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        一起孔雀新城疫的診斷與防治

        2014-05-18 06:10:48彭麗娟楊佳冰
        中國動物檢疫 2014年4期
        關(guān)鍵詞:瓊脂糖新城疫孔雀

        馬 龍,李 莉,王 磊,彭麗娟,楊佳冰,趙 燕,趙 原

        (1.寧夏動物疾病預(yù)防控制中心,寧夏 銀川 750001;2.靈武市動物疾病預(yù)防控制中心,寧夏 靈武 750400)

        1 流行概況

        2012年3月16日至4月23日,寧夏某動物園先后從山東某市調(diào)入290只孔雀。4月21日1只孔雀首先發(fā)病,對病死孔雀進(jìn)行詳細(xì)記錄,眼觀病理變化主要表現(xiàn)為呼吸困難、眼腫脹、采食減少,臥地不起,嘴流[1]黏液,拉白綠色稀糞便。至4月26日先后又8只發(fā)病,經(jīng)藥物治療,每只按(3~4羽份/只)肌注新城疫疫苗,進(jìn)行緊急免疫接種,無明顯好轉(zhuǎn),沒有配合其他藥物進(jìn)行輔助治療。到6月18日共死亡54只,隨后出現(xiàn)零星死亡。8月5日突然死亡79只, 8月6日上午又死亡13只,截至8月6日園內(nèi)共死亡146只孔雀。發(fā)病孔雀的主要臨床癥狀為呼吸困難,下痢、精神紊亂。動物防疫部門對發(fā)病孔雀采用新城疫疫苗大劑量(3~5羽份/只)肌注,并用0.1%菌毒凈帶孔雀消毒,飲用含適量多維、10%葡萄糖水治療之后這批孔雀發(fā)病率急劇下降再無死亡報告。

        2 臨床癥狀

        患病孔雀精神沉郁,頭腫,鼻塞,不愿走動,厭食,下痢,體溫高達(dá)44℃,羽毛松亂,呼吸困難而呈張口呼吸,口中流有白色[2]黏液。部分表現(xiàn)神經(jīng)癥狀,雙翅麻痹下垂,雙腿不能站立,頭頸扭轉(zhuǎn)呈現(xiàn)轉(zhuǎn)圈動作。

        3 剖檢變化

        剖檢病死孔雀發(fā)現(xiàn)氣管黏膜出血,肺組織有魚肉樣變,腺胃乳頭出血、潰瘍,肌胃肌層有出血點,十二指腸腫、彌漫性出血,盲腸扁桃體腫脹、黏膜出血,腎腫大、花斑樣出血,胸腔積水,心臟呈絨毛心、形成白色纖維覆蓋,肝臟表面呈白色纖維且脆。

        4 實驗室診斷

        采集孔雀血液和病死孔雀咽喉、氣管、腸管、心、肝、脾、肺、腎和腦等組織采用RT—PCR方法進(jìn)行檢測。

        4.1 樣品的采集

        采集疑似發(fā)病孔雀病料5份,利用RT—PCR方法檢測新城疫病毒(NDV)。同群發(fā)病靜脈采血5份,周邊未接觸病變10份。

        4.2 材料與試劑

        4.2.1 TransScriptTM One-Step RT—PCR SuperMix kit購自北京全式金生物技術(shù)有限公司,Marker DL2000購自大連寶生物工程有限公司。

        4.3 樣品的處理

        4.3.1 采集病死孔雀的組織樣品按照常規(guī)方法用pH7.2的PBS溶液進(jìn)行研磨,反復(fù)凍融3次,10000r/min離心3min,取上清液作為RT—PCR試驗材料。

        4.4 RNA的提取

        4.4.1 病毒RNA按公司High pure Viral RNA Kit試劑盒說明書提取

        4.4.2 對疑似患病孔雀組織和同群進(jìn)行新城疫RT—PCR檢測

        4.4.3 目的基因的擴(kuò)增分析

        4.4.3.1 新城疫RT—PCR全預(yù)混通用反應(yīng)液中含有模板以外的所有RT—PCR所需酶、引物及各種離子。在各設(shè)定的PCR管中分別加入24uL反應(yīng)液、3uLCI類陽性對照及3uLCII類陽性對照,使總體積達(dá)30uL。

        4.4.3.2 反應(yīng)條件為:42℃作用35min,90℃作用3min。反應(yīng)參數(shù):94℃ 30s,55℃ 40s,72℃40s,35個循環(huán),72℃延伸7min。擴(kuò)增產(chǎn)物以1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測4.4.3.3用1×TAE緩沖液配制1.5%的瓊脂糖凝膠,100V電泳30min后取5uL RT—PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳,于紫外凝膠紫外燈下進(jìn)行觀察。

        4.5 實驗結(jié)果

        對疑似患病孔雀組織和同群進(jìn)行新城疫病毒RT—PCR檢測,得到目的條帶,經(jīng)1.5%的瓊脂糖凝膠電泳分析,擴(kuò)增出了特異的條帶,與預(yù)期結(jié)果一致。綜合臨床表現(xiàn)和病理特征以及RT—PCR檢測結(jié)果,本病確定為新城疫病毒感染。

        圖2 實驗結(jié)果

        5 防治

        5.1 對新引進(jìn)的孔雀必須嚴(yán)格隔離和消毒,并注意人員、包裝物品、車輛等一切與孔雀有接觸的物品的獸醫(yī)衛(wèi)生。

        5.2 堅持經(jīng)常、定期地對鳥舍和周圍環(huán)境的清掃與消毒。

        5.3 緊急接種新城疫活疫苗可提高鳥體對新城疫的緊急免疫力。

        5.4 對可疑病例應(yīng)盡快利用實驗室等診斷手段,做到早確診并果斷采取一系列有效措施,包括將病鳥及時隔離,鳥舍和飼養(yǎng)用具及時消毒并對該場地進(jìn)行封鎖,對個別病鳥進(jìn)行淘汰,以防病原擴(kuò)散和蔓延。

        5.5 病死孔雀應(yīng)采取無害化處理,將其深埋或焚燒,并做好接觸封鎖的一切善后工作。

        [1]賈松濤,劉星,宋慶華.孔雀新城疫繼發(fā)大腸桿菌病的診治[J].中國畜牧獸醫(yī),2011,38(12):205-206.

        [2]張媛,王丹,葛晨霞,等.孔雀組織滴蟲病的病理學(xué)診斷[J].中國獸醫(yī)雜志,2011,47(8):49-50.

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