徐芳芳　趙麗莉　荀洋等

摘要[目的]研究6BA濃度對(duì)桔梗胚珠愈傷組織分化率的影響。[方法]以桔梗未受精胚珠為外植體，利用N6+1.0 mg/L 2，4D+01 mg/L KT培養(yǎng)基誘導(dǎo)出的愈傷組織作為接種材料，分別接在0.5 mg/L NAA與不同6BA濃度的分化培養(yǎng)基上，對(duì)其愈傷組織分化率進(jìn)行研究。[結(jié)果]6BA濃度在0.25、1.25和1.00 mg/L（即3種分化培養(yǎng)基為N6+0.5 mg/L NAA+0.25 mg/L 6BA、N6+0.5 mg/L NAA+1.25 mg/L 6BA、N6 +0.5 mg/L NAA + 1.00 mg/L 6BA）時(shí)的分化率高，分別為88.3%、85.0%和80.0%。[結(jié)論]6BA濃度為0.25 mg/L 時(shí)有利于桔梗未受精胚珠愈傷組織的分化。

關(guān)鍵詞桔梗；胚珠；愈傷組織；分化率； 6BA

中圖分類(lèi)號(hào)S682.1+9文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2014）09-02552-02

作者簡(jiǎn)介徐芳芳（1989- ），女，吉林白城人，碩士研究生，研究方向：作物遺傳育種。*通訊作者，副教授，博士，從事中藥材桔梗的栽培和育種方面的研究。

桔梗[Platycodon grandiflorum（Jacq.） A.DC.]為桔?？平酃伲≒latycodon）多年生直立草本植物，別名道拉基、綠花根、鈴鐺花、四葉菜等。桔梗既是一種資源植物又是一種藥、食、觀賞兼用的經(jīng)濟(jì)植物[1]。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)對(duì)桔梗的需求量急增，導(dǎo)致價(jià)格上漲，由此也推動(dòng)了桔梗生產(chǎn)的發(fā)展。但是目前，桔梗生產(chǎn)中存在的主要問(wèn)題是質(zhì)量上不去，造成上等品緊缺，次等品積壓。造成這種局面的主要原因是品種混亂和種子質(zhì)量低劣等。

桔梗是異花授粉植物，主要進(jìn)行有性繁殖，自然界中和生產(chǎn)上推廣的桔梗是混雜的群體，到目前為止還沒(méi)有純系，這嚴(yán)重影響著桔梗遺傳規(guī)律的研究和雜種優(yōu)勢(shì)的利用。而通過(guò)花藥培養(yǎng)和胚珠培養(yǎng)獲得單倍體，采用秋水仙素進(jìn)行染色體加倍的途徑可以培育出桔梗純系，可為今后桔梗自交系的培育提供理論依據(jù)和試驗(yàn)材料。

以桔梗種子萌發(fā)的無(wú)菌苗葉片、莖段和莖尖為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)已有報(bào)道[2-3]，但以桔梗未受精胚珠作為外植體誘導(dǎo)組培苗的研究報(bào)道卻很少見(jiàn)。筆者以未受精桔梗胚珠為試驗(yàn)材料，N6作為基本培養(yǎng)基，以1.0 mg/L 2，4D + 0.1 mg/L KT為誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)出的愈傷組織作為分化培養(yǎng)的接種材料，將其分別接在添加0.5 mg/L NAA與不同6BA濃度組合的分化培養(yǎng)基中，以篩選出適于桔梗胚珠愈傷組織的分化培養(yǎng)基，從而為今后桔梗未受精胚珠組織培養(yǎng)研究提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料誘導(dǎo)培養(yǎng)基是以N6作為基本培養(yǎng)基，添加1.0 mg/L 2，4D + 0.1 mg/L KT；瓊脂為7 g/L，蔗糖為50 g/L，pH值為5.8。取單核胚囊期[4]（1.7 cm左右的花蕾）的胚珠消毒，將消毒好的花蕾用解剖刀剖離，取出胚珠接到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在溫度為25 ℃，12～14 h光照條件下培養(yǎng)40 d，以此愈傷組織作為分化培養(yǎng)的接種材料。

1.2分化培養(yǎng)基的配方分化培養(yǎng)基以N6為基本培養(yǎng)基，生長(zhǎng)素為0.5 mg/L NAA，細(xì)胞分裂素為不同濃度的6BA，8種組合如表1所示。各組培養(yǎng)基加入瓊脂為7 g/L，蔗糖為50 g/L，pH值為5.8。

1.3接種方法將誘導(dǎo)出的愈傷組織分別接在添加0.5 mg/L NAA與不同6BA濃度組合的8種培養(yǎng)基上，每種處理設(shè)置3次重復(fù)，每次重復(fù)接種10塊愈傷組織，50 d后統(tǒng)計(jì)分化出苗的愈傷組織塊數(shù)，并計(jì)算分化率。分化率（%）= 長(zhǎng)出幼苗的愈傷組織塊數(shù)/接種愈傷組織塊數(shù)×100。

2結(jié)果與分析

2.1不同6BA濃度處理下的愈傷組織分化率對(duì)8組處理數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，結(jié)果表明重復(fù)間F值是0.095，差異不顯著（P>0.05）。處理間F值為31.638，大于F0.05和F0.01，說(shuō)明各個(gè)處理間存在極顯著差異（P<0.01）。

為比較不同6BA濃度對(duì)桔梗胚珠愈傷組織分化率的影響，采用新復(fù)極差法（LSR）進(jìn)行多重比較，結(jié)果見(jiàn)表3。無(wú)論在5%和1%顯著水平上，處理1、5、4之間差異不顯著（P>0.05）。它們的分化率分別為88.3%、85.0%和80.0%。處理6除了與處理3、7之間差異不顯著外（P>0.05），與其他處理均差異顯著（P<0.05），其分化率為65.0%。最低的是處理8，其分化率僅為35.0%，且顯著小于其他所有處理（P<0.05）。

參考文獻(xiàn)

[1] 高文遠(yuǎn)，李志亮，肖培根.桔?，F(xiàn)代研究進(jìn)展[J].基層中藥雜志，1996，10（2）：48-50.

[2] 吳京姬，吳基日，嚴(yán)一字，等.培養(yǎng)基組成對(duì)桔梗組織培養(yǎng)的影響[J].延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)學(xué)報(bào)，2006，28（1）：18-23.

[3] 舒孌，高山林.桔梗的組織培養(yǎng)[J].植物資源與環(huán)境學(xué)報(bào)，2001，10（3）：63-64.

[4] 張美萍.桔梗（Platycodon grandiflornm A.DC）胚胎學(xué)研究[J].吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1992，14（2）：25-30.

[5] 武沖，唐樹(shù)梅，張勇，等.植物花粉培養(yǎng)研究進(jìn)展[J].農(nóng)業(yè)基礎(chǔ)科學(xué)，2008，24（11）：146-149.

[6] 王桂梅，賀美忠，楊富.桔梗組織培養(yǎng)技術(shù)的研究[J].安徽農(nóng)學(xué)通報(bào)，2012，18（7）：70-71.