于 浩 宋莎莎
(山東省乳山市南黃鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)工作站,山東乳山 264500)
牛巴氏桿菌病是由巴氏桿菌引起的一種急性、熱性傳染病,主要經(jīng)消化道傳染,其次,為呼吸道或傷口傳染[1,2]。本病一般呈散發(fā)性流行,通常是突然發(fā)病,發(fā)生高熱和肺炎,有時(shí)表現(xiàn)水腫病變,各臟器出血等[3,4]。
2013年5月,乳山市某肉牛場(chǎng)150余頭9月齡左右的育肥黃牛暴發(fā)此病。5月初從濟(jì)寧購(gòu)進(jìn),5月中旬開(kāi)始陸續(xù)發(fā)病、死亡,截止6月10日大群發(fā)病,死亡10余頭,遂采集病料進(jìn)行病原菌分離鑒定及藥敏試驗(yàn),篩選敏感藥物,合理選擇用藥,為該牛場(chǎng)的病情控制提供及時(shí)有效的幫助。
采集該牛場(chǎng)糞便、血液,并取病死牛肺、淋巴結(jié)、脾臟等病變臟器。
三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基、革蘭氏染液、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)肉湯、尿素酶培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂及微量糖發(fā)酵管等。
自動(dòng)電熱壓力蒸汽滅菌器,電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱,電熱恒溫培養(yǎng)箱,超凈工作臺(tái)。
環(huán)丙沙星、林可霉素、慶大霉素、強(qiáng)力霉素、鏈霉素及頭孢噻呋等。
2.1.1 臨床癥狀觀察
觀察病牛精神狀態(tài)、體表特征、糞便顏色和質(zhì)地、尿液顏色以及檢測(cè)體溫、呼吸數(shù)和心率等臨床特征,并詢問(wèn)養(yǎng)殖場(chǎng)技術(shù)人員病死牛的病程變化情況。
2.1.2 病理剖檢觀察
對(duì)病死牛進(jìn)行剖檢,觀察其可視粘膜、胃腸道、脾臟、肺臟、血液等病變情況。
2.2.1 病原菌分離純化
將病料無(wú)菌接種于血瓊脂培養(yǎng)基上,于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h,觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況、菌落特征。然后挑取可疑菌落再接種于血瓊脂培養(yǎng)基上進(jìn)行純化,將純培養(yǎng)細(xì)菌接種于麥康凱培養(yǎng)基上,37℃恒溫培養(yǎng)24 h,觀察記錄其生長(zhǎng)情況。
2.2.2 鏡檢
挑取可疑菌落,革蘭氏染色、鏡檢。
2.3.1 糖發(fā)酵
將待檢菌株分別接種在蔗糖、麥芽糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、尿素、枸櫞酸微量發(fā)酵生化管中,于37℃恒溫培培養(yǎng)48 h,觀察記錄結(jié)果。
2.3.2 尿素酶試驗(yàn)
將待檢菌種做穿刺劃線,接種于尿素酶斜面培養(yǎng)基中,37℃恒溫培養(yǎng)24h,觀察記錄結(jié)果。若培養(yǎng)基由黃色變?yōu)榧t色為陽(yáng)性,否則為陰性。
2.3.3 三糖鐵試驗(yàn)
將待檢細(xì)菌穿刺接種于三糖鐵(TSI)瓊脂中,37℃恒溫培養(yǎng)24 h,觀察記錄結(jié)果。
2.4.1 菌液的制備
挑取血瓊脂培養(yǎng)基上的3~5個(gè)菌落,加入無(wú)菌的盛有2~3 ml營(yíng)養(yǎng)肉湯的離心管中。37℃恒溫培養(yǎng)12 h,備用。
2.4.2 藥敏試驗(yàn)
參照有關(guān)資料介紹方法進(jìn)行[5]。取上述菌液0.1 ml于血瓊脂平板上,涂勻,室溫干燥5 min,將藥敏紙片置于培養(yǎng)基表面。37 ℃恒溫培養(yǎng)12 h,觀察記錄結(jié)果。
根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果對(duì)牛群進(jìn)行藥物治療,并記錄治療效果。
患牛突然發(fā)病,體溫升高,達(dá)41℃~42℃,精神沉郁,食欲、飲欲不振,反芻次數(shù)減少;鼻鏡干燥,呼吸困難,由鼻孔流出大量粘性液體;有的帶有血色,糞便成稀糊狀并混有血液,有的糞便排泄物中帶有大塊的壞死脫落的腸粘膜。病牛努責(zé)頻繁,有里急后重的表現(xiàn)。有的病牛眼睛紅腫、流淚??崴聘忻?,當(dāng)?shù)孬F醫(yī)按感冒和腸炎進(jìn)行治療近1周,結(jié)果不但沒(méi)有抑制病情發(fā)展,反而出現(xiàn)死亡病例增多的現(xiàn)象。
全身淋巴結(jié)腫大、出血,氣管內(nèi)有大量泡沫樣粘液,肺臟充血、出血、淤血,呈大理石樣,胸腔和心包積液;肝臟腫大,膽汁潴留,呈墨綠色;大網(wǎng)膜和腸系膜上有大面積彌漫性點(diǎn)狀、片狀出血,真胃和十二指腸粘膜水腫、增厚、出血,結(jié)腸呈紫紅色,有的發(fā)生壞死。
3.3.1 細(xì)菌分離
從所采集病料中共分離出3株巴氏桿菌,由淋巴結(jié)中得到的菌株定為1號(hào)菌,由糞便中得到的菌株定位為2號(hào)菌,由肺中得到的菌株定為3號(hào)菌。
細(xì)菌在血瓊脂平板上生長(zhǎng)良好,菌落呈淡灰色、圓形、濕潤(rùn)、露珠樣小菌落,無(wú)溶血現(xiàn)象。在麥康凱培養(yǎng)基上1號(hào)細(xì)菌不生長(zhǎng),2號(hào)、3號(hào)細(xì)菌生長(zhǎng)良好且菌落邊緣整齊表面光滑。
3.3.2 染色鏡檢
細(xì)菌呈革蘭氏陰性,單個(gè)存在,兩端鈍圓兩極濃染。
對(duì)所分離出的3株巴氏桿菌進(jìn)行生化試驗(yàn)鑒定,其中,1號(hào)菌株蔗糖、尿素、葡萄糖、甘露醇為陽(yáng)性,其余為陰性。2號(hào)、3號(hào)菌株蔗糖、尿素、乳糖、麥芽糖、葡萄糖、甘露醇為陽(yáng)性,三糖鐵試驗(yàn)和尿素酶試驗(yàn)為陽(yáng)性,其余為陰性。根據(jù)各試驗(yàn)結(jié)果可以推斷出1號(hào)為多殺性巴氏桿菌,2號(hào)、3號(hào)為產(chǎn)氣性巴氏桿菌。生化鑒定結(jié)果見(jiàn)表1。
通過(guò)藥敏試驗(yàn)可知,多殺性巴氏桿菌和產(chǎn)氣性巴氏桿菌對(duì)頭孢菌素和強(qiáng)力霉素較為敏感。藥敏試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。
表1 生化試驗(yàn)試驗(yàn)結(jié)果
表2 不同藥物對(duì)巴氏桿菌的抑菌圈記錄表
根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果,發(fā)病后,采用頭孢噻呋鈉10 mg/kg·bw進(jìn)行治療連用5 d,效果較好,對(duì)于病情嚴(yán)重的牛用葡萄糖靜脈注射進(jìn)行補(bǔ)液,經(jīng)治療,除病情嚴(yán)重的1頭牛死亡外,其余全部治愈而且再無(wú)新病例發(fā)生。
牛巴氏桿菌病是一種常見(jiàn)多發(fā)的烈性熱性傳染病,對(duì)養(yǎng)牛業(yè)危害非常嚴(yán)重。巴氏桿菌為條件病原菌,一些誘發(fā)因素如營(yíng)養(yǎng)不良,寄生蟲(chóng)感染、長(zhǎng)途運(yùn)輸、飼養(yǎng)管理?xiàng)l件不良等都可促進(jìn)本病發(fā)生[6,7]。該牛場(chǎng)是在購(gòu)買后不久發(fā)病,探究其發(fā)病原因,可能是在長(zhǎng)途運(yùn)輸過(guò)程中,機(jī)體處于長(zhǎng)時(shí)間的應(yīng)激狀態(tài),神經(jīng)系統(tǒng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)功能紊亂引起機(jī)體營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)大量消耗,機(jī)體免疫力下降,從而導(dǎo)致該病的發(fā)生。邢玫等就曾報(bào)道過(guò)運(yùn)輸應(yīng)激能導(dǎo)致牛場(chǎng)暴發(fā)巴氏桿菌病。此外,在飼養(yǎng)過(guò)程中,養(yǎng)殖戶要特別注意環(huán)境衛(wèi)生,及時(shí)進(jìn)行環(huán)境的消毒。
目前,許多地方獸醫(yī)盲目使用廣譜抗菌藥以致使巴氏桿菌產(chǎn)生了廣泛的耐藥性。因此,在臨床治療時(shí),應(yīng)先進(jìn)行藥敏試驗(yàn),不僅能及時(shí)有效的治療疾病而且能最大限度減少耐藥性的產(chǎn)生。
多殺性巴氏桿菌致病率高,病死率也高,在防治過(guò)程中應(yīng)該預(yù)防為主。對(duì)發(fā)病死亡牛深埋消毒,污染環(huán)境、用具、廄舍徹底清掃消毒;對(duì)發(fā)病牛和疑似病牛立即隔離進(jìn)行治療,健康牛要做好認(rèn)真觀察,同群牛和周圍牛進(jìn)行緊急預(yù)防注射;加強(qiáng)飼養(yǎng)管理,增強(qiáng)牛體抵抗力[8]。
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