高蘇亞，李 華，張 韞，范 濤，王 黎，楊 筱

(1.西安醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院,陜西 西安 710021；2.西北大學(xué) 分析科學(xué)研究所,陜西 西安 710069)

復(fù)方硫酸亞鐵葉酸片為衛(wèi)生部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)中收載的抗貧血藥[1]。該藥由硫酸亞鐵、葉酸、黃芪、白術(shù)、當(dāng)歸、干酵母及輔料組成，適應(yīng)于缺鐵性貧血。目前測(cè)定該藥中Fe2+含量大多采用鄰菲啰啉-分光光度法[2]、火焰原子吸收法[3]等，而采用姜黃素-分光光度法測(cè)定Fe2+鮮有文獻(xiàn)報(bào)道。姜黃素與Fe2+的絡(luò)合反應(yīng)靈敏，形成的絡(luò)合物較穩(wěn)定[4-6]。另外，可藥食兩用的姜黃素?zé)o毒、無(wú)污染，可作為理想的顯色劑和染料使用[7]。作者以姜黃素為顯色劑，采用簡(jiǎn)單的分光光度法測(cè)定復(fù)方硫酸亞鐵葉酸片中的Fe2+含量，方法準(zhǔn)確可靠，靈敏度高，拓展了姜黃素與Fe2+相互作用在藥物分析中的應(yīng)用。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

復(fù)方硫酸亞鐵葉酸片：批號(hào)：20091030，20091020，吉林省西點(diǎn)藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司。姜黃素(CUR)：上?；瘜W(xué)試劑三廠；三羥甲基氨基甲烷(Tris)：天津市福晨化學(xué)試劑廠；硫酸亞鐵：天津市化學(xué)試劑三廠；鹽酸：深圳市迪創(chuàng)化工有限公司；無(wú)水乙醇：四川西隴化工廠，上述試劑均為分析純。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所用水為二次蒸餾水。

UV-2450紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)：日本島津公司；PB-10型酸度計(jì)、BS210S電子天平：德國(guó)Sartorious公司。

1.2 溶液制備

姜黃素儲(chǔ)備溶液的配制：精密稱取36.80 mg姜黃素于50 mL容量瓶，加少量無(wú)水乙醇振蕩至溶解，定容，搖勻，即得濃度為2.00×10-3mol/L姜黃素溶液，4 ℃儲(chǔ)存。

標(biāo)準(zhǔn)Fe2+溶液的配制：精密稱取49.70 mg硫酸亞鐵晶體(FeSO4·7H2O)于50 mL容量瓶中，加0.1 mol/L 鹽酸溶解，定容，搖勻，即得質(zhì)量濃度為0.200mg/ mL Fe2+儲(chǔ)備液，儲(chǔ)存于4 ℃冰箱，使用時(shí)取一定量加0.1 mol/L 鹽酸稀釋至質(zhì)量濃度為40 μg/mL。

供試品溶液的制備：取樣品復(fù)方硫酸亞鐵葉酸片10片，精密稱定，去糖衣，研細(xì)，然后精密稱取約0.35 g(相當(dāng)于約50 mg FeSO4)，置于50 mL容量瓶中，加0.1 mol/L HCl溶解并定容，搖勻，離心20 min(2 000 r/min，20 ℃)，并用0.45 μm濾膜濾過(guò)，再精密量取續(xù)濾液 2.50 mL于50 mL容量瓶中，加0.1 mol/L HCl定容，搖勻即得。

陰性對(duì)照溶液的制備：除FeSO4外，其余藥材按藥品標(biāo)準(zhǔn)[1]處方比例精密稱定，并將白術(shù)半量粉碎成細(xì)粉(備用)；然后用6倍量(質(zhì)量)體積分?jǐn)?shù)為70%乙醇將剩余半量白術(shù)和當(dāng)歸采用滲漉法提取，將所得提取液回收乙醇；將黃芪加水煎煮2次，煎煮時(shí)間依次為3 h、2 h，濾過(guò)，與滲漉提取液合并，再減壓濃縮至稠膏，冷卻，與上述備用白術(shù)細(xì)粉、葉酸、干酵母混合均勻，干燥，研細(xì)，即得陰性樣品。最后，按上述“供試品溶液的制備”方法，制得陰性對(duì)照溶液。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

在一系列10 mL容量瓶中分別加入2.5 mL姜黃素儲(chǔ)存溶液、1.0 mL 0.1 mol/L Tris-HCl緩沖溶液(pH=6.50)，精密加入一定量標(biāo)準(zhǔn)Fe2+溶液或供試品溶液，加乙醇至刻度，搖勻，靜置30 min。以相應(yīng)試劑作參比，1.0 cm石英比色皿，狹縫2 nm，測(cè)定其吸收光譜和432 nm波長(zhǎng)處的吸光度[6]。

2 結(jié)果與討論

2.1 姜黃素和Fe2+的紫外-可見(jiàn)吸收光譜

姜黃素和Fe2+的紫外-可見(jiàn)吸收光譜見(jiàn)圖1。

λ/nm圖1 姜黃素和Fe2+的紫外-可見(jiàn)吸收光譜

由圖1可知，F(xiàn)e2+基本無(wú)吸收，姜黃素在430 nm有最大吸收，加入Fe2+后，其吸收略有紅移且吸光度明顯減小。說(shuō)明姜黃素與Fe2+發(fā)生作用(有關(guān)其配合作用在另一篇論文中論述)。

2.2 干擾實(shí)驗(yàn)

按“實(shí)驗(yàn)方法”項(xiàng)作陰性對(duì)照溶液的干擾實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：陰性對(duì)照溶液在432 nm波長(zhǎng)處沒(méi)有明顯吸收，說(shuō)明其它成分對(duì)測(cè)定幾乎無(wú)干擾。

2.3 工作曲線的制備

分別精密量取40 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)Fe2+溶液0.1、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.5、1.8、2.0 mL置10 mL容量瓶中，按“實(shí)驗(yàn)方法”項(xiàng)測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)圖2和表1。

λ/nm圖2 姜黃素-Fe2+工作曲線的吸收光譜圖

圖2和表1結(jié)果表明：吸光度(A)與ρ(Fe2+)(x)的回歸方程為A=0.047 4x+ 0.323 7(r=0.999 5)，在0.40～8.00 μg/mL線性關(guān)系良好。

表1 不同ρ(Fe2+)的吸光度

2.4 精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

分別精密量取 6份0.8 mL標(biāo)準(zhǔn)Fe2+溶液于10 mL容量瓶中，按“實(shí)驗(yàn)方法”測(cè)定，測(cè)得吸光度的RSD= 0.6%(見(jiàn)表2)，表明該方法精密度良好。分別精密吸取供試品溶液(批號(hào)為20091030)1.00 mL置10 mL容量瓶中，共6份，按“實(shí)驗(yàn)方法”操作，平行測(cè)定3次，測(cè)得樣品的平均含量為51.28 mg/片(以FeSO4計(jì))，RSD=1.2%(見(jiàn)表2)；再將其中1份供試品溶液(批號(hào)為20091030)每隔10 min測(cè)定一次，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：該樣品溶液在0.5 h顯色穩(wěn)定，測(cè)得其FeSO4含量在0.5～3 h內(nèi)的RSD為0.8%，表明該方法的重復(fù)性和穩(wěn)定性也良好。

表2 精密度、重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

2.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

分別精密稱取5份已知含量的復(fù)方硫酸亞鐵葉酸片樣品(批號(hào)20091030)適量，分別精密加入標(biāo)準(zhǔn)Fe2+溶液，按“供試品溶液的制備”方法制備溶液；分別精密吸取0.5 mL于10 mL容量瓶中，按“實(shí)驗(yàn)方法”項(xiàng)測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 回收率測(cè)定結(jié)果(n=5)

2.6 樣品測(cè)定

將復(fù)方硫酸亞鐵葉酸片樣品(批號(hào)為20091030，20091020)按“供試品溶液的制備”方法各制備2份溶液，再分別精密吸取1.0 mL制備溶液置10 mL容量瓶中，按“實(shí)驗(yàn)方法”測(cè)定。測(cè)得2批樣品中FeSO4平均含量分別為51.28 mg/片和48.52 mg/片，分別為標(biāo)示量(FeSO450 mg/片)的102.5%和97.04%。

3 結(jié) 論

在姜黃素與Fe2+相互作用研究的基礎(chǔ)上可知，在Tris-HCl緩沖液(pH=6.5)中，姜黃素與Fe2+反應(yīng)可形成較穩(wěn)定的酒紅色配合物。因此作者建立了姜黃素-分光光度法測(cè)定復(fù)方硫酸亞鐵葉酸片中Fe2+，其吸光度(A)與ρ(Fe2+)(x)在0.40～8.00 μg/mL線性方程為A=0.047 4x+ 0.323 7(r=0.999 5)，呈良好的線性關(guān)系。該方法簡(jiǎn)單靈敏，結(jié)果可靠，且無(wú)毒環(huán)保，可為藥物中Fe2+的含量測(cè)定提供參考。

[ 參 考 文 獻(xiàn) ]

[1] 衛(wèi)生部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)(新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)西藥第三十冊(cè)).WS1-(X-072)-2002Z,復(fù)方硫酸亞鐵葉酸片[S].北京:人民衛(wèi)生出版社,2008：X30-X211.

[2] 戴德銀.實(shí)用新藥特藥手冊(cè)(第4版)[M].北京:人民軍醫(yī)出版社,2007：928.

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[7] 高蘇亞.藥物分子與生物相關(guān)物質(zhì)相互作用的方法學(xué)研究及其在藥物分析中的應(yīng)用[D].西北大學(xué),2012：42-44.