汪一丹,曹新,馮虹,余芝,徐斌

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TRPV1在電針調(diào)節(jié)胃運(yùn)動中的作用

汪一丹,曹新,馮虹,余芝,徐斌

(南京中醫(yī)藥大學(xué),南京 210029)

探討香草酸瞬時(shí)受體亞型1(transient receptor potential vanilloid 1,或vanilloid recepot 1,TRPV1)在電針調(diào)節(jié)胃運(yùn)動中的作用。選用TRPV1基因敲除小鼠(KO小鼠)及野生型C57BL/6小鼠(WT小鼠),針刺足三里、曲池、中脘、胃俞穴,觀察針刺前后胃內(nèi)壓變化。電針WT小鼠足三里穴有興奮,有抑制,表現(xiàn)為輕度興奮為主。電針胃俞、曲池和中脘穴均表現(xiàn)為抑制效應(yīng)。針刺KO小鼠足三里、曲池、中脘、胃俞穴,胃運(yùn)動方向整體表現(xiàn)均為抑制。TRPV1受體對胃運(yùn)動有一定的調(diào)節(jié)作用,針刺TRPV1敲除小鼠可抑制胃運(yùn)動。

TRPV1;電針;胃運(yùn)動;小鼠

針刺對胃運(yùn)動的調(diào)節(jié)涉及神經(jīng)、神經(jīng)遞質(zhì)、激素和慢波、峰電位和細(xì)胞間的信號傳遞等因素。近年研究表明,香草酸瞬時(shí)受體亞型1(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)主要分布于背根神經(jīng)節(jié)和三叉神經(jīng)節(jié)的外周端(痛覺神經(jīng)末梢),在感覺轉(zhuǎn)導(dǎo)中起重要作用。因此,我們考慮能否將TRPV1感受和編碼痛覺的特性與針刺對胃運(yùn)動的作用機(jī)制研究結(jié)合,探討針刺產(chǎn)生相應(yīng)效應(yīng)的可能機(jī)制。本文旨在探討TRPV1在針刺對胃運(yùn)動中的作用。

1 材料與方法

1.1 動物和分組

選用8周齡雄性TRPV1基因敲除小鼠(購自南京大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物模型中心,KO小鼠)及其野生型C57BL/6小鼠(WT小鼠),體重20～25 g。KO小鼠與WT小鼠外貌無差別,每組20只。動物置于南京中醫(yī)藥大學(xué)SPF級動物房飼養(yǎng),實(shí)驗(yàn)前禁食12 h,6 h禁飲。實(shí)驗(yàn)觀察遵循“3R”原則。

實(shí)驗(yàn)儀器選用手術(shù)剪,眼科鉗,壓力轉(zhuǎn)換器,測壓頭,RM5240型信號采集儀。

所選穴位參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》(余曙光主編)常用實(shí)驗(yàn)動物針灸穴位。足三里位于膝關(guān)節(jié)下方,腓骨頭下0.3 cm處的肌溝中。中脘位于臍前方,臍與劍突連線的中點(diǎn)。曲池位于肘關(guān)節(jié)外側(cè)凹陷中。胃俞位于第12胸椎后兩旁的肋間中。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

氨基甲酸乙酯(烏來坦)(0.8 g/kg)常規(guī)腹腔麻醉后,剃除小鼠上腹部毛,于劍突下腹正中矢狀線偏左側(cè)5 mm一字切口切開腹腔,用溫和的生理鹽水紗布推開肝臟暴露胃幽門部及十二指腸上段。將避孕套套在塑料導(dǎo)管一端,導(dǎo)管前端與避孕套之間留有一定空隙,在距離避孕套前端1 mm處用外科線結(jié)扎將兩者固定,制成直徑為20 mm的胃內(nèi)留置氣囊。氣囊內(nèi)及插管內(nèi)充滿雙蒸水,排除氣泡。在十二指腸距胃竇部1.5～2 mm處,避開腸壁上可見的血管,在據(jù)幽門口2～3 mm的十二指腸做一個(gè)一字切口,將氣囊放入胃竇部,切口處縫合固定。插管另一端通過三通裝置與注射器和壓力傳感器相連。記錄儀器為RM6240型四道生理記錄儀,描記胃運(yùn)動,走紙速度5 s/div。測胃內(nèi)壓時(shí),連續(xù)記錄30 min,待動物胃蠕動波穩(wěn)定后開始實(shí)驗(yàn)。記錄不到基礎(chǔ)蠕動波時(shí)通過注射器,經(jīng)三通裝置調(diào)節(jié)胃內(nèi)水囊大小。胃內(nèi)壓由插管經(jīng)三通裝置輸入壓力換能器,將液體壓力信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?經(jīng)生物放大器放大后,輸入RM6240多道生理信號采集系統(tǒng)。

1.3 電針刺激與取穴

首先,連續(xù)記錄10 min胃內(nèi)壓作為基線(對照值),用韓式電針儀,電流0.2 mA,頻率2/15 Hz,電針足三里2 min,并同步記錄。起針后再記錄10 min,待其恢復(fù)至基線或接近基線水平后再給予下一個(gè)處理。依照電針足三里方法分別針刺中脘、曲池和胃俞,并同步記錄胃內(nèi)壓變化。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

為了觀察兩組電針同一穴位對胃內(nèi)壓的效應(yīng)量差異,采用比較各組中同一穴位電針前后胃內(nèi)壓變化率的方法反映這種差異,計(jì)算方法為變化率=[(針刺后胃內(nèi)壓－針刺前胃內(nèi)壓)/針刺前胃內(nèi)壓]×100%。

采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件,對組內(nèi)電針前、后胃內(nèi)壓及差值做描述性統(tǒng)計(jì),表示為均值±標(biāo)準(zhǔn)差,進(jìn)行配對檢驗(yàn),同一穴位的組間比較則進(jìn)行獨(dú)立樣本檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 電針不同穴位對WT小鼠胃內(nèi)壓的影響

如表1所示,電針WT小鼠足三里,胃內(nèi)壓水平以升高為主。電針曲池,胃內(nèi)壓水平以下降為主,與針刺前胃內(nèi)壓相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.01)。電針中脘,胃內(nèi)壓水平降低,與針刺前胃內(nèi)壓相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.01)。電針胃俞,胃內(nèi)壓水平輕度升高。

表1 電針不同穴位對WT小鼠胃內(nèi)壓的影響(±s,kPa)

注:與針刺前比較1)＜0.01

2.2 電針不同穴位對KO小鼠胃內(nèi)壓的影響

如表2所示,電針KO小鼠足三里,胃內(nèi)壓水平以降低為主。電針曲池,胃內(nèi)壓水平以下降為主,與針刺前胃內(nèi)壓相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05)。電針中脘,胃內(nèi)壓水平降低,與針刺前胃內(nèi)壓相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.01)。電針胃俞,胃內(nèi)壓水平降低,與針刺前相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05)。

表2 電針不同穴位對KO小鼠胃內(nèi)壓的影響(±s,kPa)

注:與針刺前比較1)＜0.01,2)＜0.05

2.3 電針同一穴位對WT小鼠和KO小鼠胃內(nèi)壓的調(diào)節(jié)變化率

如表3所示,電針足三里穴,WT小鼠和KO小鼠效應(yīng)方向發(fā)生變化,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05);針刺曲池和中脘穴,兩組小鼠胃內(nèi)壓的變化率均為負(fù)值,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＞0.05);電針胃俞穴,兩組小鼠胃內(nèi)壓的變化率均為負(fù)值,但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05)。

表3 電針同一穴位對兩組小鼠胃內(nèi)壓的調(diào)節(jié)變化率(±s,%)

注:與WT組比較1)＜0.05

3 討論

電針足三里穴,對胃腸運(yùn)動的影響,其效應(yīng)方向具有很大的差異,或促進(jìn)為主,或抑制為主,或呈現(xiàn)雙向性。其與實(shí)驗(yàn)的動物種類、狀態(tài)、腧穴選擇與配伍也密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)選用野生型C57BL/6小鼠,電針足三里穴有興奮,有抑制,但綜合其平均值,表現(xiàn)為輕度興奮為主(與針刺前比較,＞0.05)。但針刺具有同樣遺傳背景的TRPV1基因敲除小鼠,則表現(xiàn)為以抑制為主的效應(yīng)(與針刺前比較,＞0.05)。通過比較兩者對胃內(nèi)壓的調(diào)節(jié)變化率,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05)。針刺TRPV1基因敲除小鼠,對胃俞的抑制效應(yīng),與WT小鼠比較,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05)。曲池和中脘穴均表現(xiàn)為抑制效應(yīng),但WT小鼠比較,效應(yīng)無顯著性差異。針刺KO小鼠足三里、曲池、中脘、胃俞,胃運(yùn)動方向整體表現(xiàn)均為抑制。

延髓是調(diào)節(jié)胃運(yùn)動的重要腦區(qū),對胃運(yùn)動有非常重要的強(qiáng)興奮和抑制作用。而TRPV1主要分布于脊髓背根神經(jīng)節(jié)、三叉神經(jīng)節(jié)、結(jié)狀神經(jīng)節(jié)以及脊髓和周圍神經(jīng)末梢。研究表明大多數(shù)的結(jié)狀神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元投射到嚙齒動物胃和背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元投射到嚙齒動物腸道TRPV1[1],很多胃腸疾病與TRPV1失調(diào)相關(guān)[2-3]。胃腸TRPV1減少,導(dǎo)致胃腸的敏感性降低,對外界刺激表現(xiàn)為抑制為主的效應(yīng)。近來研究表明,TRPV1對胃黏膜存在雙重作用[4],TRPV1有顯著的保護(hù)胃黏膜的作用。Horie S等[5]的研究結(jié)果顯示大鼠胃底中TRPV1陽性神經(jīng)軸突主要為外源性神經(jīng)纖維,被認(rèn)為是感覺傳入神經(jīng)纖維,參與胃的運(yùn)動和血流。

TRPV1作為感知疼痛的關(guān)鍵分子之一,TRPV1通道在痛覺的產(chǎn)生及痛覺敏感性增強(qiáng)病理發(fā)生過程中扮演著重要角色。能引起疼痛的多種因素都能直接或者間接激活TRPV1而引發(fā)或促進(jìn)各種痛覺,特別是炎性痛和熱敏痛[6]。針灸療法作為一種傷害性的機(jī)械刺激,作用于人體某特定部位,激活皮膚傷害性感受器和產(chǎn)生局部的炎癥,調(diào)整機(jī)體機(jī)能從而達(dá)到防治疾病目的的治療方法。針刺產(chǎn)生的效應(yīng)成分,傷害性刺激和局部的炎癥是其主要因素。

可能的原因有以下幾方面。首先,TRPV1在皮膚初級感覺傳入與傳導(dǎo)、胃感覺及運(yùn)動均有作用,與胃關(guān)系密切。TRPV1敲除后,其作用可能得到其他受體的代償,如TRPV3、TRPV4等TRP其他家族都與消化系統(tǒng)息息相關(guān)[7]。這些尚待深究的同族受體,也可在針刺對胃運(yùn)動調(diào)節(jié)中起到關(guān)鍵作用。針刺WT小鼠4穴中,足三里呈現(xiàn)興奮效應(yīng),而TRPV1敲除小鼠則均呈現(xiàn)抑制效應(yīng)。其次,針刺調(diào)節(jié)胃運(yùn)動可因不同部位腧穴及刺激量而異。本實(shí)驗(yàn)動物為TRPV1敲除,選取足三里、曲池、中脘、胃俞4穴。電針不同腧穴效應(yīng)有別于野生組小鼠,提示不同部位TRPV1受體可能對針刺的介導(dǎo)作用大小不一。此外,實(shí)驗(yàn)中2 mA、2/15 Hz的電針刺激量主要興奮傳入纖維中的A類粗纖維。而TRPV1主要分布于哺乳動物的傷害感覺神經(jīng)元,尤其是C類纖維和Aδ類纖維[8],這兩類纖維傳導(dǎo)痛覺速度較慢。因此,不論是否敲除TRPV1,生理狀態(tài)下大部分的針刺效應(yīng)可不明顯。

總之,實(shí)驗(yàn)研究表明,TRPV1受體可介導(dǎo)電針對胃運(yùn)動的調(diào)節(jié),并且主要是以抑制作用為主,但TRPV1受體并非是介導(dǎo)胃運(yùn)動的唯一因素。不同部位的TRPV1對機(jī)體亦可產(chǎn)生不同影響。目前,內(nèi)臟神經(jīng)末梢感受器、效應(yīng)器和各個(gè)內(nèi)臟的各種傳入刺激信號在中樞內(nèi)的傳入聯(lián)系和途徑的認(rèn)識,尚缺乏針刺與外周神經(jīng)關(guān)系的系統(tǒng)性研究。此外,研究結(jié)果涉及個(gè)體差異、針刺方法、刺激量和樣本量等多方面,針刺不同部位的效應(yīng)差機(jī)制尚不明確,有待于進(jìn)一步探討和研究。

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Role of TRPV1 in the Regulation of Gastric Motility by Electroacupuncture

210029,

To discuss the role of transient receptor potential vanilloid 1 (TRPV 1) in the regulation effect of electroacupuncture on gastric motility.TRPV1 gene knock-out mice (KO mice) and wild-type C57BL/6 mice (WT mice) were selected to receive acupuncture at Zusanli (ST36), Quchi (LI11), Zhongwan (CV12), and Weishu (BL21), and the intragastric pressure was observed before and after acupuncture.Electroacupuncture at Zusanli caused both excitation and inhibition in WT mice, predominated by mild excitation, while electroacupuncture at Weishu, Quchi and Zhongwan all caused inhibition effect; in the KO mice, electroacupuncture at Zusanli, Quchi, Zhongwan, and Weishu all inhibited gastric motility.TRPV1 bears certain regulating effect on gastric motility, and acupuncture can inhibit the gastric motility in TRPV gene KO mice.

Transient receptor potential vanilloid 1 (TRPV1); Electroacupuncture; Gastric motility; Mouse

1005-0957(2014)12-1083-03

R2-03

A

10.13460/j.issn.1005-0957.2014.12.1083

2014-05-30

國家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(2011CB505206);國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81202744）;中國中醫(yī)科學(xué)院自主選題項(xiàng)目(ZZKF06003);江蘇省高校自然科學(xué)研究計(jì)劃項(xiàng)目(11KJB360008);江蘇省特色優(yōu)勢學(xué)科資助;江蘇省高校青藍(lán)工程優(yōu)秀科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)資助

汪一丹(1989 - ),女,2012級碩士生,Email:cmppt568@126.com

徐斌(1965 - ),男,研究員,碩士生導(dǎo)師,研究方向?yàn)獒槾绦?yīng)規(guī)律及機(jī)制,Email:xuuuux@sina.com