胡加文，李天寶，王春利，李文斌

(1.江門出入境檢驗(yàn)檢疫局，廣東江門 529000； 2.北京迪馬科技有限公司，北京 100029)

固相萃取-液相色譜法測(cè)定方便面中苯并芘*

胡加文1，李天寶1，王春利1，李文斌2

(1.江門出入境檢驗(yàn)檢疫局，廣東江門 529000； 2.北京迪馬科技有限公司，北京 100029)

建立固相萃取、高效液相色譜測(cè)定方便面中苯并芘的方法。采用正己烷作為萃取溶劑，經(jīng)苯并芘檢測(cè)專用固相萃取柱ProElut BaP凈化提取，用高效液相色譜儀對(duì)方便面中苯并芘的含量進(jìn)行測(cè)定。在0.5～10.0 μg/kg范圍內(nèi)苯并芘的質(zhì)量濃度與色譜峰面積呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.999 2，方法的檢出限為0.3 μg/kg。調(diào)味包和面餅中苯并芘的加標(biāo)回收率分別為86.3%～95.7%和88.8%～96.6%，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為3.2%～3.5%和2.7%～3.2%(n=6)。該方法適合方便面中苯并芘含量的日常檢測(cè)。

固相萃?。桓咝б合嗌V；方便面；苯并芘

苯并芘又稱苯并(α)芘(BaP)是一種強(qiáng)致癌物質(zhì)，它是碳水化合物、蛋白質(zhì)和脂肪等有機(jī)化合物在高溫條件下不完全燃燒時(shí)發(fā)生聚合反應(yīng)產(chǎn)生的高活性間接性致癌物質(zhì)。苯并芘廣泛存在于煙熏、油炸、燒烤、烘焙等食品中。研究表明，苯并芘可致肺癌、肝癌、腸胃道癌癥等，屬于一級(jí)致癌物［1］。前不久，韓國(guó)某知名方便面品牌生產(chǎn)的6款方便面被卷入致癌物苯并芘風(fēng)波，引起各界高度關(guān)注。我國(guó)對(duì)食品中苯并芘的限量做出了嚴(yán)格的規(guī)定，要求谷物及其制品、肉及肉制品（主要為熏、燒、烤肉類）、水產(chǎn)動(dòng)物及其制品（主要為熏、烤水產(chǎn)品）中苯并芘含量不得超過5 μg/kg，油脂及其制品中苯并芘含量不得超過10 μg/kg［2］。

目前，測(cè)定苯并芘的方法主要有液相色譜法、氣相色譜法和薄層層析法［3-8］。目前我國(guó)沒有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定方便面中苯并芘的檢測(cè)，迪馬科技此前曾開發(fā)過植物油及水產(chǎn)品中苯并芘檢測(cè)專用固相萃取柱-ProElut BaP，用戶使用后均反映效果良好。在此基礎(chǔ)上，筆者進(jìn)行了進(jìn)一步研究，使用ProElut BaP成功實(shí)現(xiàn)方便面類樣品中苯并芘的檢測(cè)。固相萃取技術(shù)作為前處理手段具有樣品預(yù)處理簡(jiǎn)單，溶劑用量少，環(huán)境污染小，分離效果好，回收率穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)［9-12］。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：Agilent 1200型，配二極管陣列檢測(cè)器(DAD)，美國(guó)安捷倫科技有限公司；

離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不小于10 000 r/min，德國(guó)Sigma實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)股份有限公司；

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：R-210型，瑞士步琦有限公司；

苯并芘標(biāo)準(zhǔn)品：純度不小于99.0%，德國(guó)Dr. Ehrenstorfer公司；

正己烷、乙腈、四氫呋喃：色譜純，美國(guó)天地試劑公司；

SPE固相萃取柱：ProElut DPC型，3 g/(12 mL)，北京迪馬科技有限公司；

有機(jī)系微孔濾膜：孔徑0.45 μm，天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司。

1.2 樣品處理

1.2.1 方便面調(diào)料包處理

稱取0.4 g樣品，精確到0.001 g，用5 mL正己烷溶解稀釋，作為待凈化液。將待凈化液加入經(jīng)過活化(使用前向固相萃取柱加30 mL正己烷，流出液棄去)的固相萃取小柱，收集流出液；再加入50 mL正己烷淋洗，收集流出液。合并以上兩個(gè)步驟流出液，在30℃下減壓蒸餾，將收集液蒸干，以乙腈-四氫呋喃(體積比為9∶1)溶液定容至1 mL后供HPLC分析。

1.2.2 方便面面餅處理

稱取1 g樣品于50 mL離心管中，加入15 mL正己烷。渦旋混合2 min，超聲提取5 min，于6 000 r/min下離心3 min，收集上清液；殘?jiān)儆?5 mL正己烷提取，每次渦旋混合2 min，超聲提取5 min，于5 000 r/min下離心3 min。合并兩次提取液，在30℃下用減壓蒸餾將提取液蒸干，然后用5 mL正己烷溶解，待凈化。凈化前先對(duì)固相萃取柱進(jìn)行活化(加30 mL正己烷，流出液棄去)，然后將待凈化液加入小柱，收集流出液；再加入70 mL正己烷淋洗，收集流出液。合并上述兩個(gè)步驟的流出液，在40 ℃下減壓蒸餾將收集的流出液蒸干，然后用乙腈-四氫呋喃(體積比為9∶1)溶液定容至1 mL后供HPLC分析。

1.3 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm，北京迪馬科技有限公司)；流動(dòng)相：乙腈-水(體積比為97∶3)；流量：1.0 mL/min；檢測(cè)器：DAD；檢測(cè)波長(zhǎng)：激發(fā)波長(zhǎng)為370 nm，發(fā)射波長(zhǎng)為406 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣體積：10 μL。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品凈化條件的優(yōu)化

由于方便面調(diào)味包和面餅的基質(zhì)都比較復(fù)雜，含有大量的油脂等干擾物，為了達(dá)到除去油脂及其它雜質(zhì)的目的，需要在前處理過程對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行凈化、富集。因此本方法采用經(jīng)過活化的苯并芘檢測(cè)專用固相萃取柱-ProElut BaP對(duì)方便面樣品提取溶液進(jìn)行凈化處理，處理后的溶液直接使用高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定。

樣品溶液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)過程應(yīng)特別注意以下幾個(gè)參數(shù)設(shè)定：真空度約15.6 kPa；冷凝水10℃左右；水浴鍋溫度40℃左右；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)過程不能出現(xiàn)暴沸現(xiàn)象；進(jìn)行首次樣品旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)前，需先旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)50 mL正己烷沖洗系統(tǒng)。

確定出最佳的固相萃取過柱流量，既可以保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，又可以保證實(shí)驗(yàn)的效率［13］。通過使用不銹鋼點(diǎn)膠針頭等限速裝置進(jìn)行限定固相萃取柱過柱流量，對(duì)1.0，2.5 μg/kg苯并芘標(biāo)準(zhǔn)溶液在不同固相萃取過柱流量條件下回收率進(jìn)行對(duì)比分析，結(jié)果見表1。從表1可以看出，在1 mL/min流量時(shí)苯并芘回收率達(dá)到88.3%～108.1%，而隨著流量的增大回收率明顯下降，所以選擇1 mL/min的過柱流量。

表1 不同固相萃取柱流量條件下苯并芘的回收率比較

2.2 液相色譜條件的選擇

分別以乙腈-水體積比為97∶3，95∶5，90∶10，85∶15，80∶20作為流動(dòng)相進(jìn)行試驗(yàn)。當(dāng)流動(dòng)相乙腈-水體積比為97∶3時(shí)，按照1.2和1.3給出的實(shí)驗(yàn)條件分別對(duì)方便面調(diào)味包和面餅進(jìn)行加標(biāo)樣品的測(cè)試，所得方便面調(diào)味包和面餅中苯并芘加標(biāo)分析色譜圖分別見圖1和圖2。從圖1和圖2中可以看出，苯并芘的相對(duì)保留時(shí)間為8.7 min，分離效果好，峰形對(duì)稱。

2.3 線性范圍與檢出限

用流動(dòng)相稀釋制備0.5，1.0，2.0，5.0，10.0 μg/kg的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照1.3色譜條件測(cè)定。結(jié)果表明，苯并芘在0.5～10.0 μg/kg范圍時(shí)，色譜峰面積Y與其質(zhì)量分?jǐn)?shù)X呈良好線性關(guān)系，線性回歸方程為Y=40 252X+1 996.3，線性相關(guān)系數(shù)r2=0.999 2。以S/N=3確定檢出限，得到苯并芘的檢出限為0.3 μg/kg，遠(yuǎn)低于歐盟、世衛(wèi)組織都針對(duì)煙熏食物中苯并芘5 μg/kg和10 μg/kg的限量要求。

圖1 調(diào)料包中苯并芘(添加水平2.5 μg/kg)的液相色譜圖

圖2 面餅中苯并芘(添加水平1.0 μg/kg)的液相色譜圖

2.4 回收試驗(yàn)與精密度試驗(yàn)

采用加標(biāo)回收法，以不含苯并芘的方便面調(diào)味包和面餅為空白樣品基質(zhì)，在1.0，2.5 μg/kg 2個(gè)濃度水平上進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，每個(gè)水平平行測(cè)定6次，苯并芘的回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差見表2。

從表2中可以看出，調(diào)味包和面餅中苯并芘的回收率分別為86.3%～95.7%和88.8%～96.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為3.2%～3.5%和2.7%～3.2%，說明該方法具有較高的精密度與準(zhǔn)確度。

3 結(jié)語(yǔ)

基于層析柱的原理，采用苯并芘檢測(cè)專用固相萃取柱ProElut BaP將方便面調(diào)味包和面餅樣品中的干擾物油脂與苯并芘分離，達(dá)到除油及其它雜質(zhì)的目的，處理后的溶液可直接使用高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定。該方法操作簡(jiǎn)單，分析速度快，適用于方便面中苯并芘的日常分析工作。

表2 苯并芘的加標(biāo)回收率與相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

［1］劉艷琴，王浩，楊紅梅.凝膠滲透色譜-高效液相色譜法測(cè)定植物油中苯并芘［J］.食品科技，2013，38(1): 327-329.

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［3］趙月蘭，秦建華.苯并芘對(duì)動(dòng)物性食品的污染與檢測(cè)［J］.中國(guó)動(dòng)物檢疫，1996，13(2): 15-16.

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［9］王鑫，許小苗，俞曄，等.固相萃取-氣相色譜法同時(shí)測(cè)定水中的酞酸酯類環(huán)境激素［J］.食品工業(yè)科技，2008，29(4): 287-289.

［10］傅若農(nóng).近年國(guó)內(nèi)固相萃取-色譜分析的進(jìn)展［J］.分析試驗(yàn)室，2007，26(2): 100-122.

［11］張哲.固相萃取技術(shù)在環(huán)境監(jiān)測(cè)領(lǐng)域中的應(yīng)用及研究進(jìn)展［J］.現(xiàn)代科學(xué)儀器，2013(3): 33-36.

［12］李廣慶，馬國(guó)輝.固相萃取技術(shù)在食品痕量殘留和污染分析中的應(yīng)用［J］.色譜，2011，29(7): 606-612.

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Detection of Benzopyrene in Instant Noodles by Solid-Phase Extraction-High Performance Liquid Chromatography

Hu Jiawen1， Li Tianbao1， Wang Chunli1， Li Wenbin2
(1. Jiangmen Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau， Jiangmen 529000， China；2. Dikma Technologies incorporation， Beijing 100029， China)

A method for determining benzopyrene in instant noodles based on solid-phase extraction and high performance liquid chromatography was established. Samples were extracted with n-hexane，purified with solid phase extraction column(ProElut BaP)，and the extraction liquid was determined by high performance liquid chromatography. The concentration of benzopyrene was linear with chromatographic peak area in the range of 0.5-10.0 μg/kg with the correlation coefficient of 0.999 2，and the detection limit was 0.3 μg/kg. The recoveries of seasoning packet and instant noodles block were 86.3%-95.7%, 88.8%-96.6%, respectively，and RSDs were 3.2%-3.5%, 2.7%-3.2%(n=6), respectively. The method is suitable for the determination of benzopyrene in instant noodles.

solid-phase extraction; high performance liquid chromatography; instant noodles; benzopyrene

O657.7

A

1008-6145(2014)03-0025-03

10.3969/j.issn.1008-6145.2014.03.007

*廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2011B010400019)；國(guó)家質(zhì)檢總局科技計(jì)劃項(xiàng)目(2014IK169)；江門市科技計(jì)劃項(xiàng)目[江財(cái)工(2012)248號(hào)]

聯(lián)系人：李天寶；E-mail: litb@jm.gdciq.gov.cn

2014-03-12