肖建波等

[摘要] 目的 探討不同亞型彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤（DLBCL）組織中核轉(zhuǎn)錄因子κB （NF-κB）、原癌基因cMYC的表達(dá)及臨床意義。 ABC-DLBCL 亞型，NF-κB、cMYC的表達(dá)與生存相關(guān)。在GCB-DLBCL亞型中，NF-κB和cMYC的陽(yáng)性或陰性表達(dá)與總生存不相關(guān)。 結(jié)論 NF-κB、cMYC在ABC-DLBCL亞型表達(dá)率高于GCB-DLBCL亞型，同時(shí)可能是影響ABC-DLBCL亞型預(yù)后的不利因素。

[關(guān)鍵詞] 非霍奇金淋巴瘤；彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤；核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB

[中圖分類(lèi)號(hào)] R733.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2014）04（b）-0010-04

[Abstract] Objective To investigate the clinical significance and expression of determination of nuclear transcription factor κB （NF-κB）， and cellular myelocytomatosis oncogene （cMYC）， in patients of different subtypes of diffuse large B cell lymphoma （DLBCL）. Methods The expressions of NF-κB and cMYC in diffuse large B cell lymphoma in 57 cases were detected by immunohistochemistry. And its relationship with clinical pathological characteristics was analyzed. Results The positive expression of NF-κB was related with international prognosis index （IPI） and pathological subtype， pathological subtype the positive expression of cMYC was related with pathological subtype. The expression of NF-κB in ABC-DLBCL was significantly higher than that in GCB-DLBCL， positive rate of pathological subtypepathological subtypeits expression in ABC-DLBCL， GCB-DLBCL tissues were 72.7%， 41.6% respectively， there was significant difference between two groups （P = 0.029）. The expression of cMYC in ABC-DLBCL was significantly higher than that in GCB-DLBCL， its expression in ABC-DLBCL， GCB-DLBCL tissues were 66.7%， 54.4% respectively， there was statistical difference between two groups （P = 0.035）. In ABC-DLBCL subtype， the expression of NF-κB and cMYC were related with overall survival. In GCB-DLBCL subtype， the expression of NF-κB and cMYC were not related with overall survival. Conclusion The expression of NF-κB and cMYC in ABC-DLBCL are significantly higher than those in GCB-DLBCL. In the same time， they may be adverse prognostic factors for ABC-DLBCL subtype.

[Key words] Non Hodgkin lymphoma； Diffuse large B cell lymphoma； NF-κB

彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤（diffuse large B-cell lymphomas，DLBCL）是非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin lymphoma，NHL）中最常見(jiàn)的一種亞型，占NHL的30%～40%，是一種異質(zhì)性很強(qiáng)的疾病，在臨床表現(xiàn)、組織形態(tài)和預(yù)后等多方面都具有很大差異。因此Alizadeh等[1]根據(jù)基因表達(dá)譜不同，將DLBCL分為生發(fā)中心型（germinal center B-cell-like，GCB）和活化B細(xì)胞型（activated B-cell-like，ABC）。但由于受技術(shù)條件的限制，基因芯片技術(shù)尚無(wú)法在臨床中普遍應(yīng)用。2004年Hans等[2]應(yīng)用免疫組化的方法，通過(guò)檢測(cè)淋巴瘤組織中CD10、BCL6和MUM1的表達(dá)情況進(jìn)行分型，分為生發(fā)中心型（GCB）和非生發(fā)中心型（non-GCB，ABC）兩個(gè)亞型。該免疫組化分型與基因芯片的分型結(jié)果具有較高的符合率，其中GCB型為71%，非GCB型為88%。在2008年WHO造血和淋巴組織腫瘤分類(lèi)方案中，建議可用免疫組化方法對(duì)DLBCL進(jìn)行分型。近年研究發(fā)現(xiàn)，DLBCL的兩種亞型在預(yù)后上有很大差別，這與兩種亞型的細(xì)胞遺傳學(xué)不同有關(guān)，臨床表現(xiàn)在蛋白表達(dá)不同。其中核轉(zhuǎn)錄因子κB（nuclear transcription factor κB，NF-κB）及原癌基因cMYC在DLBCL淋巴瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，本研究擬探討NF-κB p65、cMYC在DLBCL不同亞型之間的表達(dá)情況及臨床意義。endprint

1.2 免疫組化方法及陽(yáng)性結(jié)果判定

患者淋巴結(jié)組織蠟塊標(biāo)本經(jīng)10%中性福爾馬林溶液固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，4 μm厚切片，切片常規(guī)脫蠟水化；0.3%H2O2阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，10%小牛血清封閉切片，滴加一抗，4℃過(guò)夜。PBS洗后滴加廣譜生物素化二抗（1∶200），SP復(fù)合物（1∶200），DAB顯色，蘇木精復(fù)染胞核，脫水，透明，封片。分別設(shè)相應(yīng)的陽(yáng)性、陰性、空白對(duì)照。NF-κB p65及cMYC的主要陽(yáng)性染色部位在細(xì)胞核和細(xì)胞漿。NF-κB p65及cMYC陽(yáng)性表達(dá)為棕黃色或棕褐色細(xì)小顆粒。用已知陽(yáng)性片為陽(yáng)性對(duì)照，所有病理標(biāo)本切片用PBS液代替一抗作陰性對(duì)照。陽(yáng)性反應(yīng)為細(xì)胞漿內(nèi)或細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒。陽(yáng)性反應(yīng)為細(xì)胞漿內(nèi)或細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒，陽(yáng)性反應(yīng)細(xì)胞> 10%為陽(yáng)性結(jié)果。

3 討論

DLBCL是常見(jiàn)的NHL之一，盡管美羅華為基礎(chǔ)的化療方案在DLBCL中取得了很大成功，然而高?；颊叩念A(yù)后仍然較差，尤其是在ABC亞型治療效果不佳。在臨床工作中，識(shí)別特殊患者進(jìn)行規(guī)范的分層治療，成為一個(gè)亟待解決的問(wèn)題。

目前，IPI是公認(rèn)的DLBCL的獨(dú)立不良預(yù)后因素，IPI為3～5分患者預(yù)后明顯差于0～2分患者，許多學(xué)者提出以此進(jìn)行分層治療，最近有文獻(xiàn)報(bào)道NF-κB與IPI同為DLBCL的獨(dú)立不良預(yù)后因素，NF-κB陽(yáng)性表達(dá)預(yù)后差[3]。NF-κB是廣泛存在于真核生物細(xì)胞內(nèi)的一種可誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄因子家族蛋白，與淋巴瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。董佑紅等[4]報(bào)道DLBCL患者組織中NF-κB的表達(dá)與IPI評(píng)分相關(guān)，本研究也發(fā)現(xiàn)了NF-κB在DLBCL組織中表達(dá)，NF-κB p65的表達(dá)率為59.6%，并且高IPI評(píng)分組NF-κB p65陽(yáng)性表達(dá)率高，與報(bào)道相似，近而推測(cè)NF-κB表達(dá)很可能是影響DLBCL的一個(gè)不利因素。

研究發(fā)現(xiàn)NF-κB在DLBCL的不同亞型中，表達(dá)的臨床意義不同，與ABC亞型預(yù)后不良有關(guān)[5]。Davis等[6]應(yīng)用IκBα的特異性抑制劑阻斷NF-κB通路后發(fā)現(xiàn)ABC亞型組的細(xì)胞出現(xiàn)快速的凋亡，而GCB亞型組細(xì)胞不受影響，提示NF-κB活化與ABC亞型DLBCL的增殖有關(guān)。孟偉等[7]報(bào)道NF-κB在ABC亞型中表達(dá)高于GCB型。NF-κB在ABC亞型DLBCL中的意義可能不同于GCB亞型。本研究NF-κB p65在ABC、GCB亞型組的表達(dá)率分別為72.7%、41.6%，ABC亞型表達(dá)率明顯高于GCB亞型。生存分析發(fā)現(xiàn)，在ABC亞型DLBCL中，NF-κB p65陽(yáng)性與陰性表達(dá)組的生存曲線明顯不同，陽(yáng)性組生存率低于陰性表組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但在GCB亞型中，本研究并未觀察到類(lèi)似現(xiàn)象，提示NF-κB p65很可能是ABC亞型DLBCL的不利預(yù)后因素。

MYC基因是位于8q24的原癌基因，對(duì)細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)、分化、凋亡及促進(jìn)新生血管形成等方面發(fā)揮重要作用[8]。許多國(guó)內(nèi)外研究表明cMYC基因異常與NHL 的不良預(yù)后相關(guān)，MYC重排是獨(dú)立于IPI的不良預(yù)后因子[6-9]。cMYC基因異常與DLBCL預(yù)后密切相關(guān)，可作為預(yù)測(cè)DLBCL的預(yù)后因素并指導(dǎo)治療[9]。MYC基因重排是Burkitt淋巴瘤的特征，也發(fā)生在5%～10%的DLBCL患者中。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)DLBCL患者的一個(gè)重要的危險(xiǎn)因素是MYC易位，特別是它與BCL-2易位相連接時(shí)，預(yù)后極差。Johnson等[10]和Shimin等[11]研究發(fā)現(xiàn)，MYC蛋白在DLBCL的兩種亞型中均有表達(dá)，當(dāng)它與BCL-2共同表達(dá)時(shí)預(yù)后不佳，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)的R-CHOP方案治療效果差，MYC蛋白的高表達(dá)與易位相關(guān)。在DLBCL患者中，常有cMYC蛋白過(guò)表達(dá)的現(xiàn)象，Mossafa等[12]發(fā)現(xiàn)DLBCL患者中出現(xiàn)cMYC基因擴(kuò)增，并且這些患者的預(yù)后較差。本研究也發(fā)現(xiàn)了cMYC在DLBCL中的表達(dá)，在ABC及GCB亞型中的表達(dá)率分別為66.7%、54.4%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。生存分析顯示，在ABC亞型DLBCL中，cMYC表達(dá)陽(yáng)性組與陰性組的生存曲線明顯不同，陽(yáng)性組生存率低于陰性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但在全部DLBCL及GCB亞型組并未觀察到類(lèi)似現(xiàn)象。MYC的負(fù)性預(yù)后作用在與BCL-2共表達(dá)患者中明顯[10]，MYC基因擴(kuò)增與BCL-2基因擴(kuò)增正相關(guān)，均為ABC型顯著高于GCB型[13]，BCL-2是NF-κB的重要靶基因，在ABC亞型中，常伴隨NF-κB、BCL-2的過(guò)表達(dá)，由此推測(cè)在ABC亞型，cMYC的負(fù)性預(yù)后作用可能與NF-κB、BCL-2的表達(dá)有關(guān)，但仍需進(jìn)一步研究證實(shí)。

本研究發(fā)現(xiàn)，NF-κB p65和cMYC在ABC亞型的表達(dá)率均高于GCB亞型，在ABC亞型，它們的陽(yáng)性表達(dá)均與預(yù)后差相關(guān)，它們的臨床意義有相似之處。既往研究發(fā)現(xiàn)ABC亞型DLBCL，許多基因上調(diào)，如MYC、BCL-2、cyclinD2等，Lim等[14]研究發(fā)現(xiàn)這些基因的上調(diào)可能與NF-κB在ABC亞型中不斷激活有關(guān)。由此本研究推測(cè)NF-κB p65和cMYC可能在ABC亞型的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中存在一定聯(lián)系，但其機(jī)制仍不清楚，需待進(jìn)一步研究探討。在ABC亞型，NF-κB p65、cMYC的表達(dá)與生存密切相關(guān)，有可能成為ABC亞型新的預(yù)后指標(biāo)，需在臨床工作中進(jìn)一步研究證實(shí)。

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