宋玉琴，趙昌軍（淄博市食品藥品檢驗(yàn)所，山東 淄博 255086）

丙戊酸鈉片為一線廣譜抗癲癇藥，主要用于單純或復(fù)雜失神發(fā)作、肌陣攣發(fā)作、癲癇大發(fā)作的單藥或合并用藥治療[1]。由于丙戊酸鈉分子結(jié)構(gòu)中不具有紫外吸收基團(tuán)，因此，2010年版《中國(guó)藥典》（二部）仍然采用雙相酸堿滴定法對(duì)其進(jìn)行含量測(cè)定[1]，但該方法專屬性差，而且滴定過程中使用的乙醚危險(xiǎn)性高、毒性大、污染環(huán)境。目前文獻(xiàn)報(bào)道的含量測(cè)定方法還有高效液相色譜法[2]、柱前衍生高效液相色譜法[3]、原子吸收分光光度法[4]、氣相色譜法[5]等。由于高效液相色譜法大多采用紫外末端吸收作為檢測(cè)波長(zhǎng)，因此基線平衡需要很長(zhǎng)時(shí)間；而衍生化法操作煩瑣，容易引入雜質(zhì)或干擾峰，或使樣品損失；原子吸收分光光度法僅能控制鈉的含量，專屬性差；氣相色譜法樣品前處理復(fù)雜，誤差大，而且有機(jī)溶劑的使用還對(duì)環(huán)境造成一定的污染。離子色譜法作為一種環(huán)保的檢測(cè)手段，適合檢測(cè)能溶于水、并有一定離解度的化合物，不受被測(cè)組分是否具有光吸收特征的限制[6]。為此，筆者首次建立離子色譜-抑制電導(dǎo)檢測(cè)法測(cè)定丙戊酸鈉片的含量。

1 材料

1.1 儀器

ICS-2100型離子色譜儀，包括AS自動(dòng)進(jìn)樣器、電導(dǎo)檢測(cè)器、陰離子抑制器、自動(dòng)淋洗液發(fā)生器、Chromeleon中文色譜工作站（美國(guó)戴安公司）；CP225D十萬分之一天平（德國(guó)Sartorius公司）；超純水儀（美國(guó)Millipore公司）。

1.2 藥品與試劑

丙戊酸鈉對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào):100963-201302，純度:99.0%）；丙戊酸鈉片（湖南省湘中制藥有限公司，批號(hào):130126、130211、130915，規(guī)格:每片0.2 g）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

陰離子交換色譜柱:Ion Pac AS19（250 mm×4.0 mm，7.0 μm）；淋洗液:10 mmol/L KOH溶液；流速:1.0 ml/min；加水抑制模式，抑制電流:20 mA；電導(dǎo)池溫度:35℃；柱溫:30℃；進(jìn)樣量:25 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品貯備液。精密稱取丙戊酸鈉對(duì)照品103.40 mg，置于100 ml量瓶中，用超純水溶解并稀釋至刻度，搖勻。

2.2.2 對(duì)照品溶液。精密量取對(duì)照品貯備液1 ml，置于50 ml量瓶中，用超純水稀釋至刻度，搖勻。

2.2.3 供試品溶液。取本品20片，除去糖衣后，精密稱定，研細(xì)；精密稱取約相當(dāng)于平均片質(zhì)量的粉末，置于100 ml量瓶中，用超純水溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾；精密量取續(xù)濾液1 ml，置于100 ml量瓶中，用超純水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 空白溶液。精密稱取約相當(dāng)于平均片質(zhì)量的空白輔料，置于100 ml量瓶中，用超純水溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾；精密量取續(xù)濾液1 ml，置于100 ml量瓶中，用超純水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液、供試品溶液、空白溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣。結(jié)果顯示，丙戊酸根離子理論板數(shù)＞5000，與空白輔料峰分離度均＞1.5，表明空白輔料不干擾測(cè)定，色譜系統(tǒng)的專屬性及系統(tǒng)適用性良好，色譜圖見圖1。

2.4 線性關(guān)系試驗(yàn)

精密量取對(duì)照品貯備液0.25、0.5、1.0、2.5、5.0 ml，分別置于50 ml量瓶中，用超純水稀釋至刻度，搖勻，作為系列對(duì)照品溶液，以系列對(duì)照品溶液質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果回歸方程為y＝0.0343x－0.0184（r＝0.9999），表明丙戊酸鈉檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為5.118～102.4 μg/ml。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密量取對(duì)照品溶液25 μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，連續(xù)進(jìn)樣3 d，測(cè)得丙戊酸鈉峰面積的RSD分別為0.4%（n＝6）、0.7%（n＝3），表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液（批號(hào):130211），分別于0、2、4、6、8、12 h進(jìn)樣，記錄色譜圖，結(jié)果峰面積的RSD為0.5%（n＝6），表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)樣品（批號(hào):130211）平行制備5份供試品溶液并測(cè)定，測(cè)得丙戊酸鈉片含量的平均值為99.7%，RSD為0.6%（n＝5），表明本方法重復(fù)性良好。

2.8 回收率試驗(yàn)

圖1 離子色譜圖A.對(duì)照品溶液；B.供試品溶液；C.空白溶液；1.丙戊酸鈉Fig 1 Ion chromatogramsA.reference solution；B.sample solution；C.blank solution；1.sodium valproate

精密稱取已知含量的樣品（批號(hào):130211）約相當(dāng)于1/20平均片質(zhì)量的片粉6份，分別置于100 ml量瓶中，分別精密加入對(duì)照品貯備液10 ml，加超純水溶解并稀釋至刻度，搖勻；用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續(xù)濾液進(jìn)樣，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果平均回收率為98.77%（RSD＝0.80%，n＝6），表明方法準(zhǔn)確度好，見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）Tab 1 Results of recovery test（n＝6）

2.9 檢測(cè)限和定量限試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液，用超純水稀釋成一系列質(zhì)量濃度遞減的溶液，進(jìn)樣，記錄色譜圖。按信噪比等于3時(shí)測(cè)定檢測(cè)限，測(cè)得丙戊酸鈉的檢測(cè)限為93 ng/ml；按信噪比等于10時(shí)測(cè)定定量限，測(cè)得定量限為307 ng/ml。

2.10 樣品含量測(cè)定

取不同批號(hào)的樣品，每批樣品取3份，按照所建方法和《中國(guó)藥典》的方法分別測(cè)定含量，同時(shí)采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件，對(duì)兩種方法含量測(cè)定結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果P＝0.823（＞0.05），按照統(tǒng)計(jì)學(xué)上95%的置信度，兩種方法含量測(cè)定結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2。

表2 兩種方法含量測(cè)定結(jié)果比較（%）Tab 2 Results of content determination by two method（s%）

3 討論

3.1 方法和色譜柱的選擇

離子色譜法具有快速方便、靈敏度高、選擇性好[6]等優(yōu)點(diǎn)，主要用于檢測(cè)能溶于水并有一定離解度的化合物，可以彌補(bǔ)液相色譜、氣相色譜法對(duì)離子型藥物分析的不足。丙戊酸鈉能溶于水，在強(qiáng)堿性條件下能夠電離生成丙戊酸根離子，因此本文選用陰離子交換色譜柱進(jìn)行分離。

3.2 淋洗液的選擇

丙戊酸鈉為弱酸鹽，水溶液中離解度弱，在強(qiáng)堿性溶液中以陰離子形態(tài)存在，因此應(yīng)選用較強(qiáng)的堿為淋洗液，而且對(duì)在陰離子交換色譜柱上弱保留的一元羧酸，可用淋洗強(qiáng)度弱的稀OH－[7]，因此，本文選用KOH溶液作為淋洗液。在篩選淋洗液濃度時(shí)，發(fā)現(xiàn)當(dāng)KOH溶液濃度為40 mmol/L時(shí)，丙戊酸根離子出峰時(shí)間過快，與輔料峰無法分離，而且隨著KOH溶液濃度的降低，丙戊酸根離子的出峰延長(zhǎng)；但當(dāng)KOH溶液濃度降低至10 mmol/L時(shí)，丙戊酸根與輔料峰達(dá)到基線分離，故選此作為淋洗液的濃度。

3.3 抑制電流的選擇

抑制電流的作用是消除淋洗液背景電導(dǎo)的干擾，其選擇原則為在保證靈敏度的前提下，盡量選擇最小的抑制電流:抑制電流過大，被測(cè)物峰變?。灰种齐娏鬟^小，背景電導(dǎo)干擾無法消除，基線噪音大，被測(cè)物峰也變小。筆者通過不斷嘗試，最終確定抑制電流為20 mA。

筆者建立的測(cè)定丙戊酸鈉片含量的離子色譜法，與傳統(tǒng)的雙相酸堿滴定法相比，專屬性強(qiáng)、工作環(huán)境清潔、靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確，可用于丙戊酸鈉片的質(zhì)量控制。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:二部[S].2010年版.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:75.

[2]周莉華，涂瓊，梅步云.HPLC法測(cè)定人血清中丙戊酸鈉的濃度[J].中國(guó)藥房，2011，22（26）:2441.

[3]李順煒，毛名揚(yáng)，李國(guó)忠.改進(jìn)的柱前衍生-高效液相色譜法測(cè)定人血中丙戊酸鈉[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2005，25（8）:713.

[4]李舸遠(yuǎn)，蔡美明，王玉.原子吸收光譜法測(cè)定丙戊酸鈉緩釋片中鈉的含量[J].藥學(xué)與臨床研究，2010，18（6）:587.

[5]楊少芳，張華年，徐華.高效毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定片劑中丙戊酸鈉含量[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2005，25（5）:434.

[6]劉英，李茜.離子色譜在抗生素藥物分析中的應(yīng)用[J].藥物分析雜志，2012，32（1）:179.

[7]牟世芬，劉克納.離子色譜方法及應(yīng)用[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2000:87-88.