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        ND油乳劑滅活苗免疫抗體消長水平對(duì)比試驗(yàn)

        2014-05-30 19:21:28賀泂杰賀奮義郭慧琳
        國外畜牧學(xué)·豬與禽 2014年5期
        關(guān)鍵詞:免疫抗體

        賀泂杰 賀奮義 郭慧琳

        摘 要:采用鴿新城疫ND-GS株毒為種毒。分別研制出了尿囊液病毒油乳劑滅活苗和雞胚尿囊液、羊水、尿囊膜混合病毒油乳劑滅活苗。對(duì)研制的兩種滅活疫苗經(jīng)安全性檢驗(yàn)、急性毒性試驗(yàn), 免疫抗體消長水平對(duì)比試驗(yàn)。結(jié)果表明,兩種疫苗性能基本一致。

        關(guān)鍵詞:ND;油乳劑滅活疫苗;免疫抗體;消長水平

        中圖分類號(hào):S852 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):1001-0769(2014)05-0054-02

        鴿新城疫(New Castle Disease)是由鴿禽Ⅰ型副粘病毒引起的一種急性、熱性、高度性傳染病。鴿群常突然發(fā)病,迅速蔓延,其臨床癥狀與雞新城疫相似,主要臨床特點(diǎn)是腸炎,下痢和神經(jīng)癥狀,尤以嗜神經(jīng)速發(fā)型為多見,發(fā)病率和死亡率都很高。對(duì)于信鴿和觀賞鴿,一旦感染鴿新城疫后,其神經(jīng)癥狀將使信鴿失去飛翔能力,賽鴿失去比賽的資格,觀賞鴿失去觀賞價(jià)值。對(duì)養(yǎng)鴿業(yè)造成巨大的損失和威脅,成為危害養(yǎng)鴿業(yè)的一種最主要的疾病。為了更好地預(yù)防本病的發(fā)生,我們對(duì)防制本病的滅活苗進(jìn)行了比較系統(tǒng)的研究。通過 ND雞胚尿囊液、羊水、尿囊膜的含毒量測(cè)定,對(duì)研制的兩種油乳劑滅活苗,進(jìn)行了免疫抗體消長水平對(duì)比試驗(yàn)。

        1 材料和方法

        1.1 病毒

        用從甘肅發(fā)病鴿場(chǎng)分離,經(jīng)哈爾濱獸醫(yī)研究所鑒定純化的GS病毒作為種毒。

        1.2 供試疫苗

        ND油乳劑滅活疫苗由本課題組研制。ND(V)含量基本一致。免疫劑量為0.5 mL/羽。

        1.3 供試鴿.

        蘭州種鴿場(chǎng)購買的健康非免疫鴿,經(jīng)HI血清抗體檢測(cè),均為陰性。

        1.4 試驗(yàn)方法

        將種毒以1:100倍稀釋,離心,取上清液,加雙抗100 mg/mL,置4 ℃過夜,第二天經(jīng)尿囊腔接種于9~10日齡雞胚,每胚0.1 mL,置37℃繼續(xù)孵育。每日照蛋兩次,棄去48 h內(nèi)死亡胚。分別收獲48~96 h死亡雞胚的尿囊液、羊水、尿囊膜。當(dāng)血凝價(jià)達(dá)7log2~8log2以上時(shí),即為鴿新城疫制苗用生產(chǎn)種毒。

        1.5 病毒滅活

        將收獲的雞胚尿囊膜反復(fù)凍融后研磨,按1:5的比例加入滅菌的生理鹽水,洗滌3次,離心3次取上清液加入雙抗過液。將收獲的尿囊液,羊水分別離心,加雙抗過液。將上述病毒液混合后,加入終未濃度為0.1 %的甲醛37 ℃滅活24 h,為制苗的抗原基礎(chǔ)液Ⅰ備用。

        將收獲的尿囊液離心,加雙抗過液后,加入0.1 %的甲醛,37 ℃滅活24 h,為制苗抗原基礎(chǔ)液Ⅱ備用。

        1.6 安全性檢查

        將滅活病毒原液接種非免疫9日齡雞胚,每羽0.2 mL,觀察10 d以上,雞胚全部存活,為滅活病毒液通過安全性檢查。

        1.7 乳化苗的配制

        將抗原基礎(chǔ)液Ⅰ、Ⅱ分別調(diào)整至配苗所需抗原量,在抗原液中加入4 %的滅菌Tween-80,搖勻,成為Ⅰ、Ⅱ號(hào)制苗水相,待用。將輕質(zhì)藥用白油,司本80和硬脂酸鋁按照94 mL;6 mL:1.75 g的比例配制油相(混合物),高壓滅菌15 min備用。油相在8 000~10 000 r/min攪拌的同時(shí),按1:1的比例分別緩慢加入Ⅰ、Ⅱ號(hào)水相,乳化3min,在終止攪拌前加入濃度為0.01 %的硫柳汞溶液,即成為乳白色的Ⅰ、Ⅱ號(hào)油乳劑滅活苗。

        1.8 疫苗的檢驗(yàn)

        1.8.1 無菌檢驗(yàn)

        取樣分別接種于普通肉湯,厭氧肉肝湯及營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基各兩管,37 ℃培養(yǎng)96 h,檢查細(xì)菌生長情況。

        1.8.2 安全性檢查

        選用35日齡非免疫鴿60羽,分成2組,每組30羽,分別注射1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL。觀察注射部位有無炎性反應(yīng),疫苗吸收情況和臨床反應(yīng),觀察期2周。

        1.8.3 急性毒性試驗(yàn)

        將每種疫苗以1個(gè)使用劑量皮下注射1日齡乳鴿10羽。另設(shè)空白對(duì)照乳鴿組,同條件下隔離飼養(yǎng),觀察疫苗對(duì)乳鴿生長的影響。

        1.9 免疫抗體消長水平對(duì)比試驗(yàn)

        選用30羽非免疫健康鴿,隨機(jī)分成3組,第1組注射Ⅰ號(hào)(尿囊液、羊水、尿囊膜、混合病毒)苗,第2組注射Ⅱ號(hào)(尿囊液毒)苗,另設(shè)一組對(duì)照,注射劑量分別為0.5 mL/羽。免疫后每隔一段時(shí)間檢測(cè)一次鴿血清中的ND抗體效價(jià),進(jìn)行同劑量下免疫抗體消長水平對(duì)比試驗(yàn)。

        2 結(jié)果

        2.1 疫苗的檢驗(yàn)

        2.1.1 無菌檢驗(yàn)

        取樣分別接種于普通肉湯,厭氧肉肝湯及營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基各兩管,37 ℃培養(yǎng)96 h,無雜菌生長。

        2.1.2 安全性檢驗(yàn)

        由表1可見疫苗是安全的。

        2.2 急性毒性試驗(yàn)

        通過油乳劑滅活疫苗對(duì)1日齡乳鴿的急性毒性試驗(yàn)表明,均無急性毒性作用,對(duì)乳鴿生長無影響。

        2.3 對(duì)比試驗(yàn)

        表2結(jié)果表明,兩種疫苗在同劑量下免疫抗體消長水平基本一致。免疫后180 d后, Hl抗體效價(jià)均在6.7log2以上,同時(shí)證明這兩種油乳劑苗的免疫持續(xù)期基本一致。

        3 小結(jié)與討論

        3.1 通過試驗(yàn)表明,兩種疫苗注射后,實(shí)驗(yàn)鴿均無不良反應(yīng)。精神食欲良好,注射局部無異常變化, 安全性良好。對(duì)1日齡乳鴿接種1個(gè)使用劑量進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)觀察, 不影響鴿的生長。

        3.2 通過尿囊液、羊水、尿囊膜、混合病毒苗、尿囊液毒苗免疫抗體消長水平對(duì)比試驗(yàn),結(jié)果表明差異不顯著。兩種油乳劑滅活苗在免疫后9 d抗體效價(jià)開始上升(平均為3.2log2、3.0log2),21 d達(dá)到峰值 (9.5log2、9.1log2),6個(gè)月仍能維持較高的水平(6.9log2、6.7log2)。從而證實(shí)了尿囊液、羊水、尿囊膜、混合病毒苗與目前廣泛使用的尿囊液毒苗在性能上是一致的。

        3.3 通過研究表明,將羊水和尿囊膜亦作為抗原材料收集,應(yīng)用在疫苗的制備中,可減少浪費(fèi),提高經(jīng)濟(jì)效益。□□

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