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        不同染色劑對(duì)SDS—PAGE染色體系的影響

        2014-05-30 10:48:04林方養(yǎng)楊耀東萬(wàn)婕等
        安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2014年9期
        關(guān)鍵詞:染色

        林方養(yǎng) 楊耀東 萬(wàn)婕等

        摘要[目的]研究不同染色劑對(duì)SDSPAGE染色體系的影響。[方法]通過SDSPAGE染色體系中不同考馬斯亮藍(lán)染料、染色方法和染色時(shí)間的比較,探討適合油棕和椰子的最佳染色體系。[結(jié)果]改進(jìn)后的方法染色效果好,較好脫色,凝膠背景清晰,容易分析蛋白含量較低的條帶。染色時(shí)間短(2 h),條帶較少,一些低豐度的蛋白條帶未能清晰地顯示出來,適當(dāng)延長(zhǎng)染色時(shí)間(6 h或過夜)效果較好。3種不同染料均能較好地對(duì)蛋白質(zhì)條帶染色,R350和R250相比G250效果稍好些,條帶著色深,蛋白質(zhì)含量低的細(xì)小條帶也能較好的染色。[結(jié)論]SDSPAGE是開展蛋白質(zhì)組學(xué)研究的關(guān)鍵技術(shù),建立簡(jiǎn)易、穩(wěn)定的染色方法具有重要意義。

        關(guān)鍵詞SDSPAGE;考馬斯亮藍(lán);染色

        中圖分類號(hào)S188文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611(2014)09-02562-01

        基金項(xiàng)目海南省自然科學(xué)基金(312039)。

        作者簡(jiǎn)介林方養(yǎng)(1980-),男,海南文昌人,研究實(shí)習(xí)員,從事棕櫚科植物栽培研究。*通訊作者。

        SDS-PAGE是開展蛋白質(zhì)組學(xué)研究的關(guān)鍵技術(shù),人們對(duì)其染色方法的研究也較多,其中較為成熟的方法有銀染法[1-2]和考馬斯亮藍(lán)法[3-8]。目前以考馬斯亮藍(lán)法染色最為常用,雖然其靈敏度不及銀染法,但操作簡(jiǎn)單,可滿足實(shí)驗(yàn)室常規(guī)染色的需要??捡R斯亮藍(lán)法用到的染料主要有R250和G250,現(xiàn)在市場(chǎng)上又推出了一種新的染料R350,但價(jià)格較高。試驗(yàn)以這3種染料為基礎(chǔ),通過比較不同染色方法和染色時(shí)間,探討這3種染料的優(yōu)缺點(diǎn),以期為開展蛋白質(zhì)組學(xué)研究提供關(guān)鍵技術(shù)。

        1 材料與方法

        1.1材料 分別以油棕和椰子的幼嫩葉片作為提取蛋白質(zhì)的材料,采自中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院椰子研究所試驗(yàn)基地。

        1.2蛋白質(zhì)的提取與定量 參考王旭初的方法[9]。

        1.3蛋白質(zhì)SDSPAGE凝膠染色與脫 電泳結(jié)束后,將膠取下來切好,分別用不同的考馬斯亮藍(lán)染色,染色液配制方法和染色方法見表1和表2。染色-脫色步驟為:將切好的膠放入塑料盒中用蒸餾水(蓋滿凝膠即可)洗1~2遍,棄去蒸餾水,分別加入不同染色液置搖床上按相應(yīng)染色時(shí)間慢速振蕩染色,然后倒掉染色液,用蒸餾水洗1遍,最后加脫色液脫色。

        2結(jié)果與分析

        3 結(jié)論與討論

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