復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院胰腺肝膽外科，復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院腫瘤學(xué)系，上海 200032

脾多肽對(duì)胰腺癌根治術(shù)后化療患者細(xì)胞免疫功能的影響

武春濤 劉亮 徐永峰 王文權(quán) 徐華祥 項(xiàng)金峰 徐近 倪泉興 虞先濬

復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院胰腺肝膽外科，復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院腫瘤學(xué)系，上海 200032

背景與目的：胰腺癌發(fā)病隱匿，惡性程度高，預(yù)后極差。手術(shù)切除及術(shù)后化療是最主要的治療手段，但易導(dǎo)致患者免疫功能紊亂，尤其是細(xì)胞免疫功能下降。本研究觀察胰腺癌患者根治性切除術(shù)前、術(shù)后、化療前及化療后細(xì)胞免疫功能的變化以及化療患者在使用脾多肽后對(duì)機(jī)體細(xì)胞免疫功能的影響。方法：將73例2012年3月—2014年2月在復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院行根治性切除術(shù)的胰腺癌患者隨機(jī)分為2組：對(duì)照組(A組35例)，采用吉西他濱(健擇)單藥化療方案；用藥組(B組38例)，在吉西他濱單藥化療基礎(chǔ)上聯(lián)合脾多肽治療。觀察2組間手術(shù)前、后及化療過程中T淋巴細(xì)胞亞群百分率、NK細(xì)胞百分率的變化。結(jié)果：胰腺癌患者術(shù)前細(xì)胞免疫功能較健康對(duì)照組顯著降低，術(shù)后較術(shù)前則更顯著降低，外周血CD3+、CD8+淋巴細(xì)胞百分率顯著降低(P＜0.05)，CD4+淋巴細(xì)胞百分率與術(shù)前相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，CD4+/CD8+比值明顯上升(P＜0.05)，NK細(xì)胞百分率反而明顯升高(P＜0.05)；化療前上述指標(biāo)逐漸恢復(fù)至術(shù)前水平；化療過程中患者細(xì)胞免疫功能再次受到抑制，CD3+、CD8+淋巴細(xì)胞百分率下降，CD4+/CD8+比值升高，4個(gè)療程后逐漸恢復(fù)，而脾多肽用藥組患者細(xì)胞免疫功能較對(duì)照組有不同程度的提高(P＜0.05)，未見明顯抑制過程。結(jié)論：胰腺癌患者在手術(shù)、化療等治療過程中，細(xì)胞免疫功能受到抑制，脾多肽可作為胰腺癌患者術(shù)后化療的輔助用藥，糾正免疫功能紊亂，改善并促進(jìn)機(jī)體細(xì)胞免疫功能恢復(fù)。

脾多肽；胰腺癌；細(xì)胞免疫；化療

胰腺癌在我國(guó)發(fā)病率逐年升高［1］，由于其惡性程度高，發(fā)病隱匿，預(yù)后極差，被稱為21世紀(jì)“癌中之王”［2］。手術(shù)根治性切除是胰腺癌獲得長(zhǎng)期生存的治療手段，以吉西他濱為主的化療是術(shù)后患者最重要的輔助治療方法之一，但其5年生存率也僅能達(dá)到20%左右［3-5］。大量文獻(xiàn)證明，腫瘤、手術(shù)及化療對(duì)患者細(xì)胞免疫功能產(chǎn)生嚴(yán)重影響，主要表現(xiàn)為外周血T淋巴細(xì)胞亞群紊亂，包括CD3+、CD4+淋巴細(xì)胞百分率，CD4+/CD8+比值，NK細(xì)胞百分率的改變［6-7］。本研究觀測(cè)胰腺癌患者圍手術(shù)期(術(shù)前、術(shù)后1周)、化療前(術(shù)后4～6周)、化療過程中細(xì)胞免疫功能改變以及脾多肽的使用對(duì)化療患者細(xì)胞免疫功能的影響。

1 資料和方法

1.1 臨床資料

選擇73例2012年3月—2014年2月在復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院胰腺腫瘤研究所治療的胰頭癌患者，所有患者均不伴有梗阻性黃疸，無自身免疫性疾病，行胰十二指腸切除術(shù)，術(shù)后病理證實(shí)為胰腺癌，術(shù)后4～6周給予吉西他濱(健擇，購(gòu)自美國(guó)禮來公司)單藥化療。將上述患者隨機(jī)分為2組：對(duì)照組(A組35例)，采用吉西他濱單藥化療方案；用藥組(B組38例)，采用吉西他濱+脾多肽治療。2組患者一般資料及術(shù)中情況差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性(表1)。另外選擇同期健康志愿者20名作為健康對(duì)照組。

表1 2組胰腺癌患者手術(shù)前臨床資料比較Tab.1 Comparison of clinical data between 2 groups of patients with PDCA

1.2 用藥方法

對(duì)照組于術(shù)后4～6周內(nèi)給予吉西他濱單藥化療，劑量為1.0 g/m2(體表面積)，30 min內(nèi)由外周靜脈滴注，4周為1個(gè)療程，其中第1、8、15天給藥。用藥組在對(duì)照組用藥的同時(shí)，加用脾多肽注射液10 mL，在吉西他濱用藥當(dāng)天使用，共持續(xù)3 d。其它化療輔助用藥2組相同，共觀測(cè)4個(gè)療程。

1.3 檢測(cè)時(shí)間與方法

所有入組患者于術(shù)前、術(shù)后1周、術(shù)后4～6周行化療前及每次化療周期后1周抽取外周靜脈血，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)T細(xì)胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+)百分率和NK細(xì)胞百分率，健康對(duì)照組隨機(jī)抽取外周血進(jìn)行上述指標(biāo)檢測(cè)。所有熒光標(biāo)記抗體及流式細(xì)胞儀(型號(hào)FACSC anto II Mutitest)購(gòu)自美國(guó)BD公司。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 12.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，T細(xì)胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+)百分率和NK細(xì)胞百分率均以表示，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 術(shù)前、術(shù)后1周胰腺癌患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群百分率和NK細(xì)胞百分率

胰腺癌患者術(shù)前外周血中，CD3+、CD8+T細(xì)胞百分率較健康對(duì)照組顯著降低(P＜0.05)，CD4+T細(xì)胞百分率與健康對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.522)，CD4+/CD8+比值升高(P=0.003 6)，而外周血中NK細(xì)胞較健康對(duì)照組有明顯升高(P=0.023，圖1)。術(shù)后1周，上述所有檢測(cè)指標(biāo)較術(shù)前均有明顯下降(P＜0.05，表2)。

圖1 胰腺癌患者術(shù)前與健康人群外周血T淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞的比較Fig. 1 Comparison of peripheral T lymphocyte subsets and NK cell between PADC patients before operation and healthy donor

表2 2組患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞在術(shù)前與術(shù)后1周間的比較Tab. 2 Comparison of peripheral T lymphocyte subsets and NK cell between pre- and post-operation

2.2 術(shù)后4～6周(化療前)患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群百分率和NK細(xì)胞百分率

術(shù)后4～6周，CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞百分率較術(shù)后1周明顯升高，恢復(fù)至術(shù)前水平，CD8+T淋巴細(xì)胞百分率增加，顯著高于術(shù)前(P=0.000 3)，CD4+/CD8+比值較術(shù)前降低(P=0.000 2)，外周血中NK細(xì)胞百分率較術(shù)前顯著升高(P=0.007)。用藥組與對(duì)照組各項(xiàng)目之間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05，表3，圖2)。健康對(duì)照組及圍手術(shù)期患者外周血流式細(xì)胞儀檢測(cè)T細(xì)胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+)百分率和NK細(xì)胞百分率結(jié)果見圖3。

2.3 化療過程中患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群百分率和NK細(xì)胞百分率

2組患者在化療過程中CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞百分率無明顯改變，NK細(xì)胞百分率稍有下降，第2個(gè)療程結(jié)束后恢復(fù)至術(shù)后化療前狀態(tài)，各階段用藥組與對(duì)照組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

對(duì)照組中CD8+T淋巴細(xì)胞百分率在第一次化療后降至最低，后逐漸升高，第3個(gè)療程結(jié)束后才恢復(fù)至化療前水平，CD4+/CD8+比值受化療影響最為明顯，化療后明顯上升，直至第4個(gè)療程后才緩慢恢復(fù)至化療前狀態(tài)(表3，圖2)。而使用脾多肽注射液患者，其CD8+T淋巴細(xì)胞百分率和CD4+/CD8+比值在化療過程中無明顯變化，與化療前水平保持一致，各療程之間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

表3 2組患者圍手術(shù)期及化療過程中外周血T淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞的比較Tab. 3 Comparison of peripheral T lymphocyte subsets and NK cell between perioperation and the course of chemotherapy

圖2 2組患者圍手術(shù)期及化療過程中外周血T和NK細(xì)胞的比較Fig. 2 Comparison of peripheral T lymphocyte subsets and NK cell between perioperation and the course of chemotherapy

圖3 健康人群及圍手術(shù)期患者外周血流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果Fig. 3 Distribution of peripheral lymphocyte subsets in healthy donor and perioperative patients with pancreatic adenocarcinoma

3 討 論

惡性腫瘤患者免疫系統(tǒng)缺陷是普遍存在的，并且影響著腫瘤的發(fā)生、發(fā)展［8-9］。在我們的臨床觀察中同樣發(fā)現(xiàn)，胰腺癌患者細(xì)胞免疫功能受到明顯抑制，但其中NK細(xì)胞百分率較正常人群顯著升高，與部分文獻(xiàn)結(jié)果相反［10-11］，其原因可能是某些特定惡性腫瘤患者，分泌或釋放特定的物質(zhì)，使體內(nèi)NK細(xì)胞異常激活或上調(diào)，其中可能包含有一定比例的無免疫功能的NK細(xì)胞，最終導(dǎo)致患者NK細(xì)胞功能受損，發(fā)揮功能的正常NK細(xì)胞絕對(duì)值可能比正常人群低。手術(shù)對(duì)患者的細(xì)胞免疫功能有顯著的抑制作用［12］，此過程可逆［13］。本研究通過觀察發(fā)現(xiàn)，術(shù)后4～6周患者細(xì)胞免疫功能逐漸恢復(fù)至術(shù)前水平。

化療藥物可明顯抑制化療患者細(xì)胞免疫功能［14］。本研究結(jié)果顯示，吉西他濱單藥化療方案主要對(duì)CD8+淋巴細(xì)胞百分率及NK細(xì)胞百分率產(chǎn)生影響，同時(shí)CD4+/CD8+比率會(huì)有相應(yīng)的變化?；熯^程中，NK細(xì)胞百分率恢復(fù)較快，第1個(gè)療程結(jié)束后基本恢復(fù)到術(shù)前水平；但CD8+淋巴細(xì)胞百分率，CD4+/CD8+比率要到3～4個(gè)療程后才緩慢恢復(fù)至術(shù)前水平。T淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞是機(jī)體抗腫瘤細(xì)胞免疫的主要效應(yīng)細(xì)胞，其中CD8+淋巴細(xì)胞通過介導(dǎo)的直接殺傷作用，主要負(fù)責(zé)對(duì)靶細(xì)胞的清除，CD4+/CD8+比值則是重要的免疫狀態(tài)監(jiān)測(cè)指標(biāo)，其比例的降低與免疫系統(tǒng)損害的程度相關(guān)。

脾多肽是由健康小牛脾臟提取物制成，對(duì)機(jī)體免疫機(jī)能有雙向調(diào)節(jié)作用，能夠糾正機(jī)體免疫功能紊亂，具有激活和增強(qiáng)機(jī)體非特異性免疫功能的作用，能夠促進(jìn)T淋巴細(xì)胞成熟并可使未致敏淋巴細(xì)胞激活成為致敏淋巴細(xì)胞，從而提高了淋巴細(xì)胞免疫功能，同時(shí)可促進(jìn)NK細(xì)胞的細(xì)胞毒活性，調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞功能。

化療過程中，用藥組患者使用脾多肽后，與對(duì)照組相比，CD8+淋巴細(xì)胞百分率顯著升高，相應(yīng)的CD4+/CD8+比值明顯下降，與化療前差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，結(jié)果證明脾多肽注射液可改善胰腺癌術(shù)后患者化療過程中的細(xì)胞免疫功能并促進(jìn)其恢復(fù)。

綜上所述，胰腺癌患者細(xì)胞免疫功能低下，手術(shù)創(chuàng)傷使其進(jìn)一步受到抑制，但短期內(nèi)可恢復(fù)?；煂?duì)細(xì)胞免疫功能抑制持久，聯(lián)合使用脾多肽注射液可保護(hù)患者細(xì)胞免疫功能，并促進(jìn)其恢復(fù)，其進(jìn)一步調(diào)節(jié)機(jī)制及對(duì)NK細(xì)胞的影響，值得臨床深入研究與探討。

［1］ LONG J, LUO G P, XIAO Z W, et al. Cancer statistics: current diagnosis and treatment of pancreatic cancer in Shanghai, China ［J］. Cancer Lett, 2014, 346(2): 273-277.

［2］ 倪泉興, 虞先濬, 劉亮. 中國(guó)胰腺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)的探討［J］.中國(guó)癌癥雜志, 2012, 22(2): 81-87.

［3］ LIU L, XU H X, WANG W Q, et al. Cavin-1 is essential for the tumor-promoting effect of caveolin-1 and enhances its prognostic potency in pancreatic cancer ［J］. Oncogene, 2014, 33(21): 2728-2736.

［4］ SHI S, YAO W, XU J, et al. Combinational therapy: new hope for pancreatic cancer ［J］. Cancer Lett, 2012, 317(2): 127-135.

［5］ HIDALGO M. Pancreatic cancer ［J］. N Engl J Med, 2010, 362(17): 1605-1617.

［6］ KIM R, EMI M, TANABE K, et al. Tumor-driven evolution of immunosuppressive networks during malignant progression［J］. Cancer Res, 2006, 66(11): 5527-5536.

［7］ KIM R, EMI M, TANABE K. Cancer immunoediting from immune surveillance to immune escape ［J］. Immunology, 2007, 121(1): 1-14.

［8］ CLARK C E, BEATTY G L, VONDERHEIDE R H. Immunosurveillance of pancreatic adenocarcinoma: insights from genetically engineered mouse models of cancer ［J］. Cancer Lett, 2009, 279(1): 1-7.

［9］ CLARK C E, HINGORANI S R, MICK R, et al. Dynamics of the immune reaction to pancreatic cancer from inception to invasion ［J］. Cancer Res, 2007, 67(19): 9518-9527.

［10］ YAMAMOTO T, YAMAGIMOTO H, SATOI S, et al. Circulating CD4+CD25+ regulatory T cells in patients with pancreatic cancer［J］. Pancreas, 2012, 41(7): 409-415.

［11］ XU Y F, LU Y, CHENG H, et al. Abnormal distribution of peripheral lymphocyte subsets induced by PDAC modulates overall survival［J］. Pancreatology, 2014, 14(5): 295-301.

［12］ RASHID O M, NAGAHASHI M, RAMACHANDRAN S, et al. Resection of the primary tumor improves survival in metastatic breast cancer by reducing overall tumor burden ［J］. Surgery, 2013, 153(6): 771-778.

［13］ STEELE C W, JAMIESON N B, EVANS T R, et al. Exploiting inflammation for therapeutic gain in pancreatic cancer ［J］. Br J Cancer, 2013, 108(5): 997-1003.

［14］ MELLMAN I, COUKOS G, DRANOFF G. Cancer immunotherapy comes of age ［J］. Nature, 2011, 480(7378): 480-489.

Effect of lienal polypeptide injection on cellular immunity of patients with chemotherapy after pancreatic radical resection

WU Chun-tao, LIU Liang, XU Yong-feng, WANG Wen-quan, XU Hua-

xiang, XIANG Jin-feng, XU Jin, NI Quan-xing, YU Xian-jun
(Department of Pancreatic and Hepatobiliary Surgery, Fudan University Shanghai Cancer Center; Department of Oncology, Shanghai Medical College, Fudan University, Shanghai 200032, China)

YU Xian-jun E-mail: yuxianjunfudan@163.com

Background and purpose: Pancreatic cancer is one of the most aggressive and lethal human malignant diseases. The effective therapeutic approaches include surgical operation and chemotherapy, which could inhibit immune function of the patients, especially the cellular immunology function. The purpose of this study was to observe the clinical effect of gemcitabine combined with lienal polypeptide injection on cellular immunity activity of patients with chemotherapy after pancreatic radical resection. Methods: Seventy-three cases of radical resected pancreatic adenocarcinoma in Fudan University Shanghai Cancer Center during Mar. 2013 to Jan. 2014 were selected and randomized divided into gemcitabine chemotherapy group (Group A, 35 cases) and gemcitabine combined with lienal polypeptide injection chemotherapy group (Group B, 38 cases). The activities of T cells and NK cells were examined in both groups during pre- and post-operation, and chemotherapy process. Results: Cellular immunity activity was inhibited in patients with pancreatic adenocarcinoma, and further suppressed after operation, evidenced by the results that CD3+and CD8+lymphocytes percentages decreased signi fi cantly, the ratio of CD4+/CD8+and percentage of NK cell increased signi fi cantly. The cellular immunity activity was inhibited again during the chemotherapy, howeverwhen combined with lienal polypeptide injection during chemotherapy, the activity of cellular immunity was improved (P＜0.05). Conclusion: Lienal polypeptide injection can improve the activity of immunity of the patients during the multimodality therapy of resected pancreatic adenocarcinoma.

Lienal polypeptide injection; Pancreatic cancer; Cellular immunity; Chemotherapy

10.3969/j.issn.1007-3969.2014.12.005

R735.9

A

1007-3639(2014)12-0906-08

2014-08-07

2014-12-01）

國(guó)家自然科學(xué)基金(81472670、81402397、81402398、81172005)；國(guó)家自然科學(xué)基金中德項(xiàng)目(GZ857)。

虞先濬 E-mail:yuxianjunfudan@163.com