葉穎霞 王振華 曾令清 田軍 梁家龍 馬國輝

天龍茶為廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院院內(nèi)制劑, 由黃芩、青天葵、防風(fēng)、紫蘇子等十三味中藥配伍組成, 具有化痰止咳, 健脾和胃的功效。目前, 該制劑尚無含量測定部分,黃芩為本制劑的君藥, 本文將建立天龍茶中黃芩苷的含量測定方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津高效液相色譜儀, 紫外檢測器, Labsolutions數(shù)據(jù)處理軟件系統(tǒng), 超聲波清洗器, 電子天平。

1.2 試藥 黃芩苷；甲醇, 磷酸, 水為超純水, 其他試劑均為分析純；制劑天龍茶為實(shí)驗(yàn)室自制。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：YMC-Pack ODS-AM (250 mm×4.6 mm, 5 μm), 流動(dòng)相：甲醇-0.2%磷酸溶液(40:60)；流速：1.0 ml/min；檢測波長277 nm；進(jìn)樣量：10 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 取黃芩苷對(duì)照品適量, 加甲醇制成每1 ml含22 μg的溶液, 即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取天龍茶粉末約0.15 g, 置于具塞三角瓶中, 加入70%乙醇25 ml, 超聲處理15 min, 放冷,再稱定重量, 用70%乙醇補(bǔ)足減失重量, 搖勻, 過濾, 量取濾液2 ml, 置10 ml量瓶中, 加70%乙醇稀釋至刻度, 搖勻,即得。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 照供試品溶液的制備方法制得陰性樣品溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn) 吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各10 μl, 分別注入高效液相色譜儀中, 依法測定, 記錄色譜圖(結(jié)果見圖1), 對(duì)照品黃芩苷保留時(shí)間約為25.7 min, 供試品溶液有對(duì)應(yīng)峰顯示, 陰性樣品無對(duì)應(yīng)峰, 結(jié)果表明陰性樣品溶液在此條件下對(duì)黃芩苷測定無干擾。

圖1 專屬性試驗(yàn)結(jié)果

2.4 線性及范圍考察 取黃芩苷對(duì)照品適量, 加甲醇溶解并稀釋, 制成每1 ml約含0.6 mg的對(duì)照品溶液, 移取對(duì)照品溶液3 ml, 置于25 ml量瓶中, 加甲醇稀釋定容得對(duì)照品線性儲(chǔ)備液。吸取線性儲(chǔ)備液0.25、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml,分別置于10 ml量瓶中, 加甲醇稀釋定容, 得1～6號(hào)線性溶液。取線性溶液, 按照上述色譜條件進(jìn)樣測定, 記錄峰面積, 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線, 得到回歸方程為Y=37346X-5806.2, r=0.9999, 結(jié)果表明, 黃芩苷在1.81～36.27 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 儀器精密度試驗(yàn) 在該色譜條件下, 精密吸取21.76 μg/ml黃芩苷對(duì)照品溶液10 μl注入HPLC, 連續(xù)進(jìn)樣6次, 記錄峰面積。結(jié)果黃芩苷峰面積RSD為0.23%, 說明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取室溫條件下的同一供試品溶液, 分別于0、3、6、9、12、18、24 h進(jìn)樣測定黃芩苷峰面積, 結(jié)果測得黃芩苷峰面積RSD為0.44%, 結(jié)果表明, 在室溫條件下,供試品溶液中黃芩苷在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取樣品粉末6份, 依法測定供試品中黃芩苷含量。結(jié)果樣品中黃芩苷平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.01%, RSD為1.50%, 表明本分析方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的天龍茶粉末6份, 每份約75 mg, 分別加入黃芩苷對(duì)照品溶液(713.43 μg/ml)2 ml, 加入70%乙醇23 ml,按照供試品溶液制備方法操作, 依法進(jìn)樣測定, 結(jié)果見表1。

表1 黃芩苷回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 含量測定 取本品粉末, 分別吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液各10 μl, 按上述色譜條件測定, 計(jì)算含量, 結(jié)果見表2。

表2 樣品測定結(jié)果

3 討論

本研究通過紫外全波長掃描黃芩苷對(duì)照品甲醇溶液, 其在277 nm和316 nm有最大吸收, 參考《中國藥典》2010版一部黃芩藥材項(xiàng)的含量測定, 確定檢測波長定為277 nm。黃芩苷為多羥基黃酮類化合物, 當(dāng)以甲醇-水或乙腈-水為流動(dòng)相時(shí), 普通ODS柱對(duì)其吸附性差、選擇性較小, 無法達(dá)到有效分離。參考文獻(xiàn)及2010版《中國藥典》一部, 在流動(dòng)相中添加磷酸, 可有效提高色譜柱分離效果, 最終確定甲醇-0.2%磷酸(40:60)為流動(dòng)相。

本研究采用HPLC法測定天龍茶中黃芩苷含量, 方法學(xué)驗(yàn)證表明, 其精密度、線性、穩(wěn)定性、重復(fù)性、回收率、耐用性等均能滿足定量分析要求, 可用于天龍咳喘靈膠囊的質(zhì)量控制。

［1］ 國家藥典委員會(huì), 中華人民共和國藥典(一部).中國醫(yī)藥科技出版, 2010:282.

［2］ 郝晶晶, 甄會(huì)賢, 趙正保.鼻炎靈片中黃芩苷含量測定方法的研究.山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2013, 14(1):28-30.