作者簡(jiǎn)介：張靜（1981.8- ）女，滿族，河南商丘人，上?，F(xiàn)代哈森（商丘）藥業(yè)有限公司化驗(yàn)員，研究方向：液相。摘要： 有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)是對(duì)藥品中殘留合成原料、中間體、副產(chǎn)物及可能的降解產(chǎn)物的檢測(cè)，是對(duì)藥品質(zhì)量控制的一項(xiàng)重要指標(biāo)，目的是根據(jù)安全性的要求檢測(cè)藥品中所含上述雜質(zhì)是否符合標(biāo)準(zhǔn)。下面就工作中遇到的一些問(wèn)題以及我們的一些解決辦法與大家交流一下。

關(guān)鍵詞：HPLC；藥品有關(guān)物；殘留檢測(cè)

【中圖分類號(hào)】R453【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 A【文章編號(hào)】1002-3763（2014）09-0109-021 關(guān)于藥品中有關(guān)物質(zhì)殘留檢查研究的一點(diǎn)建議：

1.1 有關(guān)物質(zhì)檢查常用的方法是主成分自身對(duì)照法和已知雜質(zhì)對(duì)照品比較法。對(duì)于主成分自身對(duì)照法，采用此方法時(shí)確定的檢測(cè)波長(zhǎng)是否合理直接影響到方法的可行性，因此，檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇是方法學(xué)研究的重要內(nèi)容。

1.2 我們認(rèn)為一些藥物采用HPLC主成分自身對(duì)照法檢查有關(guān)物質(zhì)時(shí)直接以主成分的最大吸收波長(zhǎng)為檢測(cè)波長(zhǎng)不合理。

2 現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中遇到的問(wèn)題

日常工作中我們常遇到的問(wèn)題主要有：雜質(zhì)峰和輔料峰不好界定；理論板數(shù)要求過(guò)高；關(guān)于溶劑峰；其它干擾；藥品標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的保留時(shí)間不夠。

2.1 理論板數(shù)問(wèn)題：例如：對(duì)乙酰氨基酚有關(guān)物質(zhì)檢查是用對(duì)氨基酚作雜質(zhì)對(duì)照品，對(duì)氨基酚保留時(shí)間為6分鐘，對(duì)乙酰氨基酚的保留時(shí)間為15分鐘，兩者分離度在10以上，但由于對(duì)乙酰氨基酚的進(jìn)樣量過(guò)大，所以理論板數(shù)達(dá)不到要求的5000，更換多支柱子仍達(dá)不到，但樣品濃度在含量測(cè)定下時(shí)理論板數(shù)達(dá)6000以上。我們認(rèn)為本法只測(cè)定對(duì)氨基酚，只要兩者的分離度達(dá)到要求就可以，而樣品峰的理論板數(shù)與測(cè)定無(wú)關(guān)。

2.2 關(guān)于溶劑峰：在有關(guān)物質(zhì)檢查時(shí)往往會(huì)出現(xiàn)溶劑峰，特別是低波長(zhǎng)測(cè)定時(shí)溶劑峰更大，這樣會(huì)使雜質(zhì)峰的面積增大，造成有關(guān)物質(zhì)的量不準(zhǔn)確。我們的經(jīng)驗(yàn)是：注入一針溶劑，如果保留時(shí)間和峰形與樣品溶液的峰形一致，則表示為溶劑峰，峰面積不能計(jì)入雜質(zhì)峰。

2.3 其他干擾峰

2.3.1 在對(duì)某企業(yè)生產(chǎn)的吡拉西坦氯化鈉注射液有關(guān)物質(zhì)檢驗(yàn)時(shí)，液相圖譜在2分多鐘時(shí)出現(xiàn)一個(gè)較大的吸收峰，如果按有關(guān)物質(zhì)算遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)了限度。但氯化鈉本身為無(wú)機(jī)鹽應(yīng)該沒(méi)有吸收，可是雜質(zhì)峰又不可能那么大。為此我們用氯化鈉注射液按同樣濃度進(jìn)樣，結(jié)果色譜圖上出現(xiàn)了相同保留時(shí)間的吸收峰。該峰究竟是由氯化鈉產(chǎn)生的還是氯化鈉中的雜質(zhì)產(chǎn)生的還不能證實(shí)。我們對(duì)多個(gè)廠家的氯化鈉注射液進(jìn)樣均有此吸收峰，所以建議在有關(guān)物質(zhì)檢查中增加氯化鈉空白實(shí)驗(yàn)。

2.3.2 在用薄層色譜法檢查煙酸占替諾有關(guān)物質(zhì)時(shí)采用的為主成分自身對(duì)照法，樣品通過(guò)展開(kāi)顯色后在主斑點(diǎn)下方有一較大的斑點(diǎn)，超出對(duì)照斑點(diǎn)很多倍，多次實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象相同，懷疑此方法存在問(wèn)題，請(qǐng)示了上級(jí)藥品檢驗(yàn)所和原標(biāo)準(zhǔn)起草單位，答復(fù)是此斑點(diǎn)是煙酸，是正常的。所以有些標(biāo)準(zhǔn)的不完善給我們檢驗(yàn)者也帶來(lái)了很多的麻煩。

2.4 藥品標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的保留時(shí)間不夠由于有的藥物與其有關(guān)物質(zhì)分子結(jié)構(gòu)的極性相差較大，因此在液相色譜分析中有關(guān)物質(zhì)按規(guī)定的記錄時(shí)間（為主峰保留時(shí)間的2倍），雜質(zhì)峰沒(méi)有完全出現(xiàn)，具體表現(xiàn)是當(dāng)?shù)谝会樧咄旰螅M(jìn)第二針的時(shí)候，峰形與第一針不同，當(dāng)保留時(shí)間延長(zhǎng)到3倍時(shí)，又出現(xiàn)一個(gè)吸收峰，如此按保留3倍多次進(jìn)樣，則峰形—致，說(shuō)明標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的保留時(shí)間延長(zhǎng)2倍時(shí)間是不夠的。液相色譜法檢查有關(guān)物質(zhì)時(shí)經(jīng)常遇到的問(wèn)題是主峰拖尾嚴(yán)重與雜質(zhì)峰分離不開(kāi)，理論板數(shù)不夠，其原因之一是柱子本身柱效低或柱子用的時(shí)間久了，柱效降低了。當(dāng)遇到這些問(wèn)題時(shí)我們解決的辦法首先是換柱子，如果發(fā)現(xiàn)柱子拖尾嚴(yán)重，在流動(dòng)相內(nèi)加入0.02%的三乙胺作為掃尾劑，如果分離不好，則調(diào)節(jié)流動(dòng)相，降低有機(jī)相的比例。如發(fā)現(xiàn)是柱子本身問(wèn)題可打開(kāi)柱子檢查是否有塌陷或柱頭污染情況，如果有污染可挖去一部分，填上同型號(hào)填料，沖柱即可。

3 乙酰水楊酸制劑中游離水楊酸的檢查

阿司匹林類藥物為常用解熱鎮(zhèn)痛藥，由于阿司匹林易分解為水楊酸和醋酸，而水楊酸對(duì)人體有一定的毒副作用，因此，阿司匹林及其制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中均有游離水楊酸的限度檢查，標(biāo)準(zhǔn)中均采用比色法進(jìn)行檢查。此方法靈敏度底，目視誤差較大。方法研究：乙酰水楊酸鋅是某藥廠生產(chǎn)的原料藥，游離水楊酸也是采用比色法，我們提出是否用HPLC法測(cè)定其含量和游離水楊酸，經(jīng)過(guò)多次試驗(yàn)，得到一個(gè)較可行的HPLC法。

3.1 方法：選擇了最常用的C18柱，流動(dòng)相為（6.8g磷酸二氫鉀，加0.1mol/L氫氧化鉀70ml溶解后，加水至850ml，用0.1mol/L氫氧化鉀調(diào)節(jié)pH為6.3±0.1，加甲醇80ml，再加水1000m1）檢測(cè)波長(zhǎng)290nm，進(jìn)樣量20ul。取供試品相當(dāng)于乙酰水楊酸鋅300mg，加流動(dòng)相使成100ml，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；另取水楊酸對(duì)照品15mg，加流動(dòng)相使成200ml，取2ml加流動(dòng)相稀釋至50ml。

3.2 結(jié)果：如供試品溶液中有與對(duì)照品相同保留時(shí)間的吸收峰，其面積不得大于對(duì)照品峰面積。經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)線性關(guān)系r=0.9999，加樣回收率為99.5%，RSD=0.5%

3.3 討論

3.3.1 由于乙酰水楊酸鋅在酸性條件下不穩(wěn)定，故選擇的流動(dòng)相和溶劑為中性。

3.3.2 水楊酸易溶于甲醇，所以選擇流動(dòng)相為溶劑。

3.3.3 通過(guò)對(duì)其他制劑的實(shí)驗(yàn)證明用此方法檢查游離水楊酸分離效果良好，重現(xiàn)性好，專屬性較強(qiáng)，結(jié)果準(zhǔn)確。

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