張家禾等

摘要

[目的] 對商品長白豬的組織形態(tài)學(xué)進行研究，了解商品長白豬宰前的生理狀態(tài)。[方法] 采集長白豬的肝臟、腎臟和淋巴結(jié)3種組織器官并制成石蠟切片，采用H.E染色方法對其組織結(jié)構(gòu)進行研究。[結(jié)果] 腎臟和肝臟的組織結(jié)構(gòu)形態(tài)正常，腎臟和肝臟的細(xì)胞核染色明顯，淋巴結(jié)的皮質(zhì)和髓質(zhì)分界不清晰，周圍組織沒有明顯的淋巴索， 淋巴竇較小。糖原PAS染色結(jié)果表明肝臟中的糖原顆粒較少，分布不均勻，而腎臟中糖原或糖蛋白多集中于血管球和腎小囊壁上。[結(jié)論] 該研究可為今后進一步的商品長白豬理論研究奠定基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞 長白豬；PAS染色；肝臟；腎臟；淋巴結(jié)

中圖分類號S828.8+9文獻標(biāo)識碼A文章編號0517-6611（2014）06-01704-03

Abstract [Objective] The research aimed to study the tectology of commercial Landrace Pig and understand the physiological state of Landrace Pig before slaughter. [Method] The tissues of liver， kidney and lymph node were collected from Landrace Pig to make paraffin sections. Its organizational structure was studied by using H.E staining. [Result] The kidneys and liver's organization structure form was normal and their nucleus was obviously stained. But the boundary of lymph nodes'cortex and medulla was not very clear. There were no obvious lymph cords around it and the lymph sinus looked small. The results of PAS staining showed that the liver's glycogen granules were very few and showed an uneven distribution. Glycogen and glycoprotein in kidney were mainly concentrated in glomerulus and renal capsule wall. [Conclusion] The research could lay the foundation for further theoretical study on commercial Landrace Pig in the future.

Key words Landrace Pig； PAS staining； Liver； Kidney； Lymph node

長白豬具有生長快、飼料利用率高、瘦肉率高、母豬產(chǎn)仔較多、奶水較足等優(yōu)點，對于保證國民的動物性食品供應(yīng)發(fā)揮了不可替代的作用。近年來，對長白豬的研究大多集中在肉品質(zhì)[1]、繁殖性能[2]以及體型特征[3]等方面，對組織形態(tài)學(xué)和組織細(xì)胞化學(xué)方面的基礎(chǔ)研究甚少。

染色在組織形態(tài)學(xué)，特別是病理形態(tài)診斷、研究和教學(xué)工作中，都具有非常重要的意義和使用價值[4]。蘇木精-伊紅染色（H.E染色），蘇木精染液呈堿性，可使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體呈紫藍(lán)色；伊紅為酸性染料，主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分呈紅色。PAS染色又稱為過碘酸雪夫染色，是一種檢測組織細(xì)胞內(nèi)糖類物質(zhì)的細(xì)胞化學(xué)方法，常用于組織學(xué)研究中，其原理是過碘酸能使細(xì)胞內(nèi)的多糖乙二醇基氧化成二醛，再與Schiff氏液的無色品紅結(jié)合，呈紅色定位于胞漿上[5]。PAS反應(yīng)中存在多種改良法，且各實驗室都有自己的經(jīng)驗和習(xí)慣，在學(xué)術(shù)交流中常常因為染色結(jié)果不一致，難以進行比較。為此，2002年丹麥、德國、英國和法國的研究者們共同介紹和推出了標(biāo)準(zhǔn)化PAS染色方法，目的是統(tǒng)一該法染色條件和步驟，避免這種經(jīng)典方法的不規(guī)范性，保證結(jié)果可重復(fù)性，以利于試驗結(jié)果的比較[6]。

筆者利用組織制片技術(shù)對豬3種臟器進行H.E染色和細(xì)胞內(nèi)糖原PAS反應(yīng)，分析商品長白豬屠宰前的生理狀態(tài)，以期為商品用長白豬宰前生理狀況提供組織形態(tài)學(xué)依據(jù)，通過組織形態(tài)學(xué)觀察可以反映商品用長白豬的免疫狀態(tài)以及被屠宰豬的泌尿排泄功能和肝臟組織形態(tài)。

1 材料與方法

1.1儀器和藥品

顯微鏡、切片機、福爾馬林、無水酒精、冰醋酸、蘇木紫、甘油、鉀明礬、伊紅、過碘酸酒精液、品紅溶液、Schiff氏液等。肝臟、淋巴結(jié)和腎臟中均發(fā)現(xiàn)有陽性反應(yīng)顆粒，但含量不多。肝臟和腎臟中陽性顆粒比較集中，淋巴結(jié)較為分散。腎臟中陽性顆粒最多，集中于血管球和腎小囊囊壁。在同一放大倍數(shù)下，同一種臟器中陽性顆粒大小不一但分布均勻，不同臟器中陽性反應(yīng)物質(zhì)分布密度不一、顆粒大小不一，但分布比較均勻。

2.2 H·E染色

肝臟組織結(jié)構(gòu)染色清晰，各肝小葉分界清楚，呈不規(guī)則的多邊形狀；肝細(xì)胞呈索狀排列，以中央靜脈為軸心呈放射性排列；肝細(xì)胞核染色明顯，位于細(xì)胞中央，部分有雙核，核膜清晰可見。腎臟組織結(jié)構(gòu)正常，腎小體位于皮質(zhì)迷路內(nèi)，呈球形，由血管球和腎小囊2個部分組成。近端小管和遠(yuǎn)端小管上皮細(xì)胞都呈立方形，近端小管細(xì)胞界限不清楚，游離緣有刷狀緣，近端小管染色較遠(yuǎn)端小管顏色更深。淋巴結(jié)髓質(zhì)與皮質(zhì)分界不清楚。皮質(zhì)中淋巴小結(jié)呈圓形，位于小梁兩側(cè)淋巴竇附近，正切面可見淋巴小結(jié)帽呈新月形，朝向小梁淋巴竇；淋巴小結(jié)內(nèi)明區(qū)和暗區(qū)分界不明顯。

從圖3可以看出，肝臟組織可見肝小葉被結(jié)締組織分開，數(shù)個肝小葉圍成門管區(qū)，肝臟細(xì)胞染色較深，清晰可見，未見肝臟中脂肪小泡。腎臟染色圖D中，采樣腎臟組織完整，皮質(zhì)、髓質(zhì)和被膜清晰可見，圖E中發(fā)現(xiàn)具有免疫功能的大量淋巴細(xì)胞聚集成團狀，腎小囊中發(fā)現(xiàn)大量的紅細(xì)胞，但腎小囊腔和腎小囊上皮上未發(fā)現(xiàn)。淋巴結(jié)中可見皮質(zhì)部在內(nèi)側(cè)，髓質(zhì)部在外側(cè)，淋巴小結(jié)沿皮質(zhì)部小梁分布且數(shù)量較多，另外可見淋巴組織中有數(shù)量不等的巨噬細(xì)胞。

安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)2014年

3 討論

吳雨嶺等[7]對肝臟PAS對整塊染色改良中發(fā)現(xiàn)，固定與氧化順序處理法優(yōu)于固定與氧化同時處理法。鑒于此，筆者對不同的組織PAS反應(yīng)中采用氧化順序處理法中，結(jié)果表明PAS陽性反應(yīng)物質(zhì)分布均勻，與報道基本一致。但是，著色

深淺不同，并且陽性反應(yīng)顆粒的大小不一，這可能是因為組織中的糖原或糖蛋白本身含量不一致或者分子大小存在差異。糖原是動物組織內(nèi)唯一的天然多糖且在肝臟中含量最為豐富[7]，但該試驗中肝臟內(nèi)糖原含量不多，有以下原因：①試驗長白豬宰殺前饑餓24 h，肝糖原已經(jīng)被機體分解供能；②試驗采用的固定劑為甲醛溶液，此溶液為水溶性固定劑，糖原易溶于水，且在酶的作用下分解為葡萄糖后更易溶于水。其中，腎臟陽性反應(yīng)物質(zhì)大多集中于血管球和腎小囊囊壁，顏色呈現(xiàn)鮮艷的桃紅色，與王鈺等報道腎臟的PAS染色結(jié)果相一致[8]。對于腎臟中PAS反應(yīng)結(jié)果的原因，筆者猜測是由于血管球血液中的糖類物質(zhì)隨著原尿滲入腎小囊中，附著在腎小囊壁上，使其PAS染色呈較強陽性，亦或其上的糖蛋白染色。

H.E染色是病理技術(shù)中最基本的方法[9]。筆者認(rèn)為對疾病的診斷除了在分子水平上、細(xì)胞水平上、病例解剖水平上、臨床診斷水平上等診斷方法外，也要更多地關(guān)注組織切片水平上的病例診斷。在該研究中3種臟器均未見病例現(xiàn)象，說明屠宰豬生前生理狀況良好。有人認(rèn)為，淋巴小結(jié)的數(shù)量和大小與抗原的刺激有關(guān)，無菌飼養(yǎng)的動物無淋巴小結(jié)[10]。在今后的模型動物研究中，是否可以通過控制飼養(yǎng)條件、抗原免疫原性等，通過在組織切片水平上對淋巴小結(jié)研究為其他研究提供參考和借鑒意義，發(fā)揮組織切片技術(shù)的基礎(chǔ)性作用。一般情況下，豬淋巴結(jié)比較特殊，無明顯的門部[11]。該試驗中也沒有發(fā)現(xiàn)豬淋巴結(jié)中有明顯的門部，與以前報道一致。在腎臟的H.E染色中，發(fā)現(xiàn)腎臟中有大量的淋巴細(xì)胞聚集，腎小囊中發(fā)現(xiàn)大量紅細(xì)胞，據(jù)此推測腎臟中免疫狀態(tài)良好，腎小囊中血液循環(huán)旺盛，需氧較多。腎臟參與機體的免疫，則有待于進一步研究。

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