張妮 王海寧

摘要：

目的：建立婦女痛經(jīng)丸浸膏中丹酚酸B的含量測定方法。方法：采用高效液相色譜法測定婦女痛經(jīng)丸浸膏中丹酚酸B的含量。使用C18柱，甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）為流動相；檢測波長為286nm。結(jié)果：線性關(guān)系良好，平均回收率為98.96%，RSD為0.78%。結(jié)論：本方法精密度高，分離度良好，可用于婦女痛經(jīng)丸浸膏的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法丹酚酸B含量測定

【中圖分類號】

R453 【文獻標(biāo)識碼】B 【文章編號】1002-3763（2014）05-0039-02

婦女痛經(jīng)丸浸膏為婦女痛經(jīng)丸提取物，處方由丹參 300g、延胡索（醋制）300g、五靈脂（醋炒）300g、蒲黃（炭）300g組成，制法為：取五靈脂100g，用水熱浸，丹參加水煎煮二次，合并浸液及煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.25（60℃），但由于原提取物標(biāo)準(zhǔn)過于簡單，僅有鑒別項，無含量測定項，無法控制浸膏的質(zhì)量，針對廠家提出的要求，增加浸膏的含量測定，在此，采用高效液相色譜法測定浸膏中丹參所含有效成份丹酚酸B的含量[1][2]。液相色譜法操作簡便、精密度好、穩(wěn)定、結(jié)果可靠，采用本法分離度較好，減少誤差。本文采用高效液相色譜法測定婦女痛經(jīng)丸浸膏中丹酚酸B的含量提高了藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，可控制提取物及成品的質(zhì)量。

1儀器與試藥

1.1儀器： LC-10A型高效液相色譜儀（日本島津公司），SPD-10A檢測器，威馬龍色譜工作站。

1.2材料： 婦女痛經(jīng)丸浸膏及缺陰性樣品由安康制藥有限公司提供，丹酚酸B對照品由中國藥品生物制品鑒定所提供（供含量測定用）。甲醇、乙腈均為色譜純，甲酸為分析純，水為二次重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件[1][3][4]： 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）為流動相；檢測波長為286nm，柱溫25℃。理論塔板數(shù)按丹酚酸B峰計算應(yīng)不低于2000。

2.2對照品溶液的制備： 取丹酚酸B對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，即得。對照品溶液HPLC色譜圖見圖一。

2.3樣品溶液的制備： 取本品約0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶內(nèi)，精密加入70%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理10分鐘，放冷，用70%甲醇補足減失重量，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取濾液作為供試品溶液。供試品溶液HPLC色譜圖見圖二。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備： 精密吸取丹酚酸B對照品溶液（0.0551mg/ml）2.5、5、10、15、20μl進樣，記錄色譜，以峰面積為橫坐標(biāo)，以進樣量（μg）為縱坐標(biāo)作圖，計算回歸方程為：A=1828347.04C+15748.2195 （r=0.9999），結(jié)果表明丹酚酸B在0.13775μg～1.10200μg之間線性關(guān)系良好。

2.5精密度試驗： 分別精密吸對照品溶液（0.0551mg/ml）各10μl，重復(fù)進樣6次，記錄色譜，計算，RSD為0.11%，說明有良好的精密度。

2.6重現(xiàn)性試驗： 取一樣品按供試品溶液制備方法制備6份供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液10μl進樣，記錄色譜，計算，RSD為1.8%，說明有良好的重現(xiàn)性。

2.7加樣回收率試驗：采用加樣回收，精密吸取已測定含量的樣品0.1g（11.84mg/g），再加入丹酚酸B對照品適量，按正文所述色譜條件測定，計算回收率，結(jié)果見表一，丹酚酸B的回收率為98.96%，RSD為0.78%，說明本法有良好的回收率。

2.8空白試驗： 按處方比例及生產(chǎn)制備方法制得陰性樣品，按“樣品溶液制備”項下制備陰性溶液，進樣10μl，記錄色譜圖，結(jié)果樣品色譜圖在對照品色譜圖出峰處無對應(yīng)的峰，表明陰性樣品溶液在丹酚酸B出峰處沒有干擾峰。陰性樣品溶液HPLC色譜圖見圖三。

2.9測定法： 分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

3樣品測定

取所有樣品按樣品溶液制備操作，分別吸取對照品溶液與樣品溶液各10μl進樣，按上述色譜條件測定，記錄色譜，計算，結(jié)果見表二。

4討論

本方中丹參為主藥，而丹酚酸B為丹參藥材中主要有效成分^[5]，故選擇丹酚酸B作為本品質(zhì)量控制的成分。

在供試品溶液制備中，對回流提取和超聲進行了比較，結(jié)果回流提取和超聲提取沒有顯著差異，在此選用超聲提取。對超聲提取時間5～30 min進行了比較，結(jié)果表明提取10 min后，樣品中丹酚酸B基本提取完全，故在此超聲提取10 min。

經(jīng)參閱資料報道及實驗后，283nm處無雜質(zhì)干擾且靈敏度較好，所以采用此波長。

流動相曾采用以甲醇-水-甲酸（55∶45∶2），甲醇-水（55∶45），乙腈-水-甲酸（43∶57∶0.2），乙腈-水（43∶57），甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）為流動相進行試驗，在其他條件相同時，采用甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）為流動相，分離效果均較好。本實驗結(jié)果表明，在此色譜條件下，采用高效液相色譜法測定婦女痛經(jīng)丸浸膏中丹酚酸B的含量，方法簡便，快速，重現(xiàn)性好。

參考文獻

[1]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典2005年版一部[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版式社，2010（一部）：71.

[2] 苗明三，李振國，陳隋清編.現(xiàn)代實用中藥質(zhì)量控制技術(shù)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：190.

[3] 王歡.丹酚酸B的含量測定方法研究進展 [J].江西中醫(yī)藥.2010（6）

[4] 許永，趙成.不同提取方法對丹參中丹酚酸B含量測定的影響 [J].安徽醫(yī)藥.2009（13）

[5] 陳發(fā)奎編.常用中草藥有效成分含量測定[M].人民衛(wèi)生出版社，1997：145.