張方怡，Gebru Yoseph，黃文秀，張 巖

（1.上海理工大學(xué)系統(tǒng)生物醫(yī)學(xué)研究中心，上海 200093；2.香港理工大學(xué)應(yīng)用生物及化學(xué)科技學(xué)系，香港）

低鈣飲食導(dǎo)致骨吸收增強(qiáng)，可誘發(fā)骨量的流失［1］，嚴(yán)重的則可導(dǎo)致骨質(zhì)疏松。近年來(lái)有研究發(fā)現(xiàn)，腎素-血管緊張素系統(tǒng)（RAS）存在于骨組織并參與骨代謝疾病的發(fā)病過(guò)程［2-3］。由于骨組織RAS的活性升高，其活性肽血管緊張素II（AngII）的生成增加，AngⅡ作為RAS的最重要的活性物質(zhì)［4］通 過(guò) 調(diào) 控 骨 代 謝 致 骨 量 流 失［5］。阿 利 吉 侖（Aliskiren）是一種新研制的可口服的具有直接抑制腎素活性的新型長(zhǎng)效降壓藥物［6］。阿利吉侖通過(guò)抑制RAS首步腎素的活性，可以有效抑制血管緊張素原向血管緊張素I的轉(zhuǎn)化［7］，繼而有效減少 RAS活性肽 AngII的生成［8］。本實(shí)驗(yàn)以腎素抑制劑阿利吉侖為研究對(duì)象，探討其對(duì)低鈣飲食小鼠松質(zhì)骨的作用。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 8周齡♂ICR小鼠共20只，由上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證書(shū)編號(hào)：SCXK（Shanghai）2007000510114。

1.2 動(dòng)物飼料 適應(yīng)期飼料鈣含量1.0 g·kg-1（中國(guó)上海世林生物科技有限公司），低鈣飼料鈣含量0.1 g·kg-1（Harlan Teklad，Madison，WI，USA）。

1.3 藥物與試劑 阿利吉侖（諾華公司），150 mg／片。甲狀旁腺激素ELISA試劑盒、骨鈣素ELISA試劑盒（Immutopics，California，美國(guó)）；鈣、磷、肌酐檢測(cè)試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司，北京，中國(guó)）。

2 方法

2.1 模型建立與樣本收集 動(dòng)物隨機(jī)分為3組，全部以低鈣飲食（LCD）飼養(yǎng)，包括 LCD組；LCD+低劑量（5 mg·kg-1）阿利吉侖組（LCD+LA）、LCD+高劑量（25 mg·kg-1）阿利吉侖組（LCD+HA），并按照小鼠的體重持續(xù)給藥8周后，收集尿液。處死動(dòng)物時(shí)，收集血清、脛骨、腰椎等樣本，待生物學(xué)分析。

Tab 1 Serum＆urine biochem istries among groups

Tab 2 Trabecular bone biological parameters of lumbar vertebra-2＆vertebra-5

2.2 指標(biāo)檢測(cè) 使用試劑盒檢測(cè)血清、尿液生化指標(biāo)。對(duì)腰椎第2節(jié)和第5節(jié)進(jìn)行微焦點(diǎn)定量CT掃描分析。利用蛋白免疫印跡技術(shù)對(duì)目標(biāo)蛋白血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）、腎素（renin）進(jìn)行精確定量分析。

2.3 數(shù)據(jù)分析 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以表示。使用雙尾Student′st檢驗(yàn)組間差異。

3 結(jié)果

3.1 血清和尿液的生化指標(biāo) 相對(duì)于低鈣飲食組，阿利吉侖給藥組小鼠血鈣、血甲狀旁腺激素水平雖有升高，但差異未有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而高劑量組可明顯提高血磷水平（Tab 1，P＜0.01）。此外，阿利吉侖明顯提高血清骨鈣素水平（P＜0.05）（Tab 1）。

3.2 腰椎骨小梁的骨密度和結(jié)構(gòu)參數(shù) 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)微焦點(diǎn)定量CT技術(shù)檢測(cè)了各組小鼠腰椎第2節(jié)和第5節(jié)的松質(zhì)骨微觀結(jié)構(gòu)參數(shù)、松質(zhì)骨的骨量（Tab 2）。各實(shí)驗(yàn)組間松質(zhì)骨的微觀結(jié)構(gòu)參數(shù)沒(méi)有差異，然而，阿利吉侖明顯提高小鼠腰椎第2節(jié)（P＜0.05）、第5節(jié)（P＜0.01）骨小梁的體積骨密度。

3.3 蛋白結(jié)果分析 通過(guò)對(duì)小鼠脛骨RAS組分的蛋白表達(dá)的定量分析，結(jié)果表明，在LCD+LA組中，ACE和AngⅡ表達(dá)都明顯降低（P＜0.05）。同樣，在LCD+HA組中，Renin、ACE、AngⅡ蛋白表達(dá)都明顯下調(diào)（P＜0.05）。

4 討論

通過(guò)微焦點(diǎn)定量CT測(cè)定腰椎骨小梁生物學(xué)參數(shù)，發(fā)現(xiàn)阿利吉侖對(duì)骨小梁微觀結(jié)構(gòu)參數(shù)無(wú)明顯作用，但可以明顯提高小鼠腰椎小梁骨礦物質(zhì)密度，這可以作為阿利吉侖具有防治骨質(zhì)流失作用的有力證據(jù)。

通過(guò)對(duì)骨代謝生化指標(biāo)的結(jié)果分析，發(fā)現(xiàn)阿利吉侖可明顯提高血磷和血清骨鈣素（骨形成指標(biāo)）水平，說(shuō)明阿利吉侖具有潛在的調(diào)控骨轉(zhuǎn)換速率的作用，但是阿利吉侖對(duì)骨吸收是否具有調(diào)控作用，還需要進(jìn)一步研究。

通過(guò)對(duì)骨組織RAS組分蛋白表達(dá)結(jié)果分析，發(fā)現(xiàn)在阿利吉侖藥物處理組中，骨組織ACE、AngII、腎素等RAS組分的蛋白表達(dá)水平都明顯降低，說(shuō)明阿利吉侖可以有效調(diào)控RAS活性，從而減少骨損傷。因此，綜合本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，不難看出，腎素抑制劑阿利吉侖可以通過(guò)對(duì)骨組織RAS的調(diào)控，減少骨礦流失。

本實(shí)驗(yàn)研究了藥物對(duì)低鈣飲食小鼠發(fā)生骨質(zhì)疏松的預(yù)防作用，如果需要研究其治療作用，需要在低鈣喂食8～12周后，再進(jìn)行藥物干預(yù)。腎素抑制劑阿利吉侖對(duì)其它原因致骨質(zhì)疏松癥的改善作用以及其臨床療效還有待進(jìn)一步的研究加以揭示，這將對(duì)高血壓病人、尤其合并骨量丟失高風(fēng)險(xiǎn)的高血壓患者具有重要臨床意義。

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