<0.05 or P<0.01);compared between group,change rate of BW,BM I,WC,BF%,F(xiàn)BG,F(xiàn)Ins,HOMA-IR and MS z score of Trp/Arg group were higher than those of Trp/Trp group(P<0.01).Conclusion:The Trp64Arg locus polymorphism ofβ3-AR gene might contribute to MS susceptivity and effectiveness of exercise rehabilitation on adolescents of MS.Patients of Trp/Arg genotypewere liable to be MS but effectiveness of exercise rehabilitation had an advantage over those of Trp/Trg genotype.

        adolescents;metabolic syndrome;exercise rehabilitation;β3-AR;gene polymorphism

        G804.7

        :A

        :1004-0560(2014)06-0084-05

        2014-08-07;

        2014-09-12

        河南省科技廳科技攻關(guān)項目階段成果(142102310060)。

        張學(xué)領(lǐng)(1973—),男,副教授,博士,主要研究方向為身體功能性訓(xùn)練。

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