李 蕾，薛如意，沈錫中

·肝癌·

肝細(xì)胞癌和慢性乙型肝炎患者血清sFRP-1和β-catenin水平及臨床意義*

李 蕾，薛如意，沈錫中

目的探討肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）和慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B，CHB）患者血清分泌型卷曲相關(guān)蛋白-1（secreted frizzled-related proteins，sFRP-1）和β-catenin水平及臨床意義。方法采用ELISA法檢測(cè)36例HCC、36例CHB和36例正常人血清sFRP-1和β-catenin水平，應(yīng)用Spearman相關(guān)分析，分析血清sFRP-1和β-catenin水平與年齡、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、白蛋白和總膽紅素等的相關(guān)性。結(jié)果HCC和CHB患者血清sFRP-1水平分別為（1136.28±332.43）pg/ml和（1194.53±156.84）pg/ml，均顯著低于正常人[（1477.26±563.12）pg/ml，P＜0.05]；HCC患者血清β-catenin水平為（527.2±20.9）pg/ml，顯著高于正常人和CHB患者[分別為（369.8±21.5）pg/ml和（374.0±8.3）pg/ml，P＜0.05]；HCC和CHB患者血清sFRP-1和β-catenin水平與年齡、ALT、白蛋白、總膽紅素?zé)o顯著相關(guān)性。結(jié)論肝細(xì)胞癌和慢性乙型肝炎患者血清sFRP-1降低，而肝細(xì)胞癌患者血清β-catenin水平升高。

肝細(xì)胞癌；慢性乙型肝炎；分泌型卷曲相關(guān)蛋白-1；β-catenin

Wnt/β-catenin信號(hào)通路是細(xì)胞發(fā)育和生長(zhǎng)調(diào)節(jié)的一個(gè)關(guān)鍵途徑，β-catenin是該通路的效應(yīng)分子，該通路異常激活可以導(dǎo)致腫瘤和纖維增生等疾病的發(fā)生[1]。已有研究證實(shí)，經(jīng)典與非經(jīng)典的Wnt信號(hào)途徑均參與肝纖維化的形成[2，3]，而在20%～90%HCC患者顯示經(jīng)典的Wnt/β-Catenin信號(hào)通路被持續(xù)激活[4]。Wnt信號(hào)通路抑制因子分泌型卷曲相關(guān)蛋白-1（secreted frizzled-related protein 1，sFRP-1）作為Wnt信號(hào)通路的一個(gè)負(fù)調(diào)節(jié)蛋白，在腫瘤形成及調(diào)控細(xì)胞調(diào)亡等方面亦發(fā)揮重要作用[5]。目前sFRP-1/β-catenin通路在慢性乙型肝炎及肝細(xì)胞癌發(fā)病中的作用機(jī)制仍不清楚。本研究檢測(cè)了CHB和HCC患者血清sFRP-1和β-catenin水平，并分析其與CHB和HCC常見(jiàn)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的關(guān)系，以探討其判斷肝臟疾病進(jìn)展的臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 病例選擇自2007年1月～2010年12月在我院門診及住院的HCC患者36例，均為男性，年齡30～60歲，平均年齡（43±14）歲，經(jīng)臨床、影像學(xué)檢查及術(shù)后病理學(xué)檢查證實(shí)。CHB患者36例[（均為男性，年齡30～60歲，平均年齡（40±15）歲]。CHB診斷符合慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）[6]標(biāo)準(zhǔn)。以HBsAg陰性、肝腎功能正常的36例男性健康體檢者為對(duì)照組[年齡30～60歲，平均年齡（36±12）歲]。被研究者簽署知情同意書，本研究經(jīng)中山醫(yī)院倫理委員會(huì)備案。

1.2 血清sFRP-1和β-catenin水平檢測(cè)采用ELISA法（上海武昊經(jīng)貿(mào)有限公司提供試劑，美國(guó)USCNK公司生產(chǎn)）。以Bio-rad比色儀在450nm處測(cè)吸光度值，參照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算其濃度值。

2 結(jié)果

2.1 肝功能情況3組人群主要肝功能指標(biāo)見(jiàn)表1。

表1 3組人群主要肝功能指標(biāo)（±s）比較

表1 3組人群主要肝功能指標(biāo)（±s）比較

與另兩組比，①P＜0.01

2.2 肝病患者血清sFRP-1及β-catenin的水平根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過(guò)對(duì)OD值的換算得出各組別sFRP-1、β-catenin的表達(dá)水平。HCC組和CHB組的血清sFRP-1顯著低于正常組（P＜0.05），而CHB組和HCC組血清sFRP-1水平無(wú)顯著差異；HCC組中β-catenin水平顯著高于正常組及CHB組（表2）。

表2 3組人群血清sFRP-1和β-catenin水平（pg/mL，±s）比較

表2 3組人群血清sFRP-1和β-catenin水平（pg/mL，±s）比較

與正常人比，①P＜0.05；與CHB比，②P＜0.05

2.3 血清sFRP-1和β-catenin水平與其他指標(biāo)的相關(guān)性分析在CHB和HCC患者，未發(fā)現(xiàn)血清sFRP-1或β-catenin水平與年齡、ALT、白蛋白、總膽紅素具有相關(guān)性（資料未列出）。

3 討論

近年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)Wnt信號(hào)通路在細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)、細(xì)胞凋亡及生物發(fā)育等生命過(guò)程中發(fā)揮重要作用[7，8]，其異?；罨c多種人類疾病及腫瘤[9，10]的發(fā)生密切相關(guān)，已經(jīng)成為腫瘤發(fā)病機(jī)制研究的熱點(diǎn)。同時(shí)，在肝纖維化等慢性肝病及肝癌發(fā)病中也發(fā)現(xiàn)Wnt信號(hào)異常持續(xù)激活，提示該途徑在肝臟病理生理過(guò)程中有著重要的作用[11]。

越來(lái)越多的研究表明，分泌型Wnt受體拮抗劑sFRPs家族成員在Wnt信號(hào)傳導(dǎo)中發(fā)揮重要作用，其可以在細(xì)胞外阻斷異常的Wnt信號(hào)通路，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡[12]。sFRPS通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合Wnt配體，阻止Wnt信號(hào)傳導(dǎo)入細(xì)胞，是Wnt信號(hào)通路的負(fù)調(diào)控因子，在肝臟腫瘤的發(fā)生發(fā)展中也起到了重要的作用。Shih YL等[13]發(fā)現(xiàn)在原發(fā)性肝癌組織SFRP-1表達(dá)廣泛下調(diào)，其啟動(dòng)子在肝癌組織中甲基化程度明顯高于肝硬化、肝炎及正常肝組織，認(rèn)為sFRP-1可能通過(guò)經(jīng)典wnt信號(hào)途徑抑制肝腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。

β-catenin是連環(huán)蛋白家族中的一員，具有介導(dǎo)細(xì)胞黏附及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的雙重功能。β-catenin是Wnt通路的效應(yīng)分子，其可通過(guò)核膜進(jìn)入到細(xì)胞核內(nèi)，與轉(zhuǎn)錄因子Tcf/Lef結(jié)合，激活Wnt途徑靶基因，如c-myc和cyclin D1，調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖，參與腫瘤的形成[14]。Sangkhathat等[15]通過(guò)在肝癌細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)染siRNAs引起細(xì)胞內(nèi)β-catenin表達(dá)下降，從而達(dá)到抑制肝癌細(xì)胞增殖的作用。

肝纖維化是指肝臟內(nèi)彌漫性的、過(guò)量的細(xì)胞外基質(zhì)沉積，是許多慢性肝病的共同病理學(xué)過(guò)程。肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cell，HSC）激活是肝纖維化發(fā)生的中心環(huán)節(jié)。近年來(lái)一些研究開(kāi)始關(guān)注經(jīng)典的Wnt信號(hào)通路在HSC激活過(guò)程中的作用。Myung等[2]研究發(fā)現(xiàn)sFRP可抑制HSC激活并抑制Collagen α1和α-SMA生成。葛文松等[16]研究發(fā)現(xiàn)，阻斷Wnt/β-Catenin信號(hào)通路可抑制HSC增殖，促進(jìn)其凋亡，減少膠原分泌。

本研究采用ELISA法檢測(cè)了HCC和CHB患者血清sFRP-1和β-Catenin水平的變化，發(fā)現(xiàn)HCC患者血清sFRP-1顯著低于正常人，與既往研究相符，提示sFRP-1在肝腫瘤發(fā)生中發(fā)揮抑癌作用，并可能在肝腫瘤組織中發(fā)生表觀遺傳學(xué)改變而表達(dá)降低或缺失，其具體分子機(jī)制有待進(jìn)一步研究。CHB患者血清sFRP-1亦顯著低于正常人，其是否參與了HSC激活及凋亡等機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。本研究亦發(fā)現(xiàn)HCC組織存在β-catenin高表達(dá)，提示β-catenin的異常積聚可能在肝癌發(fā)生中起重要作用。隨著Wnt信號(hào)通路拮抗劑sFRP1在肝癌組織中表達(dá)的逐漸減弱，β-catenin的異常表達(dá)增高，表明sFRP1的低表達(dá)可能是導(dǎo)致β-catenin異常高表達(dá)的因素之一。

Wnt傳導(dǎo)通路與肝癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。信號(hào)抑制蛋白sFRP1的表達(dá)減弱可能是導(dǎo)致β-catenin在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核內(nèi)積聚以及Wnt信號(hào)活化的原因之一，其潛在的臨床價(jià)值值得深入研究。關(guān)于對(duì)經(jīng)典Wnt信號(hào)通路在肝臟病發(fā)病中的作用研究，尚有許多基礎(chǔ)機(jī)制需要闡明，有許多問(wèn)題仍需要探討。

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（收稿：2013-09-10）

（校對(duì)：陳從新）

Serum levels and clinical significance of sFRP-1 and β-catenin in patients with hepatocellular carcinoma and chronic hepatitis B

Li Lei，Xue Ruyi，Shen Xizhong.
Department of Gastroenterology，Zhongshan Hospital，F(xiàn)udan University，Shanghai 200032，China

ObjectiveTo evaluate serum levels and clinical significance of secreted frizzled-related proteins（sFRP）-1 and β-catenin in patients with hepatocellular carcinoma（HCC）and chronic hepatitis B（CHB）.Methods Serum levels of sFRP-1 and β-catenin in 36 patients with HCC，36 patients with CHB and 36 healthy persons were detected by ELISA；Spearman correlation analysis was used to estimate the relevance between sFRP-1，β-catenin and age，ALT，albumin，total bilirubin.ResultsThe serum levels of sFRP-1 in patients with HCC and CHB were（1136.28±332.43）pg/ml and（1194.53±156.84）pg/ml，respectively，both significantly higher than that in healthy persons[（1477.26±563.12）pg/ml，P＜0.05]；The serum level of β-catenin in patients with HCC was（527.2± 20.9）pg/ml，significantly higher than those in patients with CHB（374.0±8.3）pg/ml and normal persons（369.8± 21.5）pg/ml，P＜0.05）；No correlation was found between serum sFRP-1 or β-catenin levels with age，ALT，albumin，total bilirubin either in CHB or in HCC group.ConclusionThe serum sFRP-1 levels in patients with HCC and CHB decrease，while the serum β-catenin levels in patients with HCC increase.

Hepatocellular carcinoma；Hepatitis B；Secreted frizzled-related proteins-1；β-catenin

10.3969/j.issn.1672-5069.2014.01.019

國(guó)家臨床重點(diǎn)?？平ㄔO(shè)項(xiàng)目經(jīng)費(fèi)資助

200032上海市復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院消化科

李蕾，女，42歲，醫(yī)學(xué)博士，主治醫(yī)師。主要從事肝纖維化及消化系統(tǒng)腫瘤的防治研究。E-mail：li.lei@zs-hospital.sh.cn

沈錫中，E-mail：shen.xizhong@zs-hospital.sh.cn