王恩光　李建強(qiáng)　吳軍芳等

[摘要] 目的 觀察HO-1對肺氣腫大鼠模型肺組織ICAM-1和MIP-2表達(dá)的影響。方法 復(fù)制肺氣腫大鼠模型，并用Hemin干預(yù)，收集BALF行細(xì)胞計數(shù)并分類檢查；采用免疫組織化法檢測大鼠支氣管肺組織HO-1、ICAM-1表達(dá)，ELISA方法檢測肺組織勻漿中MIP-2的含量。結(jié)果 與模型組比較，干預(yù)組肺組織中HO-1表達(dá)顯著增加（P<0.05）。肺氣腫組大鼠模型中不僅ICAM-1在支氣管肺組織的表達(dá)較干預(yù)組顯著增加（P<0.05），而且BALF中的白細(xì)胞計數(shù)和中性粒細(xì)胞計數(shù)均與ICAM-1表達(dá)呈顯著正相關(guān)（r=0.85、0.84，P均<0.01）；模型組肺組織勻漿中MIP-2含量較干預(yù)組明顯增加，而且BALF中的白細(xì)胞計數(shù)和中性粒細(xì)胞計數(shù)均與MIP-2含量呈顯著正相關(guān)（r=0.89、0.89， P均<0.01）。 結(jié)論 ICAM-1和MIP-2在肺氣腫中明顯增加，HO-1可降低ICAM-1、MIP-2的表達(dá)，這可能是HO-1在肺氣腫中抗炎反應(yīng)的作用機(jī)制之一。

[關(guān)鍵詞] 血紅素加氧酶-1；肺氣腫；ICAM-1；MIP-2

[中圖分類號] R563.3 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-9701（2014）11-0007-03

[Abstract] Objective To observe the effect of HO-1 on expressions of ICAM-1 and MIP-2 in lung tissue of rats with emphysema. Methods Established emphysema rat models and using Hemin to interven. BALF were collected to count the total and differential cell counts. HO-1 and ICAM-1 expressions in pulmonary tissues of rat were detected by immunohistochemistry. The content of MIP-2 in lung tissues was detected by ELISA. Results Compared to the emphysema group， the expression of HO-1 in control group were significantly positive（P<0.05）. The expression of ICAM-1 in lung of the emphysema group was significantly higher than those in control group （P<0.05） and was positively correlated with the leukocyte numbers and neutrophil in BALF in the model group（r=0.85， 0.84 respectively， P all <0.01）. The content of MIP-2 in lung tissues of the emphysema were significantly higher than those in control group（P<0.05）. In the model group， the leukocyte numbers and neutrophil in BALF were positively correlated with the levels of MIP-2 in lung tissues（r=0.89， 0.89 respectively， P all <0.01）. Conclusion HO-1 might significantly alleviate emphysema by inhibiting the expressions of ICAM-1 and MIP-2.

[Key words] Heme oxygenase-1； Emphysema； ICAM-1； MIP-2

慢性阻塞性肺疾?。–OPD）是一種可以預(yù)防和治療的疾病，主要累及肺部，也是導(dǎo)致高致殘率和高致死率的一種常見呼吸系統(tǒng)慢性疾病[1]。其發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，一般認(rèn)為COPD是以氣道的慢性炎癥為主要特征，由多種炎性細(xì)胞、細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)共同作用。血紅素加氧酶（HO）是血紅素分解代謝的限速酶，研究發(fā)現(xiàn)血紅素加氧酶-1（heme oxygenase-1，HO-1）具有抗炎、抗氧化、抗凋亡、抗增生的細(xì)胞保護(hù)效應(yīng)。目前對于HO-1在肺部疾病中作用的研究已有了突破性進(jìn)展，研究證實(shí)血紅素加氧酶-1參與了COPD、肺動脈高壓、哮喘等的發(fā)生、發(fā)展[2-4]。有研究表明吸煙可誘導(dǎo)COPD患者氣管平滑肌細(xì)胞HO-1表達(dá)增加[5]，HO-1對氧化應(yīng)激的異常反應(yīng)可能與COPD的發(fā)生有關(guān)，小鼠肺組織腺病毒介導(dǎo)的HO-1 cDNA 轉(zhuǎn)染能明顯減輕其彈力蛋白誘導(dǎo)的肺氣腫[6]。Yamada等[7]研究發(fā)現(xiàn)，HO-1基因的多態(tài)性與肺氣腫易感性相關(guān)。這表明HO-1在COPD的發(fā)病過程中具有一定的保護(hù)作用，但目前其機(jī)制尚不完全清楚。本研究通過干預(yù)肺氣腫大鼠HO-1表達(dá)，觀察其病理變化并檢測大鼠支氣管肺組織細(xì)胞間黏附分子1（ICAM-1）的表達(dá)和肺組織勻漿巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2（MIP-2）的含量，探討ICAM-1和MIP-2與肺氣腫發(fā)病機(jī)制的關(guān)系；通過觀察HO-1對ICAM-1、MIP-2的影響，探討其在肺氣腫防治中的作用及機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動物與主要試劑

雄性Wistar大鼠（山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗動物中心提供）18只，體重（200±20）g，HO-1抗體（美國Abcam公司），ICAM-1抗體（武漢博士德公司），MIP-2酶聯(lián)免疫吸附試劑盒（武漢博士德公司）。

1.2 動物分組與造模

8周齡健康雄性Wistar大鼠18只，適應(yīng)性飼養(yǎng)兩周，隨機(jī)分為3組，每組各6只：①正常未暴露組（對照組）；②煙霧暴露組（模型組），將大鼠放入自制的玻璃箱中，每日用點(diǎn)燃的猴王牌香煙（焦油11 mg/支）熏約10 min，掀開箱蓋休息5 min，重復(fù)煙霧暴露，每日2次上述煙霧暴露，每周5 d，連續(xù)20周；③Hemin+煙霧暴露組（干預(yù)組），在每周首次煙霧暴露前24 h開始腹腔注射Hemin 25 μmol/kg，連續(xù)3 d，而對照組和模型組均用等毫升生理鹽水腹腔注射。20周時同時處死3組實(shí)驗動物取材做相關(guān)檢測。

1.3 BALF的白細(xì)胞計數(shù)及分類計數(shù)

實(shí)驗動物用戊巴比妥麻醉固定，處死，開胸，游離出雙肺及氣管，結(jié)扎右主支氣管，用5 mL注射器從氣管下部注入生理鹽水3 mL反復(fù)灌洗3次，回收率在80%以上。使用毛細(xì)吸管吸取新鮮制備混勻的 BALF，在顯微鏡下行白細(xì)胞計數(shù)。剩余的BALF立即在4℃下離心（2000 rpm，8 min），離心后取沉渣物涂片，采用瑞氏染色法按細(xì)胞形態(tài)學(xué)行細(xì)胞分類計數(shù)。

1.4 肺組織標(biāo)本制作

取大鼠右肺上葉肺組織，置于10%甲醛液中固定，石蠟包埋后行HE染色，并行病理形態(tài)學(xué)觀察和免疫組化檢測。取右肺下葉肺組織，研磨成勻漿，行酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測。

1.5 肺組織中HO-1和ICAM-1的檢測

用免疫組化SP法檢測肺組織HO-1表達(dá)水平的變化，采用SABC法檢測支氣管肺組織ICAM-1表達(dá)水平的變化，操作步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。陰性對照標(biāo)本以PBS緩沖液作為一抗。以肺組織中出現(xiàn)棕黃色或棕黃色顆粒作為陽性結(jié)果，用BI-2000 醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)檢測HO-1、ICAM-1光密度值。

1.6 MIP-2的檢測

采用ELISA法測定肺組織勻漿MIP-2的含量。

1.7 統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用統(tǒng)計軟件SPSS16.0進(jìn)行統(tǒng)計分析，結(jié)果均以（x±s）表示，均數(shù)比較采用單因素方差分析（ANOVA），組間兩兩比較采用LSD-t檢驗法，相關(guān)性檢驗用直線相關(guān)分析，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 BALF白細(xì)胞計數(shù)及分類

2.2大鼠支氣管及肺組織病理學(xué)檢查

光鏡下觀察：對照組支氣管上皮細(xì)胞排列整齊，管壁及周圍無明顯炎癥變化；肺氣腫模型組各級支氣管纖毛柱狀上皮細(xì)胞部分變性、壞死，肺泡結(jié)構(gòu)紊亂，肺泡壁變薄、破壞，肺泡腔擴(kuò)大，肺泡間隔變薄或斷裂；干預(yù)組上述改變均有不同程度的減輕。見封三圖1。

2.3 肺組織HO-1的免疫組織化表達(dá)

正常對照組大鼠肺組織可見胞質(zhì)內(nèi)少許HO-1弱陽性表達(dá)的細(xì)胞。肺氣腫模型組HO-1的表達(dá)較對照組明顯增加（P<0.05）；與模型組比較，干預(yù)組肺組織中HO-1表達(dá)顯著增加（P<0.05）。見表2。

2.4 支氣管肺組織ICAM-1的免疫組織化學(xué)染色結(jié)果

肺氣腫模型組肺組織表達(dá)高水平ICAM-1蛋白，肺組織呈棕黃色，表達(dá)于肺微血管內(nèi)皮、肺泡細(xì)胞以及支氣管上皮細(xì)胞，肺氣腫模型組可見ICAM-1蛋白表達(dá)較正常對照組增加，染色變深。Hemin干預(yù)組中大鼠ICAM-1蛋白表達(dá)較肺氣腫模型組顯著降低（P<0.05），但仍比正常對照組高（P<0.05）。見表2。

2.5 肺組織勻漿中MIP-2含量

與對照組比較模型組MIP-2含量明顯增加（P<0.05）；干預(yù)組MIP-2含量較模型組減少，但仍高于對照組（P<0.05）。見表2。

2.6 肺氣腫模型組數(shù)據(jù)間相關(guān)性分析

BALF中的白細(xì)胞計數(shù)和中性粒細(xì)胞計數(shù)均與ICAM-1表達(dá)呈明顯正相關(guān)（r=0.85、0.84， P均<0.01）；同時BALF中的白細(xì)胞計數(shù)和中性粒細(xì)胞計數(shù)與MIP-2含量呈顯著正相關(guān)（r=0.89、0.89， P均<0.01）。

3 討論

COPD 的發(fā)病是一種復(fù)雜的病理過程，迄今為止其發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚，雖然許多研究表明COPD的發(fā)生、發(fā)展是由多種機(jī)制參與，但目前多數(shù)研究者認(rèn)為慢性氣道炎癥是最主要的發(fā)病機(jī)制。

HO-1在大多數(shù)組織中呈低水平表達(dá)，當(dāng)受到高氧、熱休克、內(nèi)毒素、過氧化氫、細(xì)胞因子等刺激時可產(chǎn)生高水平表達(dá)。研究顯示，在應(yīng)激狀態(tài)下，HO-1通過調(diào)控促炎細(xì)胞因子和抗炎細(xì)胞因子釋放，起到保護(hù)臟器功能的作用[8，9]。本實(shí)驗通過Hemin誘導(dǎo)HO-1的表達(dá)，觀察其病理學(xué)改變及肺組織ICAM-1表達(dá)與肺組織勻漿中MIP-2含量，以探討HO-1對肺氣腫的保護(hù)作用及其作用機(jī)制。本實(shí)驗結(jié)果顯示，與模型組比較，干預(yù)組HO-1表達(dá)明顯升高，肺泡及肺間質(zhì)病變明顯減輕，同時BALF中白細(xì)胞、中性細(xì)胞數(shù)目明顯減少， 說明血紅素加氧酶對煙霧暴露誘導(dǎo)的肺氣腫具有明顯的保護(hù)作用。

ICAM-1是細(xì)胞黏附分子的免疫球蛋白超家族，為76～114kD的單鏈糖蛋白，其配體為巨噬細(xì)胞黏附分子-1、淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原-1，兩者均屬于β2整合素，ICAM-1與β2整合素的黏附是白細(xì)胞跨越血管內(nèi)皮轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵[10]，也是白細(xì)胞在氣道聚集的必要條件[11]。

實(shí)驗發(fā)現(xiàn)，肺氣腫模型組支氣管上皮細(xì)胞、肺泡上皮細(xì)胞及支氣管肺組織微小血管內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1表達(dá)水平明顯高于正常對照組（P<0.05），BALF中的白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞數(shù)量與肺組織中ICAM-1的表達(dá)呈顯著正相關(guān)（r=0.85、0.84，P<0.01），這與黃玲媚等[12]研究一致，表明ICAM-1與肺氣腫氣道內(nèi)炎癥細(xì)胞的聚集、浸潤有關(guān)。本實(shí)驗Hemin干預(yù)組肺組織中ICAM-1表達(dá)水平低于模型組，張全等[13]在急性肺損傷研究中發(fā)現(xiàn)HO-1可通過阻斷NF-κB激活的信號通路減少ICAM-1的表達(dá)，說明HO-1能通過下調(diào)肺內(nèi)ICAM-1的表達(dá)增加，對肺臟起保護(hù)作用。

研究發(fā)現(xiàn)，一些特異性的趨化因子在白細(xì)胞聚集與活化的炎癥反應(yīng)過程中起重要作用。MIP-2是分子量6kD的堿性蛋白質(zhì)，由“α”和“β”兩種蛋白質(zhì)亞單位組成，其cDNA編碼有100個氨基酸，成熟的蛋白質(zhì)有73個氨基酸殘基。MIP-2由巨噬細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等分泌，屬于趨化性細(xì)胞因子中C-X-C亞家族成員。MIP-2可通過自身的肝素結(jié)合位點(diǎn)促進(jìn)白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞外基質(zhì)中硫酸乙酰的葡聚糖相互作用，加強(qiáng)白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附[14]。MIP-2通過對炎癥細(xì)胞的化學(xué)趨化和活化作用而參與炎癥的全過程，特異靶細(xì)胞為中性粒細(xì)胞，對其他炎癥細(xì)胞作用微弱。

實(shí)驗發(fā)現(xiàn)，模型組肺組織勻漿中MIP-2顯著高于對照組（P<0.05），且肺組織勻漿中MIP-2含量與BALF中的白細(xì)胞數(shù)及中性粒細(xì)胞數(shù)呈顯著正相關(guān)（r=0.89、0.89，P<0.01），這與羅曼等[15]在COPD大鼠模型中的研究結(jié)果相一致。提示MIP-2通過對中性粒細(xì)胞的特異性趨化作用促進(jìn)中性粒細(xì)胞在肺氣腫大鼠氣管、肺組織中的聚集、活化；說明MIP-2通過作用于中性粒細(xì)胞誘導(dǎo)了氣道炎癥和肺組織損傷，參與了肺氣腫發(fā)病。干預(yù)組肺組織勻漿中MIP-2含量均較模型組減低，這與Minamino等[16]在低氧性肺損傷研究中高表達(dá)HO-1的肺組織MIP-2水平顯著下降結(jié)果相一致，表明血紅素加氧酶-1可通過其抗炎能力減少肺內(nèi)MIP-2生成，從而減輕肺部炎性損傷，起一定的保護(hù)作用。

綜上所述，本實(shí)驗證實(shí)HO-1的抗炎作用，其機(jī)制可能為通過某種途徑減少ICAM-1和MIP-2的產(chǎn)生，進(jìn)而干預(yù)炎癥細(xì)胞的聚集、浸潤、活化，這或許是其減輕肺組織損傷、起到對肺臟的保護(hù)作用機(jī)制之一；但其具體作用機(jī)制尚不清楚，需更進(jìn)一步研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Rabe K F，Hurd S，Anzueto A，et al. Global strategy for the diagnosis， management， and prevention of chronic obstructive pulmonary disease： GOLD executive summary[J]. Am J Respir Crit Care Med，2007，176（6）：532-555.

[2] Sullivan A K，Simonian PL，F(xiàn)alta MT，et al. Oligoclonal CD4+ T cells in the lungs of patients with severe emphysema[J]. Am J Respir Crit Care Med，2005，172（5）：590-596.

[3] 張玉坤，朱濤，王導(dǎo)新，等. 染料木黃酮通過上調(diào)血紅素氧合酶-1表達(dá)減緩野百合堿誘導(dǎo)的大鼠肺動脈高壓[J]. 西部醫(yī)學(xué)，2012，24（1）：5-8.

[4] 蔚京京，范國權(quán). 血紅素加氧酶-1抑制哮喘小鼠IL-17分泌的抗炎機(jī)制研究[J]. 山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2012，43（6）：415-419.

[5] Cheng SE，Lee IT，Lin CC，et al. Cigarette smoke particle-phase extract induces HO-1 expression in human tracheal smooth muscle cells：Role of the c-Src/NADPH oxidase/MAPK/Nrf2 signaling pathway[J]. Free Radic Biol Med，2010，48（10）：1410-1422.

[6] Shinohara T，Kaneko T，Nagashima Y，et al. Adenovirus-mediated transfer and overexpression of heme oxygenase 1 cDNA in lungs attenuates elastase-induced pulmonary emphysema in mice[J]. Hum Gene Ther，2005，16（3）：318-327.

[7] Yamada N，Yamaya M，Okinaga S，et al. Microsatellite polymorphism in the heme oxygenase-1 gene promoter is associated with susceptibility to emphysema[J]. Am J Hum Genet，2000，66（1）：187-195.

[8] Vallabhaneni R，Kaczorowski DJ，Yaakovian MD，et al. Heme oxygenase 1 protects against hepatic hypoxia and injury from hemorrhage via regulation of cellular respiration[J]. Shock，2010，33（3）：274-281.

[9] Tamion F，Richard V，Renet S，et al. Protective effects of heme-oxygenase expression against endotoxic shock：inhibition of tumor necrosis factor-alpha and augmentation of interleukin-10[J]. J Trauma，2006，61（5）：1078-1084.

[10] Strieter RM，Lukacs NW，Standiford TJ，et al. Cytokines. 2. Cytokines and lung inflammation： mechanisms of neutrophil recruitment to the lung[J]. Thorax，1993，48（7）：765-769.

[11] Tedder TF，Steeber DA，Pizcueta P. L-selectin-deficient mice have impaired leukocyte recruitment into inflammatory sites[J]. J Exp Med，1995，181（6）：2259-2264.

[12] 黃玲媚，羅百靈，陳紅梅. 紅霉素對慢性阻塞性肺疾病大鼠 ICAM-1、MMP-9 的表達(dá)影響[J]. 現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2011，11（3）：497-501.

[13] 張全，曹麗葉，程樹杰，等. 血紅素加氧酶-1對重癥急性胰腺炎肺損傷大鼠NF-κB、ICAM-1的影響[J]. 山東醫(yī)藥，2012，52（5）：31-32.

[14] Thatcher TH，Mchugh NA，Egan RW，et al. Role of CXCR2 in cigarette smoke-induced lung inflammation[J]. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol，2005，289（2）：L322-L328.

[15] 羅曼，陳平，蔡珊，等. E-選擇素和巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2在慢性阻塞性肺疾病大鼠氣道炎癥中的作用[J].中國呼吸與危重監(jiān)護(hù)雜志，2008，7（2）：97-100.

[16] Minamino T， Christou H， Hsieh CM， et al. Targeted expression of heme oxygenase-1 prevents the pulmonary inflammatory and vascular responses to hypoxia[J]. Proc Natl Acad Sci U S A，2001，98（15）：8798-8803.

（收稿日期：2014-01-07）

研究發(fā)現(xiàn)，一些特異性的趨化因子在白細(xì)胞聚集與活化的炎癥反應(yīng)過程中起重要作用。MIP-2是分子量6kD的堿性蛋白質(zhì)，由“α”和“β”兩種蛋白質(zhì)亞單位組成，其cDNA編碼有100個氨基酸，成熟的蛋白質(zhì)有73個氨基酸殘基。MIP-2由巨噬細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等分泌，屬于趨化性細(xì)胞因子中C-X-C亞家族成員。MIP-2可通過自身的肝素結(jié)合位點(diǎn)促進(jìn)白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞外基質(zhì)中硫酸乙酰的葡聚糖相互作用，加強(qiáng)白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附[14]。MIP-2通過對炎癥細(xì)胞的化學(xué)趨化和活化作用而參與炎癥的全過程，特異靶細(xì)胞為中性粒細(xì)胞，對其他炎癥細(xì)胞作用微弱。

實(shí)驗發(fā)現(xiàn)，模型組肺組織勻漿中MIP-2顯著高于對照組（P<0.05），且肺組織勻漿中MIP-2含量與BALF中的白細(xì)胞數(shù)及中性粒細(xì)胞數(shù)呈顯著正相關(guān)（r=0.89、0.89，P<0.01），這與羅曼等[15]在COPD大鼠模型中的研究結(jié)果相一致。提示MIP-2通過對中性粒細(xì)胞的特異性趨化作用促進(jìn)中性粒細(xì)胞在肺氣腫大鼠氣管、肺組織中的聚集、活化；說明MIP-2通過作用于中性粒細(xì)胞誘導(dǎo)了氣道炎癥和肺組織損傷，參與了肺氣腫發(fā)病。干預(yù)組肺組織勻漿中MIP-2含量均較模型組減低，這與Minamino等[16]在低氧性肺損傷研究中高表達(dá)HO-1的肺組織MIP-2水平顯著下降結(jié)果相一致，表明血紅素加氧酶-1可通過其抗炎能力減少肺內(nèi)MIP-2生成，從而減輕肺部炎性損傷，起一定的保護(hù)作用。

綜上所述，本實(shí)驗證實(shí)HO-1的抗炎作用，其機(jī)制可能為通過某種途徑減少ICAM-1和MIP-2的產(chǎn)生，進(jìn)而干預(yù)炎癥細(xì)胞的聚集、浸潤、活化，這或許是其減輕肺組織損傷、起到對肺臟的保護(hù)作用機(jī)制之一；但其具體作用機(jī)制尚不清楚，需更進(jìn)一步研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Rabe K F，Hurd S，Anzueto A，et al. Global strategy for the diagnosis， management， and prevention of chronic obstructive pulmonary disease： GOLD executive summary[J]. Am J Respir Crit Care Med，2007，176（6）：532-555.

[2] Sullivan A K，Simonian PL，F(xiàn)alta MT，et al. Oligoclonal CD4+ T cells in the lungs of patients with severe emphysema[J]. Am J Respir Crit Care Med，2005，172（5）：590-596.

[3] 張玉坤，朱濤，王導(dǎo)新，等. 染料木黃酮通過上調(diào)血紅素氧合酶-1表達(dá)減緩野百合堿誘導(dǎo)的大鼠肺動脈高壓[J]. 西部醫(yī)學(xué)，2012，24（1）：5-8.

[4] 蔚京京，范國權(quán). 血紅素加氧酶-1抑制哮喘小鼠IL-17分泌的抗炎機(jī)制研究[J]. 山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2012，43（6）：415-419.

[5] Cheng SE，Lee IT，Lin CC，et al. Cigarette smoke particle-phase extract induces HO-1 expression in human tracheal smooth muscle cells：Role of the c-Src/NADPH oxidase/MAPK/Nrf2 signaling pathway[J]. Free Radic Biol Med，2010，48（10）：1410-1422.

[6] Shinohara T，Kaneko T，Nagashima Y，et al. Adenovirus-mediated transfer and overexpression of heme oxygenase 1 cDNA in lungs attenuates elastase-induced pulmonary emphysema in mice[J]. Hum Gene Ther，2005，16（3）：318-327.

[7] Yamada N，Yamaya M，Okinaga S，et al. Microsatellite polymorphism in the heme oxygenase-1 gene promoter is associated with susceptibility to emphysema[J]. Am J Hum Genet，2000，66（1）：187-195.

[8] Vallabhaneni R，Kaczorowski DJ，Yaakovian MD，et al. Heme oxygenase 1 protects against hepatic hypoxia and injury from hemorrhage via regulation of cellular respiration[J]. Shock，2010，33（3）：274-281.

[9] Tamion F，Richard V，Renet S，et al. Protective effects of heme-oxygenase expression against endotoxic shock：inhibition of tumor necrosis factor-alpha and augmentation of interleukin-10[J]. J Trauma，2006，61（5）：1078-1084.

[10] Strieter RM，Lukacs NW，Standiford TJ，et al. Cytokines. 2. Cytokines and lung inflammation： mechanisms of neutrophil recruitment to the lung[J]. Thorax，1993，48（7）：765-769.

[11] Tedder TF，Steeber DA，Pizcueta P. L-selectin-deficient mice have impaired leukocyte recruitment into inflammatory sites[J]. J Exp Med，1995，181（6）：2259-2264.

[12] 黃玲媚，羅百靈，陳紅梅. 紅霉素對慢性阻塞性肺疾病大鼠 ICAM-1、MMP-9 的表達(dá)影響[J]. 現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2011，11（3）：497-501.

[13] 張全，曹麗葉，程樹杰，等. 血紅素加氧酶-1對重癥急性胰腺炎肺損傷大鼠NF-κB、ICAM-1的影響[J]. 山東醫(yī)藥，2012，52（5）：31-32.

[14] Thatcher TH，Mchugh NA，Egan RW，et al. Role of CXCR2 in cigarette smoke-induced lung inflammation[J]. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol，2005，289（2）：L322-L328.

[15] 羅曼，陳平，蔡珊，等. E-選擇素和巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2在慢性阻塞性肺疾病大鼠氣道炎癥中的作用[J].中國呼吸與危重監(jiān)護(hù)雜志，2008，7（2）：97-100.

[16] Minamino T， Christou H， Hsieh CM， et al. Targeted expression of heme oxygenase-1 prevents the pulmonary inflammatory and vascular responses to hypoxia[J]. Proc Natl Acad Sci U S A，2001，98（15）：8798-8803.

（收稿日期：2014-01-07）

研究發(fā)現(xiàn)，一些特異性的趨化因子在白細(xì)胞聚集與活化的炎癥反應(yīng)過程中起重要作用。MIP-2是分子量6kD的堿性蛋白質(zhì)，由“α”和“β”兩種蛋白質(zhì)亞單位組成，其cDNA編碼有100個氨基酸，成熟的蛋白質(zhì)有73個氨基酸殘基。MIP-2由巨噬細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等分泌，屬于趨化性細(xì)胞因子中C-X-C亞家族成員。MIP-2可通過自身的肝素結(jié)合位點(diǎn)促進(jìn)白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞外基質(zhì)中硫酸乙酰的葡聚糖相互作用，加強(qiáng)白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附[14]。MIP-2通過對炎癥細(xì)胞的化學(xué)趨化和活化作用而參與炎癥的全過程，特異靶細(xì)胞為中性粒細(xì)胞，對其他炎癥細(xì)胞作用微弱。

實(shí)驗發(fā)現(xiàn)，模型組肺組織勻漿中MIP-2顯著高于對照組（P<0.05），且肺組織勻漿中MIP-2含量與BALF中的白細(xì)胞數(shù)及中性粒細(xì)胞數(shù)呈顯著正相關(guān)（r=0.89、0.89，P<0.01），這與羅曼等[15]在COPD大鼠模型中的研究結(jié)果相一致。提示MIP-2通過對中性粒細(xì)胞的特異性趨化作用促進(jìn)中性粒細(xì)胞在肺氣腫大鼠氣管、肺組織中的聚集、活化；說明MIP-2通過作用于中性粒細(xì)胞誘導(dǎo)了氣道炎癥和肺組織損傷，參與了肺氣腫發(fā)病。干預(yù)組肺組織勻漿中MIP-2含量均較模型組減低，這與Minamino等[16]在低氧性肺損傷研究中高表達(dá)HO-1的肺組織MIP-2水平顯著下降結(jié)果相一致，表明血紅素加氧酶-1可通過其抗炎能力減少肺內(nèi)MIP-2生成，從而減輕肺部炎性損傷，起一定的保護(hù)作用。

綜上所述，本實(shí)驗證實(shí)HO-1的抗炎作用，其機(jī)制可能為通過某種途徑減少ICAM-1和MIP-2的產(chǎn)生，進(jìn)而干預(yù)炎癥細(xì)胞的聚集、浸潤、活化，這或許是其減輕肺組織損傷、起到對肺臟的保護(hù)作用機(jī)制之一；但其具體作用機(jī)制尚不清楚，需更進(jìn)一步研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Rabe K F，Hurd S，Anzueto A，et al. Global strategy for the diagnosis， management， and prevention of chronic obstructive pulmonary disease： GOLD executive summary[J]. Am J Respir Crit Care Med，2007，176（6）：532-555.

[2] Sullivan A K，Simonian PL，F(xiàn)alta MT，et al. Oligoclonal CD4+ T cells in the lungs of patients with severe emphysema[J]. Am J Respir Crit Care Med，2005，172（5）：590-596.

[3] 張玉坤，朱濤，王導(dǎo)新，等. 染料木黃酮通過上調(diào)血紅素氧合酶-1表達(dá)減緩野百合堿誘導(dǎo)的大鼠肺動脈高壓[J]. 西部醫(yī)學(xué)，2012，24（1）：5-8.

[4] 蔚京京，范國權(quán). 血紅素加氧酶-1抑制哮喘小鼠IL-17分泌的抗炎機(jī)制研究[J]. 山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2012，43（6）：415-419.

[5] Cheng SE，Lee IT，Lin CC，et al. Cigarette smoke particle-phase extract induces HO-1 expression in human tracheal smooth muscle cells：Role of the c-Src/NADPH oxidase/MAPK/Nrf2 signaling pathway[J]. Free Radic Biol Med，2010，48（10）：1410-1422.

[6] Shinohara T，Kaneko T，Nagashima Y，et al. Adenovirus-mediated transfer and overexpression of heme oxygenase 1 cDNA in lungs attenuates elastase-induced pulmonary emphysema in mice[J]. Hum Gene Ther，2005，16（3）：318-327.

[7] Yamada N，Yamaya M，Okinaga S，et al. Microsatellite polymorphism in the heme oxygenase-1 gene promoter is associated with susceptibility to emphysema[J]. Am J Hum Genet，2000，66（1）：187-195.

[8] Vallabhaneni R，Kaczorowski DJ，Yaakovian MD，et al. Heme oxygenase 1 protects against hepatic hypoxia and injury from hemorrhage via regulation of cellular respiration[J]. Shock，2010，33（3）：274-281.

[9] Tamion F，Richard V，Renet S，et al. Protective effects of heme-oxygenase expression against endotoxic shock：inhibition of tumor necrosis factor-alpha and augmentation of interleukin-10[J]. J Trauma，2006，61（5）：1078-1084.

[10] Strieter RM，Lukacs NW，Standiford TJ，et al. Cytokines. 2. Cytokines and lung inflammation： mechanisms of neutrophil recruitment to the lung[J]. Thorax，1993，48（7）：765-769.

[11] Tedder TF，Steeber DA，Pizcueta P. L-selectin-deficient mice have impaired leukocyte recruitment into inflammatory sites[J]. J Exp Med，1995，181（6）：2259-2264.

[12] 黃玲媚，羅百靈，陳紅梅. 紅霉素對慢性阻塞性肺疾病大鼠 ICAM-1、MMP-9 的表達(dá)影響[J]. 現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2011，11（3）：497-501.

[13] 張全，曹麗葉，程樹杰，等. 血紅素加氧酶-1對重癥急性胰腺炎肺損傷大鼠NF-κB、ICAM-1的影響[J]. 山東醫(yī)藥，2012，52（5）：31-32.

[14] Thatcher TH，Mchugh NA，Egan RW，et al. Role of CXCR2 in cigarette smoke-induced lung inflammation[J]. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol，2005，289（2）：L322-L328.

[15] 羅曼，陳平，蔡珊，等. E-選擇素和巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2在慢性阻塞性肺疾病大鼠氣道炎癥中的作用[J].中國呼吸與危重監(jiān)護(hù)雜志，2008，7（2）：97-100.

[16] Minamino T， Christou H， Hsieh CM， et al. Targeted expression of heme oxygenase-1 prevents the pulmonary inflammatory and vascular responses to hypoxia[J]. Proc Natl Acad Sci U S A，2001，98（15）：8798-8803.

（收稿日期：2014-01-07）