朱明恒

(南京醫(yī)科大學附屬蘇州醫(yī)院， 江蘇 蘇州 215002)

柴胡是傘形科(Umbelliferae)柴胡屬Bupleurum植物，為我國傳統(tǒng)的中藥，在《神農(nóng)本草經(jīng)》中被列為上品。具有解表和里、疏肝解郁、升舉陽氣之功效，是治療少陽證的首選用藥，中國藥典收載的柴胡為傘形科植物柴胡(BupleurumchinenseDC).或狹葉柴胡(BupleurumscorzonerifoliumWilld.)的根[1]。由于我國柴胡屬植物品種眾多.資源分布廣泛，各地根據(jù)當?shù)厮a(chǎn)柴胡作為習慣用藥的較為普遍，江蘇省大部分地區(qū)即習用狹葉柴胡春季采挖帶根的全草，又稱“春柴胡”，(收錄于《江蘇省中藥材標準》(1989年版))。本院現(xiàn)在使用的即為此品種。而2010年版藥典新增了柴胡的含量測定標準，即含柴胡皂苷a和d的總量不得少于0.30%。故本文運用HPLC法測定春柴胡中柴胡皂苷a、d的含量，希望對地方用藥的質(zhì)量控制和規(guī)范用藥提供借鑒[2～3]。

1 儀器與試藥

島津LC-20AT高效液相色譜儀，Sartorius CP224S型電子分析天平。甲醇、乙腈均為色譜純，氨水為分析純，重蒸餾水為自制。柴胡皂苷a對照品(110777-200507)，柴胡皂苷d對照品(110778-200506)，均由中國藥品生物制品檢定所提供。春柴胡藥材購自蘇州天靈中藥飲片有限公司(批號110918，120211，120603)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Diamonsil C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；以乙腈為流動相A、以水為流動相B照表1進行梯度洗脫；流速：1 mL·min-1；柱溫為室溫，檢測波長210 nm；進樣量10 μL。

表1 流動相的洗脫梯度

2.2 對照品溶液的制備 精密稱定柴胡皂苷a、d對照品適量，置于50 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容，制成柴胡皂苷a濃度為0.4018 mg·mL-1、柴胡皂苷d濃度為0.5238 mg·mL-1的溶液，備用。

2.3 供試品溶液的制備 取樣品粉末(過四號篩)約0.5 g，精密稱定，加入含5%濃氨試液的甲醇溶液25 mL，30℃水溫超聲處理30 min，濾過，用甲醇20 mL分2次洗滌容器及藥渣，洗液與濾液合并，回收溶劑至干。殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.4 標準曲線的制備 精密吸取柴胡皂苷a、d對照品溶液1、2、5、10、15 μL，注入高效液相色譜儀中測定。以峰面積為縱坐標，進樣量為橫坐標進行線性回歸，分別得到回歸方程：柴胡皂苷a：Y=148203X+20919，r=0.9990，柴胡皂苷d：Y=149457X+16283，r=0.9992。表明柴胡皂苷a在0.4018～6.027 μg，柴胡皂苷d在0.5238～7.857 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度實驗 精密吸取柴胡皂苷a、d對照品溶液10 μL，按“2.1”項下色譜條件重復進樣6次，測定峰面積，計算柴胡皂苷a、d的RSD分別為1.70%、1.28%。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取同一份供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10 h進樣分析，計算得柴胡皂苷a、d的RSD分別為1.77%、1.81%。

2.7 重復性試驗 取同一批樣品按“2.3”項下供試品溶液制備方法平行制備6份，按“2.1”項下色譜條件測定峰面積，計算柴胡皂苷a、d的RSD分別為1.84%、1.92%。

2.8 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量樣品粉末6份，每份約1g，分別加入柴胡皂苷a 對照品溶液2mL，柴胡皂苷d對照品溶液4 mL，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件測定，柴胡皂苷a的平均回收率為91.19%，RSD為1.83%；柴胡皂苷d的平均回收率為92.76%，RSD為1.43%。(見表2、3)

表2 柴胡皂苷a加樣回收率試驗結(jié)果(n=6)

表3 柴胡皂苷d加樣回收率試驗結(jié)果(n=6)

2.9 樣品測定 取各樣品適量按按“2.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件測定，結(jié)果見表4。

表4 樣品含量測定結(jié)果(n=3)

3 討論

柴胡皂苷a、d均屬于五環(huán)三萜類皂苷，具有類似的化學結(jié)構(gòu)。在提取過程中若受高溫或酸性的影響，易使其環(huán)氧醚鍵開環(huán)，穩(wěn)定性較差，所以本實驗采用弱堿性溶劑5%氨水一甲醇溶液提取，效果較好。而對照品溶液配成后亦應避光低溫保存。

柴胡通常只將根作為藥用部位，這樣就造成其地上部分藥材的浪費。春柴胡藥材以春季帶根的全草入藥，把柴胡地上部分同樣也作為藥用資源。但這部分藥材中還含有黃酮、揮發(fā)油、木脂素等活性成分。通過對春柴胡有效成分進一步的研究，從而達到全面的質(zhì)量控制，對于柴胡資源充分而合理的利用具有重要的意義。

參考文獻：

[1]中華人民共和國藥典.2010年版一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：264.

[2]肖功勝，楊云，劉富崗，等.柴胡皂苷提取和含量測定方法研究[J].中成藥，2009，31(4)：595-598.

[3]余菁，梁衛(wèi)青.高效液相法測定不同產(chǎn)地柴胡藥材中柴胡皂苷a、d的含量[J].浙江中醫(yī)藥大學學報，2007，31(3)：374-375.