楊亞鮮，陳燕祥，武健權(quán)，邢豫明，曾發(fā)明，黃友浩，程寶文

1. 昆明醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)學(xué)院，昆明 650500；

2. 云南省公安廳刑事科學(xué)技術(shù)研究所，公安部毒品分析及禁毒技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，昆明 650283；

3. 西雙版納州公安局，西雙版納 666100

CNR1、GAD1和BDNF基因多態(tài)性與云南傣族男性海洛因依賴(lài)的相關(guān)性分析

楊亞鮮1,2，陳燕祥1,2，武健權(quán)1,2，邢豫明1,2，曾發(fā)明1,2，黃友浩3，程寶文1,2

1. 昆明醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)學(xué)院，昆明 650500；

2. 云南省公安廳刑事科學(xué)技術(shù)研究所，公安部毒品分析及禁毒技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，昆明 650283；

3. 西雙版納州公安局，西雙版納 666100

為了探討大麻素受體 1基因(Cannabinoid receptor 1，CNR1)3個(gè) SNP位點(diǎn)(rs6454674、rs1049353和rs806368)、谷氨酸脫羧酶 1基因(Glutamate decarboxylase 1，GAD1)3個(gè) SNP位點(diǎn)(rs1978340、rs3791878和rs11542313)、腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子基因(Brain-derived neurotrophic factor，BDNF)2個(gè) SNP位點(diǎn)(rs6265和rs13306221)與云南傣族男性海洛因依賴(lài)的相關(guān)性，文章采用病例對(duì)照關(guān)聯(lián)分析，建立8-SNPs復(fù)合擴(kuò)增體系，應(yīng)用SNaPshot方法檢測(cè)165例傣族男性海洛因依賴(lài)患者和170例健康傣族男性CNR1、GAD1和BDNF基因8個(gè)SNPs位點(diǎn)基因型，采用 SPSS17.0、Haploview4.2、PHASE2.1和MDR軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果顯示，rs13306221基因型頻率在海洛因依賴(lài)組和對(duì)照組中的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.025)，海洛因依賴(lài)組rs6265 A等位基因顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，由rs1978340-rs3791878-rs11542313構(gòu)建的T-A-C、C-C-C、C-C-T和T-C-C單體型及rs6265-rs13306221構(gòu)建的A-G單體型頻率在海洛因依賴(lài)組及對(duì)照組中差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，海洛因依賴(lài)組T-A-C、C-C-T和A-G單體型頻率明顯高于對(duì)照組，GAD1基因rs1978340與rs3791878之間可能存在強(qiáng)協(xié)同的交互作用。結(jié)果表明，CNR1基因rs1049353多態(tài)性、GAD1基因rs1978340和rs11542313多態(tài)性以及BDNF基因rs6265和rs13306221多態(tài)性與云南傣族男性海洛因依賴(lài)相關(guān)聯(lián)，并且攜帶rs6265 A等位基因的個(gè)體可能更容易對(duì)海洛因產(chǎn)生依賴(lài)。

CNR1；GAD1；BDNF；海洛因依賴(lài)

毒品依賴(lài)指吸毒者對(duì)毒品易產(chǎn)生依賴(lài)行為，最主要特征是渴求用藥，具有特征性的戒斷綜合征、復(fù)發(fā)性、耐受性和敏感性。據(jù)國(guó)家禁毒委公布的《2013年中國(guó)禁毒報(bào)告》顯示：截至2012年底，全國(guó)累計(jì)登記吸毒人員209.8萬(wàn)名；濫用阿片類(lèi)毒品人員127.2萬(wàn)名，其中海洛因吸毒人員124.5萬(wàn)名，占59.3%；濫用合成毒品人員79.8萬(wàn)名，其中甲基苯丙胺吸毒人員60.2萬(wàn)，占28.7%；全國(guó)繳獲海洛因共7.3噸，海洛因仍為我國(guó)主要濫用毒品之一，這給社會(huì)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。海洛因依賴(lài)是一種不顧后果的強(qiáng)制性尋覓和使用海洛因的行為。海洛因依賴(lài)受社會(huì)環(huán)境因素及遺傳因素等影響[1,2]，家系調(diào)查結(jié)果及雙生子、寄養(yǎng)子研究也都表明遺傳因素在海洛因依賴(lài)中扮演著重要角色[3,4]。盡管其成癮機(jī)制尚不十分明確，但中腦邊緣獎(jiǎng)賞系統(tǒng)被普遍認(rèn)為在海洛因成癮相關(guān)問(wèn)題中發(fā)揮著重要的作用。包括海洛因在內(nèi)的幾乎所有的成癮物質(zhì)都對(duì)該系統(tǒng)有一定的作用[5]，或直接影響系統(tǒng)中多巴胺的功能，或通過(guò)其他神經(jīng)遞質(zhì)如 γ-氨基丁酸、5-羥色胺能或膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)起作用[6]。藥物依賴(lài)的神經(jīng)生化機(jī)制都離不開(kāi)多巴胺(Dopamine, DA)等單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)，因而與上述遞質(zhì)系統(tǒng)有關(guān)的受體及代謝酶基因成為近年的研究熱點(diǎn)，也成為研究海洛因依賴(lài)易感性的重要候選基因。大麻素受體 1(Cannabinoid receptor1, CNR1)主要分布于前額葉皮質(zhì) 、杏仁核、伏隔核、紋狀體和海馬區(qū)，可以調(diào)節(jié)多種神經(jīng)遞質(zhì)(如多巴胺、γ-氨基丁酸)的釋放。谷氨酸脫羧酶(Glutamate decarboxylase, GAD)是催化谷氨酸脫羧為 γ-氨基丁酸的限速酶，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)GAD1與GAD2兩個(gè)亞型。腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(Brain-derived neurotophic factor, BDNF)是體內(nèi)含量最多的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，對(duì) 5-羥色胺和多巴胺能神經(jīng)元的發(fā)育分化與生長(zhǎng)再生具有維持和促進(jìn)作用。國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)上述受體、酶基因進(jìn)行了大量研究，發(fā)現(xiàn)與海洛因等物質(zhì)依賴(lài)有關(guān)，但基因間是否存在交互作用未見(jiàn)報(bào)道。因此，本研究在云南傣族群體中選擇CNR1基因3個(gè)SNP位點(diǎn)(rs6454674、rs1049353和rs806368)、GAD1基因3個(gè) SNP位點(diǎn)(rs1978340、rs3791878和 rs11542313)和BDNF基因2個(gè)SNP位點(diǎn)(rs6265和rs13306221)，采用病例對(duì)照研究方法對(duì)上述基因與海洛因依賴(lài)的關(guān)聯(lián)性及基因間交互作用進(jìn)行了探討。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

患者組：165例海洛因依賴(lài)者均來(lái)自于云南省西雙版納州勞教所的強(qiáng)制戒毒人員。納入標(biāo)準(zhǔn)：傣族，男性，年齡20～50周歲，符合美國(guó)精神障礙診斷與統(tǒng)計(jì)手冊(cè)第 4版(DSM-Ⅳ) 阿片依賴(lài)的診斷標(biāo)準(zhǔn)，以海洛因使用為主，無(wú)酒精或尼古丁等成癮物質(zhì)濫用史，排除精神疾病、遺傳性疾病，相互間無(wú)親緣關(guān)系。對(duì)照組：170例健康對(duì)照者來(lái)源于云南省DNA數(shù)據(jù)庫(kù)。納入標(biāo)準(zhǔn)：傣族，男性，年齡20～50周歲，無(wú)海洛因等非法成癮物質(zhì)使用史，無(wú)精神疾病史，相互間無(wú)親緣關(guān)系。

1.2 方法

1.2.1 DNA提取及引物設(shè)計(jì)

采用 Investigator試劑盒(QIAamo公司，德國(guó))提取全血基因組DNA。根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)查詢(xún)的各位點(diǎn)信息，運(yùn)用在線(xiàn)引物設(shè)計(jì)軟件Primer3.0設(shè)計(jì)引物，由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。引物序列信息見(jiàn)表1。

1.2.2 復(fù)合擴(kuò)增體系建立

采用Touchdown PCR 程序，在9700(ABI，美國(guó))擴(kuò)增儀上進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增體系為 20 μL，含10×FastStart Taq Buffer(MgCl2)2 μL、25 mmol/L dNTP 1.6 μL、10 μmol/L PCR引物混合液8 μL、FastStart Taq DNA 聚合酶0.4 μL、模板2 μL。PCR擴(kuò)增程序：95℃預(yù)變性10 min；95℃ 30 s，63℃ 50 s(每個(gè)循環(huán)降低0.5℃)，72℃ 1 min進(jìn)行15個(gè)循環(huán)；然后95℃ 30 s，55℃ 50 s，72℃ 1 min進(jìn)行25個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸7 min。PCR產(chǎn)物純化體系為6 μL，包括1 U/μL蝦堿性磷酸酶(Phosphatase alkaline shrimp，SAP，Roche)1.5 μL、10 U/μL核酸外切酶(ExonucleaseⅠ，Exo-Ⅰ，Roche)0.15 μL、PCR產(chǎn)物2 μL。37℃ 60 min，85℃ 15 min進(jìn)行純化。

1.2.3 SNaPshot反應(yīng)

采用 SNaPshot Multiplex 試劑盒(ABI，美國(guó))，反應(yīng)體系為8 μL，含Reaction Mix 0.3 μL，10 μmol/L延伸引物混合物6 μL，多重PCR純化產(chǎn)物1 μL。擴(kuò)增程序：96℃預(yù)變性1 min；96℃ 10 s，50℃ 5 s，60℃ 30 s，共25個(gè)循環(huán)。結(jié)束后加入1 U/μL SAP 0.5 μL，37℃ 60 min、85℃ 15 min進(jìn)行純化。

1.2.4 檢測(cè)及基因分型

以GeneScan-120Liz Size Standard(ABI)為內(nèi)標(biāo)，取1 μL產(chǎn)物與10 μL含有Liz的HiDi混合，95℃變性10 min，立即冰浴冷卻3 min，然后采用ABI 3100型自動(dòng)遺傳分析儀進(jìn)行電泳，應(yīng)用 Genemapper ID v3.2軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析和基因分型。

表1 8個(gè)SNPs位點(diǎn)及其引物序列

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

應(yīng)用SPSS17.0軟件，對(duì)海洛因依賴(lài)組及對(duì)照組8個(gè)SNPs位點(diǎn)進(jìn)行Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)，驗(yàn)證樣本的代表性，并對(duì)單位點(diǎn)基因型及等位基因頻率進(jìn)行非線(xiàn)性logistic回歸分析，P值通過(guò)Bonferroni進(jìn)行校正。運(yùn)用HaploView 4.2軟件對(duì)各位點(diǎn)間進(jìn)行連鎖不平衡分析。應(yīng)用PHASE2.1軟件構(gòu)建單體型，進(jìn)行單體型分析，并用SPSS17.0海洛因依賴(lài)組及對(duì)照組各單體型頻率分布進(jìn)行四格表卡方檢驗(yàn)。運(yùn)用多因子降維(MDR)軟件對(duì)8個(gè)SNPs位點(diǎn)間進(jìn)行交互作用分析，檢驗(yàn)樣本的準(zhǔn)確度(Testing balanced accuracy, TBA)和交叉驗(yàn)證一致性(Cross-validation consistency, CVC )，設(shè)符號(hào)檢驗(yàn)P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 基因分型結(jié)果

本研究對(duì)CNR1基因3個(gè)SNPs位點(diǎn)(rs6454674、rs1049353和rs806368)、GAD1基因3個(gè)SNPs位點(diǎn)(rs1978340、rs3791878和rs1152313)和BDNF基因2個(gè)SNPs位點(diǎn)(rs6265和rs13306221)進(jìn)行檢測(cè)，均得到良好的分型結(jié)果(圖1)。在8個(gè)SNPs位點(diǎn)基因型檢測(cè)中，在rs13306221位點(diǎn)僅檢測(cè)到2種基因型(GG和AG)，其余7個(gè)SNPs位點(diǎn)均檢測(cè)到3種基因型，其中rs6454674位點(diǎn)檢測(cè)到TT、TG和GG基因型，rs1049353和rs6265位點(diǎn)檢測(cè)到GG、GA和AA基因型，rs806368、rs1978340和rs11542313位點(diǎn)檢測(cè)到TT、TC和CC基因型，rs3791878位點(diǎn)檢測(cè)到CC、CA和AA基因型。

圖1 8個(gè)SNPs位點(diǎn)多態(tài)性圖譜圖中藍(lán)色、黑色、紅色和綠色峰分別代表G、C、T和A等位基因。

2.2 單位點(diǎn)分析

病例及對(duì)照組各位點(diǎn)基因型頻率分布符合H-W平衡。海洛因依賴(lài)組及對(duì)照組基因型及等位基因頻率分布logisic回歸分析結(jié)果見(jiàn)表2。經(jīng)過(guò)Bonferroni校正后，發(fā)現(xiàn)8個(gè)SNPs多態(tài)性位點(diǎn)中，僅rs13306221基因型頻率分布在海洛因依賴(lài)組與對(duì)照組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.025)。rs1049353、rs1978340、rs11542313、rs6265和 rs13306221等位基因頻率分布在海洛因依賴(lài)組與對(duì)照組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，且經(jīng) Bonferroni校正后顯示差異顯著，海洛因依賴(lài)組rs6265多態(tài)性位點(diǎn)A等位基因顯著高于對(duì)照組(P＜0.025)。rs6454674、rs806368和rs3791878 3個(gè)SNPs位點(diǎn)基因型及等位基因頻率分布在海洛因依賴(lài)組與對(duì)照組分布無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2.3 多位點(diǎn)分析

應(yīng)用 HaploView 4.2 軟件對(duì)本研究中的 SNPs位點(diǎn)進(jìn)行連鎖不平衡分析(圖2：A，B)，結(jié)果顯示：在云南傣族男性中，海洛因依賴(lài)組與對(duì)照組各位點(diǎn)之間存在連鎖不平衡現(xiàn)象，連鎖程度較弱(D’＜0.8)。

應(yīng)用PHASE2.1軟件對(duì)CNR1、GAD1和BDNF基因8個(gè)SNPs位點(diǎn)構(gòu)建單體型，并對(duì)海洛因依賴(lài)組及對(duì)照組各單體型頻率進(jìn)行四格表卡方檢驗(yàn)(表 3)，頻率低于 3%的單體型不進(jìn)行分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，由rs1978340-rs3791878-rs11542313構(gòu)建的T-A-C、C-C-C、C-C-T和T-C-C單體型及rs6265-rs13306221構(gòu)建的A-G單體型頻率分布在海洛因依賴(lài)組及對(duì)照組中差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，海洛因依賴(lài)組T-A-C、C-C-T和A-G單體型頻率明顯高于對(duì)照組。

表2 8個(gè)SNPs位點(diǎn)基因型及等位基因頻率分布

圖2 海洛因依賴(lài)組與對(duì)照組8個(gè)SNPs連鎖圖(D’)A：海洛因依賴(lài)組；B：對(duì)照組。

表3 CNR1、GAD1和BDNF基因單體型頻率分布及卡方檢驗(yàn)分析結(jié)果

表4 MDR分析基因-基因交互作用模型

2.4 MDR分析

對(duì)CNR1、GAD1和BDNF基因8個(gè)SNPs位點(diǎn)進(jìn)行MDR分析，結(jié)果見(jiàn)表4。GAD1基因rs1978340與 rs3791878多態(tài)性位點(diǎn)的二因子模型檢驗(yàn)準(zhǔn)確度最大(TBA = 0.6551)，交叉驗(yàn)證一致性(CVC)為10/10，TBA與CVC值越大說(shuō)明模型越好，因此rs1978340與rs3791878二因子模型為最佳模型，且符號(hào)檢驗(yàn)P = 0.0010，具有顯著性差異，提示這兩個(gè)位點(diǎn)的交互作用與云南傣族男性海洛因依賴(lài)可能相關(guān)聯(lián)。

圖3 最佳圖形模型該圖形模型表示經(jīng)MDR分析后，患者組和對(duì)照組分別在X6，X7(X6為rs1978340，X7為rs3791878)的各基因型組合中分布的例數(shù)(患者組例數(shù)以左側(cè)條帶表示，對(duì)照組例數(shù)以右側(cè)條帶表示)。深灰色小塊表示該基因型組合中患者組例數(shù)/對(duì)照組例數(shù)超過(guò)比值閾(比值閾=全部病例組例數(shù)/全部對(duì)照組列數(shù)) ，提示高風(fēng)險(xiǎn)；淺灰色小塊表示該基因型組合中患者組例數(shù)/對(duì)照組例數(shù)低于比值域，提示低風(fēng)險(xiǎn)。

圖3為rs1978340與rs3791878二因子模型最佳模型的圖形模型，從深灰色小塊中可以看出攜帶X6(rs1978340)等位基因 C 的個(gè)體或攜帶X7(rs3791878)等位基因C的個(gè)體患海洛因依賴(lài)風(fēng)險(xiǎn)相對(duì)高，而當(dāng)個(gè)體的rs1978340基因型為純合子CC且 rs3791878基因型為雜合子 AC時(shí)，或個(gè)體的rs1978340基因型為雜合子CT且rs3791878基因型為純合子CC時(shí)，患海洛因依賴(lài)風(fēng)險(xiǎn)相對(duì)較小。

圖 4為各多態(tài)性位點(diǎn)交互作用的系統(tǒng)樹(shù)，顯示GAD1基Z因rs1978340(X6)與rs3791878(X7)多態(tài)性位點(diǎn)之間可能存在強(qiáng)協(xié)同的交互作用，其他位點(diǎn)間協(xié)調(diào)與消減作用不明顯。

圖4 各多態(tài)性位點(diǎn)交互作用的系統(tǒng)樹(shù)該圖以顏色譜表示自協(xié)同至消減的交互作用，最上端表示強(qiáng)協(xié)同，最下端表示強(qiáng)消減，中間顏色分別表示不同程度的協(xié)同或消減。圖中 X4、X8、X1、X6和 X7分別代表 rs6265、rs11542313、rs6454674、rs1978340和rs3791878 SNP位點(diǎn)。

3 討 論

當(dāng)前，毒品泛濫問(wèn)題嚴(yán)重影響社會(huì)的穩(wěn)定和進(jìn)步，對(duì)社會(huì)治安、經(jīng)濟(jì)發(fā)展、疾病控制、社會(huì)保障等諸多方面都有很強(qiáng)的負(fù)面作用，特別是海洛因等硬性毒品仍是嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的元兇和公敵。因此，對(duì)毒品成癮與戒斷機(jī)理的研究及治療也一直是研究者關(guān)注的熱點(diǎn)。

大麻素受體系統(tǒng)與藥物依賴(lài)及其他精神疾病中起重要作用[7]。Leroy等[8]對(duì)法國(guó)高加索人群研究發(fā)現(xiàn) CNR1基因與藥物依賴(lài)相關(guān)。隨后 Zhang等[9]對(duì)歐裔、非裔美國(guó)人的研究也證實(shí) CNR1基因與阿片類(lèi)、可卡因和酒精濫用存在相關(guān)性。Li等[10]研究發(fā)現(xiàn)CNR1基因(AAT)n多態(tài)性與中國(guó)漢族海洛因依賴(lài)無(wú)關(guān)聯(lián)性。最近Proudnikov等[11]通過(guò)對(duì)共計(jì)247例高加索人、161例西班牙人及 179例非裔美國(guó)人海洛因依賴(lài)情況與CNR1基因6個(gè)SNPs位點(diǎn)關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)，僅在高加索人群中發(fā)現(xiàn)rs806379、rs1049353和rs59088366多態(tài)性位點(diǎn)的基因型頻率分布與海洛因依賴(lài)顯著關(guān)聯(lián)，rs1049353位點(diǎn)GG基因型更容易對(duì)海洛因產(chǎn)生依賴(lài)(P=0.034)。本研究對(duì)云南傣族人群與CNR1基因rs6454674、rs1049353和rs806368多態(tài)性關(guān)聯(lián)研究?jī)H發(fā)現(xiàn) rs1049353多態(tài)性位點(diǎn)與海洛因依賴(lài)相關(guān)聯(lián)，海洛因依賴(lài)組rs1049353 A等位基因頻率顯著低于對(duì)照組。Marcos等[12]、Clarke等[13]及 Zuo[14]等在男性酒精依賴(lài)者與美國(guó)非洲裔可卡因依賴(lài)個(gè)體中研究證實(shí) CNR1(rs6454674、rs1049353和rs806368)基因與酒精依賴(lài)及可卡因依賴(lài)存在明顯相關(guān)性，但Clarke等[13]與Zuo等[14]的數(shù)據(jù)結(jié)合后分析，僅發(fā)現(xiàn)rs6454674位點(diǎn)與可卡因依賴(lài)存在關(guān)聯(lián)性，這說(shuō)明種族、群體分層及樣本量差異可能導(dǎo)致研究結(jié)果不同。但這些研究都表明 CNR1基因在藥物依賴(lài)(阿片類(lèi)、可卡因、酒精)中發(fā)揮一定作用。

研究證實(shí)GAD1基因多態(tài)性可能與藥物依賴(lài)相關(guān)。Kuo等[15]及 Terranova等[16]分別在愛(ài)爾蘭人群及意大利人群酒精依賴(lài)情況與GAD1基因關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)，GAD1基因與酒精依賴(lài)存在相關(guān)性。Levran等[17]對(duì)202例美國(guó)海洛因依賴(lài)者130個(gè)基因的1350個(gè)突變點(diǎn)研究發(fā)現(xiàn)，GAD1基因rs2058725位點(diǎn)與海洛因依賴(lài)存在顯著關(guān)聯(lián)性。Wu等[18]對(duì)中國(guó)漢族370例海洛因依賴(lài)者和389例對(duì)照樣本GAD1基因的15個(gè) SNPs多態(tài)性關(guān)聯(lián)性研究發(fā)現(xiàn)，啟動(dòng)子區(qū)rs1978340、rs3791878 和外顯子3 rs11542313 多態(tài)性等位基因或基因型頻率與海洛因依賴(lài)有顯著性差異。而本次在云南傣族人群中研究也發(fā)現(xiàn)rs1978340與rs11542313兩個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)等位基因頻率與海洛因依賴(lài)相關(guān)聯(lián)，海洛因依賴(lài)組rs1978340、rs11542313位點(diǎn) T等位基因頻率顯著低于對(duì)照組(P=0.00585，P=0.0159)。通過(guò)國(guó)內(nèi)外研究推測(cè)GAD1基因可能是海洛因依賴(lài)的一個(gè)候選基因。

在對(duì)BDNF基因和藥物依賴(lài)關(guān)聯(lián)性的研究中，關(guān)于功能多態(tài)性rs6265位點(diǎn)的研究結(jié)果報(bào)道并不一致。Haerian[19]對(duì)BDNF基因與藥物依賴(lài)的研究進(jìn)行了系統(tǒng)回顧及 Meta分析，發(fā)現(xiàn) rs6265位點(diǎn)是南亞人群或中國(guó)人群海洛因依賴(lài)及甲基苯丙胺依賴(lài)者的危險(xiǎn)因素。Meng等[20]對(duì)中國(guó)漢族486例海洛因依賴(lài)者與BDNF基因3個(gè)SNPs位點(diǎn)的研究發(fā)現(xiàn)，rs6265位點(diǎn)AA基因型攜帶者首吸年齡更早。Jia等[21]研究了 487例漢族海洛因依賴(lài)者與 BDNF基因的 4個(gè)SNPs位點(diǎn)海洛因依賴(lài)的關(guān)聯(lián)性，發(fā)現(xiàn) rs6265與rs13306221多態(tài)性位點(diǎn)與海洛因依賴(lài)存在顯著的關(guān)聯(lián)情況，且海洛因依賴(lài)組G等位基因頻率明顯高于對(duì)照組(P=0.001，P=0.005)，提示 G等位基因可能會(huì)增加海洛因依賴(lài)的易感性。而本研究在云南傣族人群中卻發(fā)現(xiàn)rs6265多態(tài)性位點(diǎn)海洛因依賴(lài)組G等位基因頻率低于對(duì)照組(P=0.0219)，G等位基因可能是一個(gè)保護(hù)因素。此外，有研究還證實(shí)rs6265多態(tài)性位點(diǎn)與精神分裂癥、抑郁癥等腦病相關(guān)，在神經(jīng)元的存活、分化及突觸可塑性調(diào)節(jié)、大腦學(xué)習(xí)記憶的過(guò)程中起重要作用。

綜上所述，BDFN基因rs6265與海洛因依賴(lài)相關(guān)聯(lián)，攜帶有A等位基因的個(gè)體可能更容易對(duì)海洛因產(chǎn)生依賴(lài)。本研究與前人研究結(jié)果基本一致，但也存在不一致情況。究其原因可能是：海洛因依賴(lài)是一個(gè)生理-心理-社會(huì)及遺傳因素綜合作用所形成的慢性復(fù)雜性腦病，遺傳因素外其他因素也起一定作用；可能與種族差異、民族及地域差異、樣本量小等因素有關(guān)；單個(gè)位點(diǎn)、單個(gè)基因的研究可能不能得出準(zhǔn)確結(jié)論。因此，還需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，通過(guò)對(duì)多個(gè)種群、多個(gè)基因和多個(gè)位點(diǎn)的研究，以了解海洛因依賴(lài)的遺傳機(jī)制，從而對(duì)海洛因依賴(lài)做出基因診斷，為戒毒宣傳及后續(xù)的基因治療提供理論依據(jù)。

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(責(zé)任編委: 賴(lài)江華)

Association study of CNR1, GAD1 and BDNF polymorphisms with male heroin dependence in the Dai population in Yunnan

Yaxian Yang1,2, Yanxiang Chen1,2, Jianquan Wu1,2, Yuming Xing1,2, Faming Zeng1,2, Youhao Huang3, Baowen Cheng1,2

1. Forensic Medicine Department of Forensic Science College of Kunming Medical University, Kunming 650500, China;

2. Key Laboratory of Ministry of Public Security of Drug Analysis and Drug Control Technology, Public Security Department of Yunnan Province, Kunming 650283, China;
3. Xishuangbanna Municipal Public Security Bureau, Xishuangbanna 666100, China

Abstract:In order to analyze the association of CNR1(Cannabinoid receptor 1), GAD1(Glutamate decarboxylase 1), and BDNF(Brain-derived neurotrophic factor) polymorphisms with male heroin dependence in the Dai population in Yunnan Province, an eight-SNP co-amplification protocol was established to genotype on the SNaPshot platform. A case-control study was performed with 8 SNPs from CNR1, GAD1, and BDNF genes in 165 heroin-dependent males and 170 healthy males of the Dai population. Statistical analyses were conducted with SPSS17.0, Haploview4.2, PHASE2.1, and MDR software. We found that: (1) the genotype frequency of rs13306221 was significant in the case group (P＜0.025); (2) the A allelic frequency of rs6265 was significantly higher in the case group; (3) the haplotypes of T-A-C, C-C-C, C-C-T, and T-C-C based on rs1978340-rs3791878-rs11542313 and haplotype A-G based on rs6265-rs13306221 were significant (P＜0.05); (4) the haplotype frequencies of T-A-C, C-C-T, and A-G were significantly higher in the case group. These results indicate that the linkage between rs1978340 and rs3791878 in GAD1 has a strong association with heroin dependence. Furthermore, polymorphisms in CNR1 (rs1049353), GAD1 (rs1978340 and rs11542313), and BDNF (rs6265 and rs13306221) were associated with heroin dependence in the Yunnan Dai population, and individuals with the rs6265 A allele were more likely to be heroin dependent.

CNR1; GAD1; BDNF; heroin dependence

2013-12-23;

2014-06-13

公安部科技強(qiáng)警基礎(chǔ)工作專(zhuān)項(xiàng)項(xiàng)目(編號(hào)：2013GABJC017)資助

楊亞鮮，碩士研究生，專(zhuān)業(yè)方向：法醫(yī)物證學(xué)。E-mail:1329113301@qq.com

程寶文，博士，主任法醫(yī)師，研究方向：法醫(yī)物證學(xué)。E-mail:ggcbw@vip.sina.com

10.3724/SP.J.1005.2014.0888

時(shí)間: 2014-7-31 9:24:06

URL: http://www.cnki.net/kcms/doi/10.3724/SP.J.1005.2014.0000.html