賀泂杰 賀奮義 郭慧琳

摘 要：采用鴿新城疫ND-GS株毒為種毒。分別研制出了尿囊液病毒油乳劑滅活苗和雞胚尿囊液、羊水、尿囊膜混合病毒油乳劑滅活苗。對(duì)研制的兩種滅活疫苗經(jīng)安全性檢驗(yàn)、急性毒性試驗(yàn)， 免疫抗體消長水平對(duì)比試驗(yàn)。結(jié)果表明，兩種疫苗性能基本一致。

關(guān)鍵詞：ND；油乳劑滅活疫苗；免疫抗體；消長水平

中圖分類號(hào)：S852 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1001-0769（2014）05-0054-02

鴿新城疫（New Castle Disease）是由鴿禽Ⅰ型副粘病毒引起的一種急性、熱性、高度性傳染病。鴿群常突然發(fā)病，迅速蔓延，其臨床癥狀與雞新城疫相似，主要臨床特點(diǎn)是腸炎，下痢和神經(jīng)癥狀，尤以嗜神經(jīng)速發(fā)型為多見，發(fā)病率和死亡率都很高。對(duì)于信鴿和觀賞鴿，一旦感染鴿新城疫后，其神經(jīng)癥狀將使信鴿失去飛翔能力，賽鴿失去比賽的資格，觀賞鴿失去觀賞價(jià)值。對(duì)養(yǎng)鴿業(yè)造成巨大的損失和威脅，成為危害養(yǎng)鴿業(yè)的一種最主要的疾病。為了更好地預(yù)防本病的發(fā)生，我們對(duì)防制本病的滅活苗進(jìn)行了比較系統(tǒng)的研究。通過 ND雞胚尿囊液、羊水、尿囊膜的含毒量測(cè)定，對(duì)研制的兩種油乳劑滅活苗，進(jìn)行了免疫抗體消長水平對(duì)比試驗(yàn)。

1 材料和方法

1.1 病毒

用從甘肅發(fā)病鴿場(chǎng)分離，經(jīng)哈爾濱獸醫(yī)研究所鑒定純化的GS病毒作為種毒。

1.2 供試疫苗

ND油乳劑滅活疫苗由本課題組研制。ND（V）含量基本一致。免疫劑量為0.5 mL/羽。

1.3 供試鴿.

蘭州種鴿場(chǎng)購買的健康非免疫鴿，經(jīng)HI血清抗體檢測(cè)，均為陰性。

1.4 試驗(yàn)方法

將種毒以1：100倍稀釋，離心，取上清液，加雙抗100 mg/mL，置4 ℃過夜，第二天經(jīng)尿囊腔接種于9～10日齡雞胚，每胚0.1 mL，置37℃繼續(xù)孵育。每日照蛋兩次，棄去48 h內(nèi)死亡胚。分別收獲48～96 h死亡雞胚的尿囊液、羊水、尿囊膜。當(dāng)血凝價(jià)達(dá)7log2～8log2以上時(shí)，即為鴿新城疫制苗用生產(chǎn)種毒。

1.5 病毒滅活

將收獲的雞胚尿囊膜反復(fù)凍融后研磨，按1：5的比例加入滅菌的生理鹽水，洗滌3次，離心3次取上清液加入雙抗過液。將收獲的尿囊液，羊水分別離心，加雙抗過液。將上述病毒液混合后，加入終未濃度為0.1 %的甲醛37 ℃滅活24 h，為制苗的抗原基礎(chǔ)液Ⅰ備用。

將收獲的尿囊液離心，加雙抗過液后，加入0.1 %的甲醛，37 ℃滅活24 h，為制苗抗原基礎(chǔ)液Ⅱ備用。

1.6 安全性檢查

將滅活病毒原液接種非免疫9日齡雞胚，每羽0.2 mL，觀察10 d以上，雞胚全部存活，為滅活病毒液通過安全性檢查。

1.7 乳化苗的配制

將抗原基礎(chǔ)液Ⅰ、Ⅱ分別調(diào)整至配苗所需抗原量，在抗原液中加入4 %的滅菌Tween-80，搖勻，成為Ⅰ、Ⅱ號(hào)制苗水相，待用。將輕質(zhì)藥用白油，司本80和硬脂酸鋁按照94 mL；6 mL：1.75 g的比例配制油相（混合物），高壓滅菌15 min備用。油相在8 000～10 000 r/min攪拌的同時(shí)，按1：1的比例分別緩慢加入Ⅰ、Ⅱ號(hào)水相，乳化3min，在終止攪拌前加入濃度為0.01 %的硫柳汞溶液，即成為乳白色的Ⅰ、Ⅱ號(hào)油乳劑滅活苗。

1.8 疫苗的檢驗(yàn)

1.8.1 無菌檢驗(yàn)

取樣分別接種于普通肉湯，厭氧肉肝湯及營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基各兩管，37 ℃培養(yǎng)96 h，檢查細(xì)菌生長情況。

1.8.2 安全性檢查

選用35日齡非免疫鴿60羽，分成2組，每組30羽，分別注射1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL。觀察注射部位有無炎性反應(yīng)，疫苗吸收情況和臨床反應(yīng)，觀察期2周。

1.8.3 急性毒性試驗(yàn)

將每種疫苗以1個(gè)使用劑量皮下注射1日齡乳鴿10羽。另設(shè)空白對(duì)照乳鴿組，同條件下隔離飼養(yǎng)，觀察疫苗對(duì)乳鴿生長的影響。

1.9 免疫抗體消長水平對(duì)比試驗(yàn)

選用30羽非免疫健康鴿，隨機(jī)分成3組，第1組注射Ⅰ號(hào)（尿囊液、羊水、尿囊膜、混合病毒）苗，第2組注射Ⅱ號(hào)（尿囊液毒）苗，另設(shè)一組對(duì)照，注射劑量分別為0.5 mL/羽。免疫后每隔一段時(shí)間檢測(cè)一次鴿血清中的ND抗體效價(jià)，進(jìn)行同劑量下免疫抗體消長水平對(duì)比試驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 疫苗的檢驗(yàn)

2.1.1 無菌檢驗(yàn)

取樣分別接種于普通肉湯，厭氧肉肝湯及營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基各兩管，37 ℃培養(yǎng)96 h，無雜菌生長。

2.1.2 安全性檢驗(yàn)

由表1可見疫苗是安全的。

2.2 急性毒性試驗(yàn)

通過油乳劑滅活疫苗對(duì)1日齡乳鴿的急性毒性試驗(yàn)表明，均無急性毒性作用，對(duì)乳鴿生長無影響。

2.3 對(duì)比試驗(yàn)

表2結(jié)果表明，兩種疫苗在同劑量下免疫抗體消長水平基本一致。免疫后180 d后， Hl抗體效價(jià)均在6.7log2以上，同時(shí)證明這兩種油乳劑苗的免疫持續(xù)期基本一致。

3 小結(jié)與討論

3.1 通過試驗(yàn)表明，兩種疫苗注射后，實(shí)驗(yàn)鴿均無不良反應(yīng)。精神食欲良好，注射局部無異常變化， 安全性良好。對(duì)1日齡乳鴿接種1個(gè)使用劑量進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)觀察， 不影響鴿的生長。

3.2 通過尿囊液、羊水、尿囊膜、混合病毒苗、尿囊液毒苗免疫抗體消長水平對(duì)比試驗(yàn)，結(jié)果表明差異不顯著。兩種油乳劑滅活苗在免疫后9 d抗體效價(jià)開始上升（平均為3.2log2、3.0log2），21 d達(dá)到峰值 （9.5log2、9.1log2），6個(gè)月仍能維持較高的水平（6.9log2、6.7log2）。從而證實(shí)了尿囊液、羊水、尿囊膜、混合病毒苗與目前廣泛使用的尿囊液毒苗在性能上是一致的。

3.3 通過研究表明，將羊水和尿囊膜亦作為抗原材料收集，應(yīng)用在疫苗的制備中，可減少浪費(fèi)，提高經(jīng)濟(jì)效益。□□