于 浩 宋莎莎

（山東省乳山市南黃鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)工作站，山東乳山 264500）

牛巴氏桿菌病是由巴氏桿菌引起的一種急性、熱性傳染病，主要經(jīng)消化道傳染，其次，為呼吸道或傷口傳染[1，2]。本病一般呈散發(fā)性流行，通常是突然發(fā)病，發(fā)生高熱和肺炎，有時(shí)表現(xiàn)水腫病變，各臟器出血等[3，4]。

2013年5月，乳山市某肉牛場(chǎng)150余頭9月齡左右的育肥黃牛暴發(fā)此病。5月初從濟(jì)寧購(gòu)進(jìn)，5月中旬開(kāi)始陸續(xù)發(fā)病、死亡，截止6月10日大群發(fā)病，死亡10余頭，遂采集病料進(jìn)行病原菌分離鑒定及藥敏試驗(yàn)，篩選敏感藥物，合理選擇用藥，為該牛場(chǎng)的病情控制提供及時(shí)有效的幫助。

1 試驗(yàn)材料與儀器

1.1 試驗(yàn)材料

采集該牛場(chǎng)糞便、血液，并取病死牛肺、淋巴結(jié)、脾臟等病變臟器。

1.2 主要試劑及培養(yǎng)基

三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基、革蘭氏染液、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)肉湯、尿素酶培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂及微量糖發(fā)酵管等。

1.3 試驗(yàn)儀器

自動(dòng)電熱壓力蒸汽滅菌器，電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，電熱恒溫培養(yǎng)箱，超凈工作臺(tái)。

1.4 抗菌藥物紙片

環(huán)丙沙星、林可霉素、慶大霉素、強(qiáng)力霉素、鏈霉素及頭孢噻呋等。

2 試驗(yàn)方法

2.1 臨床癥狀和病理觀察

2.1.1 臨床癥狀觀察

觀察病牛精神狀態(tài)、體表特征、糞便顏色和質(zhì)地、尿液顏色以及檢測(cè)體溫、呼吸數(shù)和心率等臨床特征，并詢問(wèn)養(yǎng)殖場(chǎng)技術(shù)人員病死牛的病程變化情況。

2.1.2 病理剖檢觀察

對(duì)病死牛進(jìn)行剖檢，觀察其可視粘膜、胃腸道、脾臟、肺臟、血液等病變情況。

2.2 細(xì)菌的分離純化和鏡檢

2.2.1 病原菌分離純化

將病料無(wú)菌接種于血瓊脂培養(yǎng)基上，于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況、菌落特征。然后挑取可疑菌落再接種于血瓊脂培養(yǎng)基上進(jìn)行純化，將純培養(yǎng)細(xì)菌接種于麥康凱培養(yǎng)基上，37℃恒溫培養(yǎng)24 h，觀察記錄其生長(zhǎng)情況。

2.2.2 鏡檢

挑取可疑菌落，革蘭氏染色、鏡檢。

2.3 細(xì)菌的生化鑒定

2.3.1 糖發(fā)酵

將待檢菌株分別接種在蔗糖、麥芽糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、尿素、枸櫞酸微量發(fā)酵生化管中，于37℃恒溫培培養(yǎng)48 h，觀察記錄結(jié)果。

2.3.2 尿素酶試驗(yàn)

將待檢菌種做穿刺劃線，接種于尿素酶斜面培養(yǎng)基中，37℃恒溫培養(yǎng)24h，觀察記錄結(jié)果。若培養(yǎng)基由黃色變?yōu)榧t色為陽(yáng)性，否則為陰性。

2.3.3 三糖鐵試驗(yàn)

將待檢細(xì)菌穿刺接種于三糖鐵（TSI）瓊脂中，37℃恒溫培養(yǎng)24 h，觀察記錄結(jié)果。

2.4 藥敏試驗(yàn)

2.4.1 菌液的制備

挑取血瓊脂培養(yǎng)基上的3～5個(gè)菌落，加入無(wú)菌的盛有2～3 ml營(yíng)養(yǎng)肉湯的離心管中。37℃恒溫培養(yǎng)12 h，備用。

2.4.2 藥敏試驗(yàn)

參照有關(guān)資料介紹方法進(jìn)行[5]。取上述菌液0.1 ml于血瓊脂平板上，涂勻，室溫干燥5 min，將藥敏紙片置于培養(yǎng)基表面。37 ℃恒溫培養(yǎng)12 h，觀察記錄結(jié)果。

2.5 藥物治療試驗(yàn)

根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果對(duì)牛群進(jìn)行藥物治療，并記錄治療效果。

3 結(jié)果

3.1 臨床癥狀

患牛突然發(fā)病，體溫升高，達(dá)41℃～42℃，精神沉郁，食欲、飲欲不振，反芻次數(shù)減少；鼻鏡干燥，呼吸困難，由鼻孔流出大量粘性液體；有的帶有血色，糞便成稀糊狀并混有血液，有的糞便排泄物中帶有大塊的壞死脫落的腸粘膜。病牛努責(zé)頻繁，有里急后重的表現(xiàn)。有的病牛眼睛紅腫、流淚?？崴聘忻?，當(dāng)?shù)孬F醫(yī)按感冒和腸炎進(jìn)行治療近1周，結(jié)果不但沒(méi)有抑制病情發(fā)展，反而出現(xiàn)死亡病例增多的現(xiàn)象。

3.2 病理變化

全身淋巴結(jié)腫大、出血，氣管內(nèi)有大量泡沫樣粘液，肺臟充血、出血、淤血，呈大理石樣，胸腔和心包積液；肝臟腫大，膽汁潴留，呈墨綠色；大網(wǎng)膜和腸系膜上有大面積彌漫性點(diǎn)狀、片狀出血，真胃和十二指腸粘膜水腫、增厚、出血，結(jié)腸呈紫紅色，有的發(fā)生壞死。

3.3 細(xì)菌分離結(jié)果

3.3.1 細(xì)菌分離

從所采集病料中共分離出3株巴氏桿菌，由淋巴結(jié)中得到的菌株定為1號(hào)菌，由糞便中得到的菌株定位為2號(hào)菌，由肺中得到的菌株定為3號(hào)菌。

細(xì)菌在血瓊脂平板上生長(zhǎng)良好，菌落呈淡灰色、圓形、濕潤(rùn)、露珠樣小菌落，無(wú)溶血現(xiàn)象。在麥康凱培養(yǎng)基上1號(hào)細(xì)菌不生長(zhǎng)，2號(hào)、3號(hào)細(xì)菌生長(zhǎng)良好且菌落邊緣整齊表面光滑。

3.3.2 染色鏡檢

細(xì)菌呈革蘭氏陰性，單個(gè)存在，兩端鈍圓兩極濃染。

3.4 生化試驗(yàn)結(jié)果

對(duì)所分離出的3株巴氏桿菌進(jìn)行生化試驗(yàn)鑒定，其中，1號(hào)菌株蔗糖、尿素、葡萄糖、甘露醇為陽(yáng)性，其余為陰性。2號(hào)、3號(hào)菌株蔗糖、尿素、乳糖、麥芽糖、葡萄糖、甘露醇為陽(yáng)性，三糖鐵試驗(yàn)和尿素酶試驗(yàn)為陽(yáng)性，其余為陰性。根據(jù)各試驗(yàn)結(jié)果可以推斷出1號(hào)為多殺性巴氏桿菌，2號(hào)、3號(hào)為產(chǎn)氣性巴氏桿菌。生化鑒定結(jié)果見(jiàn)表1。

3.5 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

通過(guò)藥敏試驗(yàn)可知，多殺性巴氏桿菌和產(chǎn)氣性巴氏桿菌對(duì)頭孢菌素和強(qiáng)力霉素較為敏感。藥敏試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 生化試驗(yàn)試驗(yàn)結(jié)果

表2 不同藥物對(duì)巴氏桿菌的抑菌圈記錄表

3.6 治療

根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果，發(fā)病后，采用頭孢噻呋鈉10 mg/kg·bw進(jìn)行治療連用5 d，效果較好，對(duì)于病情嚴(yán)重的牛用葡萄糖靜脈注射進(jìn)行補(bǔ)液，經(jīng)治療，除病情嚴(yán)重的1頭牛死亡外，其余全部治愈而且再無(wú)新病例發(fā)生。

4 討論

牛巴氏桿菌病是一種常見(jiàn)多發(fā)的烈性熱性傳染病，對(duì)養(yǎng)牛業(yè)危害非常嚴(yán)重。巴氏桿菌為條件病原菌，一些誘發(fā)因素如營(yíng)養(yǎng)不良，寄生蟲(chóng)感染、長(zhǎng)途運(yùn)輸、飼養(yǎng)管理?xiàng)l件不良等都可促進(jìn)本病發(fā)生[6，7]。該牛場(chǎng)是在購(gòu)買后不久發(fā)病，探究其發(fā)病原因，可能是在長(zhǎng)途運(yùn)輸過(guò)程中，機(jī)體處于長(zhǎng)時(shí)間的應(yīng)激狀態(tài)，神經(jīng)系統(tǒng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)功能紊亂引起機(jī)體營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)大量消耗，機(jī)體免疫力下降，從而導(dǎo)致該病的發(fā)生。邢玫等就曾報(bào)道過(guò)運(yùn)輸應(yīng)激能導(dǎo)致牛場(chǎng)暴發(fā)巴氏桿菌病。此外，在飼養(yǎng)過(guò)程中，養(yǎng)殖戶要特別注意環(huán)境衛(wèi)生，及時(shí)進(jìn)行環(huán)境的消毒。

目前，許多地方獸醫(yī)盲目使用廣譜抗菌藥以致使巴氏桿菌產(chǎn)生了廣泛的耐藥性。因此，在臨床治療時(shí)，應(yīng)先進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，不僅能及時(shí)有效的治療疾病而且能最大限度減少耐藥性的產(chǎn)生。

多殺性巴氏桿菌致病率高，病死率也高，在防治過(guò)程中應(yīng)該預(yù)防為主。對(duì)發(fā)病死亡牛深埋消毒，污染環(huán)境、用具、廄舍徹底清掃消毒；對(duì)發(fā)病牛和疑似病牛立即隔離進(jìn)行治療，健康牛要做好認(rèn)真觀察，同群牛和周圍牛進(jìn)行緊急預(yù)防注射；加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，增強(qiáng)牛體抵抗力[8]。

[1]Carter，G.R.，Am[J].Vet.Res.，1955，（16）：481-484.

[2]郭大和，鄭明，潘松年.我國(guó)多殺性巴氏桿菌莢膜抗原的血清學(xué)鑒定[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，1979，10（2）：67-78.

[3]閆海.牦牛巴氏桿菌病的調(diào)查與防治[J].甘肅畜牧獸醫(yī)，2007，37（1）：33-34.

[4]張立成.高原牦牛巴氏桿菌病流行特點(diǎn)與分析[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2007，43（7）：46.

[5]HEDDLESTON K L，REBERS P A. Fowl cholera：cross-immunity induced in turkeys with formalin-killed in-vivo-propagated Pasteurella mu tocida[J].A-vian Dis，1972，16（3）：578-586.

[6]余旭平，鄔棟棟，劉曉寧，等. 血清1和3型多殺性巴氏桿菌鐵調(diào)控外膜蛋白共同抗原的初步分析[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2008，39（2）：245-250.

[7]朱進(jìn)江，陳建新，余銀江，等.牛巴氏桿菌病的診治[J].貴州畜牧獸醫(yī)，2008，23（4）：35.

[8]楊玉蘭.牛巴氏桿菌病的臨床診斷與綜合防治[J].農(nóng)技服務(wù)，2009，26（1）：112-118.

[9]李平安，楊蓮茹，商曉桂，等.牛溶血性巴氏桿菌的分離鑒定[J].內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，29（1）：1-3.

[10]邢玫，張嵐，張波.巴氏桿菌病的診斷與治療[J].新疆畜牧業(yè)，2007，（2）：30-31.