鄭久明，張 迪，劉新宇，劉春娜

（遼寧醫(yī)學(xué)院1.藥理學(xué)教研室、2.附屬第一醫(yī)院，遼寧錦州 121001）

嗎啡等阿片類藥物反復(fù)使用可造成耐受、依賴和成癮，中斷給藥出現(xiàn)戒斷綜合征、強(qiáng)迫覓藥行為及戒斷后焦慮等精神神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，對(duì)患者的身心有嚴(yán)重影響。目前已知，中腦邊緣－多巴胺系統(tǒng)與藥物成癮和強(qiáng)化作用形成密切相關(guān)，此系統(tǒng)起自中腦腹側(cè)被蓋區(qū)（ventral tegmental area，VTA），投射到杏仁中央核（nucleus centralis amygdalae，NAC）、內(nèi)側(cè)前額葉皮層（mPFC）等前腦區(qū)域，并涉及多種神經(jīng)遞質(zhì)的投射。其中VTA是中腦的重要神經(jīng)核團(tuán)，在此系統(tǒng)中發(fā)揮非常關(guān)鍵的作用，因此受到人們的關(guān)注。神經(jīng)肽urocortin（UCN）是由40個(gè)氨基酸組成的高活性神經(jīng)肽，屬促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子（CRH）家族，與CRF具有相似的生物學(xué)活性，通過(guò)下丘腦－腺垂體－腎上腺軸，促進(jìn)腺垂體分泌腎上腺皮質(zhì)激素，調(diào)節(jié)應(yīng)激、應(yīng)急反應(yīng)，抗焦慮，鎮(zhèn)靜等作用［1］。雖然，UCN對(duì)嗎啡成癮影響有少量報(bào)道，但UCN對(duì)嗎啡成癮VTA神經(jīng)元自發(fā)放電活動(dòng)的影響未見報(bào)道。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康Sprague-Dawley（SD）♂大鼠50只，體質(zhì)量250～300 g，由遼寧醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)SCXK（遼）2008－0004。隨機(jī)分為對(duì)照組10只和嗎啡成癮模型組40只。

1.2 嗎啡成癮大鼠模型的建立 按照12 d序列遞增法［2］建立嗎啡成癮大鼠模型。

1.3 方法

1.3.1 麻醉開顱 大鼠腹腔注射氨基甲酸乙酯（1 g·kg－1）麻醉后，顱平位固定于腦立體定位儀（西北光學(xué)儀器廠，型號(hào)VDT-1）上，行常規(guī)開顱術(shù)。

1.3.2 定位及注藥 根據(jù)Paxion＆Wastor大鼠腦圖譜，確定VTA位置坐標(biāo)為前囟后5.20～6.80 mm，中線旁開0.20～0.80 mm，腦表下7.0～8.0 mm。微電泳及細(xì)胞外記錄使用51－217型微管拉制儀（美國(guó)STOELTING公司）所拉制的7管玻璃微電極［3］。中心管電阻5～12 MΩ，尖端直徑10 μm，管內(nèi)灌注含 1% 滂胺天藍(lán)的 NaCl（3.0 mol·L－1）溶液；外周管電阻20～100MΩ，管內(nèi)灌注不同濃度梯度UCNⅡ（10－5、10－6、10－7mol·L－1）及 Astressin-AST（CRFR2阻斷劑）。

1.3.3 采集數(shù)據(jù) 微電泳儀（美國(guó)Dagan公司）設(shè)定給藥電流為10～100 nA，給藥時(shí)間為20 s，滯流電流為10 nA，應(yīng)用Spike5軟件采集數(shù)據(jù)。

1.3.4 數(shù)據(jù)處理分析 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，所得數(shù)據(jù)以表示。

2 結(jié)果

2.1 嗎啡成癮大鼠的行為學(xué)觀察 40只大鼠ip鹽酸嗎啡，1只因個(gè)體差異藥物過(guò)量致死，2只戒斷癥狀不明顯，其余均觀察到戒斷癥狀，且戒斷癥狀評(píng)分均在15分以上，提示造模成功。

2．2 大鼠VTA神經(jīng)元自發(fā)放電活動(dòng) 記錄到對(duì)照組大鼠32個(gè)神經(jīng)元和模型組大鼠81個(gè)神經(jīng)元自發(fā)放電。對(duì)照組大鼠VTA神經(jīng)元平均放電頻率為（10.58±4.13）Hz，模型組大鼠VTA神經(jīng)元的平均放電頻率為（23.16±8.38）Hz，比對(duì)照組明顯增高（t＝6.024，P＜0.01）。大鼠VTA神經(jīng)元出現(xiàn)3種放電形式：規(guī)則放電、不規(guī)則放電和爆發(fā)式放電［4］。模型組大鼠VTA神經(jīng)元不規(guī)則放電神經(jīng)元構(gòu)成比明顯增多，而對(duì)照組大鼠VTA神經(jīng)元?jiǎng)t以規(guī)則放電和不規(guī)則放電為主（Tab 1）。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝8.18，P＜0.05）。

Tab 1 Spontaneous discharge forms of VTA neurons in control and model groups

2．3 微電泳UCNⅡ及AST對(duì)模型組大鼠VTA神經(jīng)元自發(fā)放電的影響 采集到81個(gè)模型組大鼠神經(jīng)元放電，其中65個(gè)給予不同濃度梯度UCNⅡ，VTA神經(jīng)元放電頻率隨藥物濃度越高，有降低越明顯的趨勢(shì)（Tab 2），多為單個(gè)放電，偶見雙向動(dòng)作電位。單獨(dú)給予AST，神經(jīng)元放電頻率加快，接著給予UCNⅡ，放電頻率減慢（Tab 3）。

Tab 2 Effects of different concentrations of UCNⅡon VTA neuron spontaneous firing rates

Tab 3 Effects of UCNⅡand AST on VTA neuron spontaneous firing rates

3 討論

該研究表明，嗎啡成癮大鼠VTA自發(fā)放電頻率明顯高于正常大鼠。因?yàn)閂TA是愉悅系統(tǒng)或獎(jiǎng)賞系統(tǒng)的重要部分，當(dāng)產(chǎn)生獎(jiǎng)賞行為時(shí)，能夠刺激VTA神經(jīng)元。而DA能神經(jīng)元的胞體主要位于中腦VTA，其纖維投射主要到NAC區(qū)，構(gòu)成獎(jiǎng)賞系統(tǒng)，阿片類藥物能直接或間接刺激這個(gè)區(qū)域，產(chǎn)生神經(jīng)元異常高頻放電。

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，微電泳UCNⅡ使嗎啡成癮大鼠VTA神經(jīng)元自發(fā)放電頻率明顯減慢，說(shuō)明UCNⅡ?qū)ζ銿TA神經(jīng)元起抑制作用。單獨(dú)微電泳AST可增加受試嗎啡成癮大鼠VTA神經(jīng)元的自發(fā)放電頻率，提示VTA神經(jīng)元中有CRFR2的存在。小鼠敲除UCN后，焦慮行為增強(qiáng)，CRFR2受體敲除小鼠對(duì)應(yīng)激反應(yīng)超敏，提示CRFR2受體介導(dǎo)抗焦慮效應(yīng)［5］。關(guān)于UCN與藥物成癮的關(guān)系，研究資料較少。可卡因戒斷引起的長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)可被CRFR1和CRFR2拮抗劑阻斷；在酒精戒斷過(guò)程中，大鼠杏仁核細(xì)胞外CRF明顯升高。上述結(jié)果提示：UCN可能通過(guò)CRFR2參與酒精成癮及戒斷后焦慮和覓藥等行為的應(yīng)激性反應(yīng)。給予UCNⅡ期間，其抑制作用可被CRFR2阻斷劑AST所拮抗，結(jié)果進(jìn)一步提示UCNⅡ?qū)TA神經(jīng)元的抑制效應(yīng)可能是通過(guò)與CRFR2結(jié)合后發(fā)揮作用。

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