金明哲，熊瑛

(瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院呼吸一科，瀘州 646000)

沙美特羅替卡松粉吸入劑對(duì)大鼠慢性阻塞性肺疾病氣道重塑的影響

金明哲，熊瑛

(瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院呼吸一科，瀘州 646000)

目的 探討不同劑量沙美特羅替卡松粉吸入劑(ICS/LABA)對(duì)大鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)氣道重塑的干預(yù)作用。方法將40只Wistar大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組(A組)、模型組(B組)、低劑量ICS/LABA組(C組)、高劑量ICS/LABA組(D組)。采用煙熏加氣管內(nèi)注射脂多糖(LPS)法復(fù)制COPD模型,C、D組吸入中、高劑量ICS/LABA。觀察肺功能和病理變化,肺泡灌洗液(BALF)中細(xì)胞計(jì)數(shù)和百分比,圖像分析測(cè)量小氣道平滑肌和管壁厚度,酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法測(cè)定BALF中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)的表達(dá),免疫組化法測(cè)定肺組織中基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)、分泌性白細(xì)胞蛋白酶抑制劑(SLPI)的表達(dá),實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測(cè)肺組織中MMP-9mRNA的表達(dá)。結(jié)果B組肺間質(zhì)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),肺泡壁破壞,肺大皰形成,氣管管壁和平滑肌增厚,C、D組有所減輕;B組TGF-β1、MMP-9水平與A組大鼠相比明顯升高,SLPI則顯著降低(P＜0.05);干預(yù)后C、D組TGF-β1、MMP-9水平與B組相比明顯降低,而SLPI則明顯升高(P＜0.05);D組TGF-β1、MMP-9陽(yáng)性系數(shù)和mRNA相對(duì)含量[(82.06±4.43)(2.41±0.22) (6.156±8.86)]顯著低于C組[(118.59±5.28)(3.09±0.28)(9.616±10.56)](P＜0.05),而SLPI(2.95±0.28)明顯高于C組(2.11±0.26)(P＜0.05)。結(jié)論ICS/LABA對(duì)COPD大鼠肺泡破壞及氣道重塑有抑制作用,且高劑量?jī)?yōu)于低劑量,其機(jī)制可能與降低TGF-β1和MMP-9的表達(dá)及提高SLPI的水平有關(guān)。

沙美特羅替卡松粉吸入劑；肺疾病,阻塞性,慢性；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1；金屬基質(zhì)蛋白酶9；分泌性白細(xì)胞蛋白酶抑制物

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)的主要特征為肺部慢性炎性、氣道重塑和動(dòng)態(tài)氣體陷閉,其與有害刺激引起肺部異常炎癥反應(yīng)有關(guān),吸煙及感染等導(dǎo)致炎癥細(xì)胞在氣道局部聚集,促進(jìn)炎癥遞質(zhì)和細(xì)胞因子釋放[1],同時(shí)抑制具有保護(hù)性的細(xì)胞因子的表達(dá),致使炎癥遷延不愈,最終導(dǎo)致氣道重塑。吸入性糖皮質(zhì)激素/長(zhǎng)效β2受體激動(dòng)藥(inhaled corticosteroids/long-acting β2agonists,ICS/LABA)在COPD應(yīng)用低劑量尚存爭(zhēng)議,雖然經(jīng)TORCH和INSPIRE臨床研究[2-3],發(fā)現(xiàn)ICS/LABA可改善COPD患者肺功能,降低急性發(fā)作頻率,但長(zhǎng)期大劑量應(yīng)用不良反應(yīng)大,突然停藥后可增加肺炎發(fā)生率等。ICS/LABA是否具有調(diào)控COPD氣道重塑的作用,筆者尚未見(jiàn)報(bào)道。為此,筆者采用煙熏加氣管內(nèi)注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)法建立COPD模型,觀察不同劑量ICS/LABA對(duì)COPD大鼠氣道重塑及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(transforming growth factor beta1,TGF-β1)、基質(zhì)金屬蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、分泌性白細(xì)胞蛋白酶抑制劑(secretory leukocyte protease inhibitor,SLPI)表達(dá)的影響,探討低、高劑量ICS/LABA對(duì)COPD動(dòng)物模型氣道重塑的調(diào)控作用,為臨床治療COPD提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物模型與分組 SPF級(jí)雄性Wistar大鼠[合格證號(hào):SCXW(渝)2007-0003]40只,平均體質(zhì)量(160± 20)g,重慶鑫騰生物公司提供,許可證號(hào):SCXW(渝) 2007-0008。隨機(jī)分為對(duì)照組(A組)、COPD模型組(B組)、低劑量ICS/LABA(舒利迭,葛蘭素史克公司提供)組(C組)、高劑量ICS/LABA(同上)組(D組),每組10只。

參照宋一平等[4-5]所用方法復(fù)制動(dòng)物模型,并進(jìn)行改良:B組大鼠在實(shí)驗(yàn)第1天、第14天,用2%戊巴比妥鈉(25 mg·kg-1)腹腔內(nèi)注射麻醉,用1 mL注射器穿刺氣管,注射LPS[200 μg·(200 μL)-1](美國(guó)Sigma公司)。分別在實(shí)驗(yàn)第2～13天、第15～45天,每天將大鼠放入容積為60 L的自制密閉玻璃染毒箱(30 cm×40 cm×50 cm)內(nèi)被動(dòng)吸煙,方法為:將點(diǎn)燃的香煙(天下秀,川渝中煙工業(yè)公司,焦油量10 mg,煙氣煙堿量0.8 mg)通過(guò)玻璃孔將煙霧注入煙熏箱內(nèi),保持煙霧濃度5%,每天2次,每次15支,持續(xù)1 h,每組間隔4 h。C、D組造模方法同B組,第16天煙熏前1 h進(jìn)行干預(yù),每天1次,C組以舒利迭(50 μg/250 μg)滴鼻;D組以舒利迭(50 μg/500 μg)滴鼻。將沙美特羅替卡松粉吸入劑(舒利迭)兩噴溶于0.9%氯化鈉溶液1.7 mL+聚山梨酯-80 0.3 mL,每只0.3 mL,每天2次。據(jù)文獻(xiàn)[6-7]報(bào)道,此劑量和成人每天1 mg相符;A組:各干預(yù)因素均以相同劑量0.9%氯化鈉溶液代替,玻璃箱內(nèi)吸入空氣。

1.2 大鼠肺功能測(cè)定 實(shí)驗(yàn)第46天,以2%戊巴比妥鈉(25 mg·kg-1)麻醉大鼠,應(yīng)用動(dòng)物肺功能檢測(cè)儀[7](美國(guó)Buxco),測(cè)定呼氣峰流量(peak expiratory flow,PEF)、第0.3秒用力呼氣容積(forced expiratory volume in 0.3 second,FEV0.3)、FEV0.3/用力肺活量(forced vital capacity,FVC)。

1.3 肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中細(xì)胞分類與計(jì)數(shù)及TGF-β1檢測(cè) 以0.01 mol·L-1磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered solution,PBS)進(jìn)行右心室灌注,開(kāi)胸夾閉右支氣管,以0.9%氯化鈉溶液3 mL灌洗左肺,反復(fù)3次并經(jīng)紗布過(guò)濾,總回收量約7 mL,回收率75%～80%。取BALF4 mL,4℃1 200 r·min-1離心10 min,棄去上清液。離心沉淀細(xì)胞成分,用D-Hank` s液沖洗3次,制成細(xì)胞懸液。錐蟲(chóng)藍(lán)染色計(jì)算細(xì)胞活性,活細(xì)胞率＞90%。取細(xì)胞懸液,在細(xì)胞計(jì)數(shù)板上計(jì)數(shù)。沉淀涂片,Wringt染色,高倍鏡下計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞進(jìn)行分類;剩下BALF采用酶聯(lián)免疫法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA,材料由美國(guó)R&D公司提供)檢測(cè)TGF-β1濃度,按照說(shuō)明書(shū)操作。

1.4 肺組織標(biāo)本和形態(tài)定量分析 取右肺中葉,多聚甲醛固定,石蠟包埋,切片,蘇木精-伊紅(hematoxylineosinstaining,HE)染色。每只大鼠切片隨機(jī)選取3個(gè)較完整的氣道(短長(zhǎng)徑比＞0.5)。測(cè)量管壁總面積(total bronchial wall area,WAt)=氣道外壁所圍面積(the outer adventitial area,AO)-管壁內(nèi)側(cè)面積(the inside adventitial area,Ai);平滑肌層面積(smooth muscle area,WAsm)=平滑肌層外側(cè)面積(the outer smooth muscle area,Asmo)-平滑肌層內(nèi)側(cè)面積(the inside smooth muscle area,Asmi),以管壁內(nèi)周長(zhǎng)(internal perimeter, Pi)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化,結(jié)果以單位長(zhǎng)度的管壁厚度(Wat/Pbm,μm2·μm-1)和單位長(zhǎng)度的平滑肌層厚度(Wasm/Pi,μm2·μm-1)表示。

1.5 大鼠肺組織SLPI和MMP-9檢測(cè) 采用10%多聚甲醛固定大鼠右肺中葉,石蠟切片,常規(guī)脫蠟,按MMP-9(北京博奧森生物技術(shù)公司)、SLPI(美國(guó)Bioworld Technology公司)免疫組化檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)操作,抗體濃度均為1∶100。每只大鼠取切片2張,應(yīng)用HPIAS-1000病理圖文分析系統(tǒng)測(cè)定每張切片8個(gè)視野的陽(yáng)性系數(shù)。陽(yáng)性系數(shù)的計(jì)算參見(jiàn)文獻(xiàn)[8]。

1.6 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)法檢測(cè)大鼠肺組織MMP-9mRNA表達(dá) 取肺組織標(biāo)本30 mg,按照Trizol RNA提取試劑盒(美國(guó)Invitrogen公司)說(shuō)明提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄成cDNA(美國(guó)MBI公司逆轉(zhuǎn)錄試劑盒)。以SYBR Green I作為熒光標(biāo)志物,在熒光實(shí)時(shí)定量PCR儀(ABI 7500型)上進(jìn)行PCR反應(yīng)。根據(jù)GeneBank的cDNA序列設(shè)計(jì)引物,以β-肌動(dòng)蛋白為內(nèi)參照物(上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司)。MMP-9上游引物:5'-CATCTGGGGATTGAACTCAG-3',下游引物:5'-GTGGTGTCCTCCGATGTAAG-3',擴(kuò)增長(zhǎng)度為235 bp。β-肌動(dòng)蛋白上游引物: 5'-CCTAGACTTCGAGCAAGAGA-3',下游引物:5'-AGAGGTCTTTACGGATGTCA-3',擴(kuò)增長(zhǎng)度為221 bp。通過(guò)融解曲線和電泳結(jié)果確定目的條帶并分析,△△Ct法進(jìn)行目的基因的相對(duì)定量。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SAS10.0版軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,組間比較采用F檢驗(yàn),多重比較采用SNK法,指標(biāo)間相關(guān)性檢驗(yàn)采用線性相關(guān)分析,以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠一般情況及病理學(xué)觀察 B組大鼠呼吸急促,口唇發(fā)紺,仰臥位呼吸;干預(yù)組有不同程度好轉(zhuǎn)。制作模型時(shí)共死亡6只。光鏡下觀察,A組肺組織無(wú)異常改變;B組各級(jí)支氣管明顯狹窄,氣管管壁及平滑肌增厚,黏膜下成纖維細(xì)胞增生,杯狀細(xì)胞顯著增多,間質(zhì)內(nèi)有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),肺泡壁破壞,肺泡腔擴(kuò)大,部分破裂融合形成肺大泡;C、D組氣管增厚程度和肺大泡數(shù)目較模型組均有所減輕,炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減少。

2.2 大鼠肺功能結(jié)果 與A組比較,B組大鼠PEF、 FEV0.3和FEV0.3/FVC顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。C、D組大鼠PEF、FEV0.3及FEV0.3/FVC均明顯高于模型組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＜0.05);干預(yù)組間比較,D組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),見(jiàn)表1。

2.3 BALF中細(xì)胞總數(shù)及分類、TGF-β1表達(dá)水平 B組BALF中細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)和單核巨噬細(xì)胞數(shù)及TGF-β1濃度明顯高于A組(P＜0.05);干預(yù)組細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)和單核巨噬細(xì)胞數(shù)及TGF-β1濃度明顯低于B組(P＜0.05);干預(yù)組間比較,D組差異明顯(P＜0.05)。見(jiàn)表2。

2.4 各組大鼠支氣管形態(tài)學(xué)比較 B組小支氣管管壁、平滑肌厚度明顯高于A組(P＜0.05);干預(yù)組則顯著低于B組(P＜0.05);干預(yù)組間比較,D組降低明顯(P＜0.05),見(jiàn)表3。

2.5 MMP-9在大鼠支氣管肺組織的免疫組化表達(dá) MMP-9在肺泡上皮細(xì)胞等免疫染色呈強(qiáng)陽(yáng)性,以細(xì)胞質(zhì)著色為主。B組MMP-9呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá);A組MMP-9呈弱陽(yáng)性表達(dá),二組陽(yáng)性系數(shù)差異明顯(P＜0.05);干預(yù)組MMP-9呈中度陽(yáng)性表達(dá),陽(yáng)性系數(shù)與模型組的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);干預(yù)組間比較,D組差異明顯(P＜0.05),見(jiàn)表3。

2.6 SLPI在大鼠支氣管肺組織的免疫組化表達(dá) SLPI在氣管、支氣管上皮細(xì)胞免疫染色呈陽(yáng)性,僅在管腔側(cè)細(xì)胞膜有著色。A組SLPI呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá);B組為弱陽(yáng)性表達(dá),二組的陽(yáng)性系數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);干預(yù)組比模型組SLPI表達(dá)明顯增強(qiáng),陽(yáng)性系數(shù)與模型組的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);干預(yù)組間比較,D組差異明顯(P＜0.05),見(jiàn)表3。

表1 4組大鼠肺功能檢測(cè)值Tab.1 Lung function in four groups of rats ±s

表1 4組大鼠肺功能檢測(cè)值Tab.1 Lung function in four groups of rats ±s

與B組比較,*1P＜0.05;與A組比較,*2P＜0.05;與C組比較,*3P＜0.05Compared with group A,*1P＜0.05;Compared with group B,*2P＜0.05;Compared with group C,*3P＜0.05

組別大鼠/只PEF/(mL·s)FEV0.3/mLFEV0.3-1/FVC/% A組1041.88±3.26*14.78±0.54*189.63±5.42*1B組721.50±1.78*23.71±0.58*265.27±6.58*2C組930.62±2.31*1*24.43±0.47*1*280.00±4.56*1*2D組833.13±2.62*1*2*34.39±0.50*1*2*382.34±5.07*1*2*3

表2 4組大鼠BALF細(xì)胞計(jì)數(shù)和TGF-β1濃度Tab.2 Comparison of BAL cell count and TGF-β1among four groups of rats ±s

表2 4組大鼠BALF細(xì)胞計(jì)數(shù)和TGF-β1濃度Tab.2 Comparison of BAL cell count and TGF-β1among four groups of rats ±s

與B組比較,*1P＜0.05;與A組比較,*2P＜0.05;與C組比較,*3P＜0.05Compared with group B,*2P＜0.05;Compared with group A,*1P＜0.05;Compared with group C,*3P＜0.05

組別大鼠/只細(xì)胞總數(shù)/(×108·L-1)中性粒細(xì)胞淋巴細(xì)胞單核巨噬細(xì)胞% TGF-β1濃度/(μg·L-1) A組109.35±0.62*118.42±6.37*115.79±3.56*174.63±6.71*152.02±4.37*1B組714.82±0.96*230.17±9.28*212.36±4.27*255.87±5.49*2148.39±4.97*2C組912.51±1.21*1*226.72±5.62*1*213.58±3.04*1*261.49±7.03*1*2118.59±5.28*1*2D組810.63±1.07*1*2*322.64±7.48*1*2*314.29±4.01*1*2*365.72±5.29*1*2*382.06±4.43*2*3

表3 4組大鼠支氣管形態(tài)學(xué)、肺組織SLPI、MMP-9及其mRNA相對(duì)含量比較Tab.3 Comparison of bronchial morphology,SLPI,MMP-9 in lung and the relative content of MMP-9 mRNA among four groups of rats ±s

表3 4組大鼠支氣管形態(tài)學(xué)、肺組織SLPI、MMP-9及其mRNA相對(duì)含量比較Tab.3 Comparison of bronchial morphology,SLPI,MMP-9 in lung and the relative content of MMP-9 mRNA among four groups of rats ±s

與B組比較,*1P＜0.05;與A組比較,*2P＜0.05;與C組比較,*3P＜0.05Compared with group B,*2P＜0.05;Compared with group A,*1P＜0.05;Compared with group C,*3P＜0.05

組別大鼠/只管壁厚度平滑肌層厚度(μm2·μm-1) SLPI陽(yáng)性系數(shù)MMP-9陽(yáng)性系數(shù)MMP-9mRNA相對(duì)含量A組1017.6±2.6*111.8±4.3*13.91±0.32*11.80±0.19*11.498±6.370*1B組736.3±5.8*223.7±3.7*21.12±0.19*23.82±0.31*212.440±9.940*2C組927.4±6.1*1*218.5±4.1*1*22.11±0.26*1*23.09±0.28*1*29.616±10.560*1*2D組824.7±7.3*1*2*314.3±5.1*1*2*32.95±0.28*1*2*32.41±0.22*1*2*36.156±8.860*1*2*3

2.7 大鼠肺組織中MMP-9mRNA的表達(dá) 與A組比較,B組大鼠肺組織中MMP-9mRNA表達(dá)量明顯增高(P＜0.05);干預(yù)組大鼠肺組織中MMP-9mRNA表達(dá)量明顯比模型組降低(P＜0.05);干預(yù)組間比較,D組差異明顯(P＜0.05),見(jiàn)表3。

3 討論

香煙及反復(fù)呼吸道感染是COPD發(fā)生、發(fā)展的主要危險(xiǎn)因素,筆者采用煙熏加氣管內(nèi)注射LPS法復(fù)制COPD模型,結(jié)果模型組大鼠出現(xiàn)呼吸急促,口唇四肢發(fā)紺,肺功能FEV0.3/FVC明顯降低,光鏡下支氣管明顯狹窄,支氣管平滑肌增厚,BALF中有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),肺泡間隔斷裂,部分融合成肺大泡,說(shuō)明模型復(fù)制成功[9]。

本研究發(fā)現(xiàn),模型組大鼠TGF-β1、MMP-9的表達(dá)明顯增高,而SLPI水平顯著降低(P＜0.05);且MMP-9水平與肺功能FEV0.3/FVC改變呈負(fù)相關(guān)(r=0.861 3,P＜0.01),結(jié)果與多數(shù)學(xué)者報(bào)道一致[10],而SLPI水平則相反(r=0.832 1,P＜0.01),提示上述細(xì)胞因子在COPD氣道重塑的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。TGF-β1不僅促使成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化,增加纖維黏蛋白和膠原的合成,并抑制膠原酶和蛋白酶的產(chǎn)生以減少膠原降解,導(dǎo)致氣道纖維化及重塑。研究發(fā)現(xiàn), TGF-β1升高程度與病情嚴(yán)重性呈正相關(guān),并上調(diào)轉(zhuǎn)錄因子Ets-1刺激MMP-9表達(dá)和分泌增加,加重氣道重塑。MMP-9作為蛋白水解酶,幾乎可降解所有的細(xì)胞外基質(zhì),COPD時(shí)使膠原的合成和降解失衡,導(dǎo)致肺基底膜結(jié)構(gòu)破壞,同時(shí)大量炎性細(xì)胞可穿透破壞的基底膜屏障進(jìn)入肺間質(zhì)和肺泡,釋放炎癥因子,使肺部炎癥遷延不愈,最終加重氣道重塑。SLPI是氣道內(nèi)重要的保護(hù)基質(zhì),具有抗炎、抗真菌活性,并能降低NF-κB與基質(zhì)金屬蛋白酶的活性,中斷炎癥循環(huán),從而減輕氣道重塑。

COPD是一種伴有組織損傷與修復(fù)的慢性炎癥,慢性炎癥在COPD發(fā)病機(jī)制中起核心作用。目前認(rèn)為,氣道重塑的形成與小氣道慢性炎癥有密切的關(guān)系,這就提示抗炎類藥物可以用于防止氣道重塑。舒利迭是沙美特羅和丙酸氟替卡松的復(fù)方制劑,可作用于氣道炎癥及重塑的不同環(huán)節(jié),不僅能抑制多種炎性細(xì)胞的活化及炎性因子的生成,并產(chǎn)生至少持續(xù)12 h的支氣管擴(kuò)張作用[11],還可降低血管的通透性,增強(qiáng)黏液纖毛的清除能力,預(yù)防氣道重塑。并且在某些環(huán)節(jié)上更具有協(xié)同作用,丙酸氟替卡松能減少β2受體的脫敏和耐藥性,沙美特羅通過(guò)使糖皮質(zhì)激素受體磷酸化,使受體對(duì)類固醇的刺激更敏感,進(jìn)而增強(qiáng)抗炎、減輕氣道重塑效能。

本研究結(jié)果顯示,經(jīng)舒利迭干預(yù)后,C、D組大鼠肺組織炎性細(xì)胞數(shù)、小支氣管管壁及平滑肌厚度明顯減少,TGF-β1、MMP-9的表達(dá)顯著下降,而SLPI水平明顯升高,說(shuō)明ICS/LABA對(duì)COPD肺組織破壞及氣道重塑有很好干預(yù)作用。但C、D兩組相比,差異明顯(P＜0.05),說(shuō)明不同劑量療效不同,高劑量ICS/LABA優(yōu)于低劑量,提示高劑量ICS/LABA不但能更好地改善肺功能、抑制肺部炎癥遞質(zhì)的釋放,還可改善氣道重塑和肺纖維化程度,其機(jī)制可能與抑制支氣管肺組織的炎癥水平,進(jìn)而降低TGF-β1、MMP-9的表達(dá),并提高SLPI的水平有關(guān)。ICS/LABA已應(yīng)用于臨床,本實(shí)驗(yàn)為其抗氣道重塑作用提供了新依據(jù),但確切療效仍需大量臨床試驗(yàn)予以證實(shí)。

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DOI 10.3870/yydb.2014.03.012

Effects of Salmeterol/fluticasone Inhalant on the Airway Remodeling of Chronic Obstructive Pulmonary Disease in Rats

JIN Ming-Zhe,XIONG Ying
(Department of Respiratory Medicine,the Affiliated Hospital of Luzhou Medical College,Luzhou 646000,China)

Objective To evaluate the effect of different doses of salmeterol/fluticasone(LABA/ICS)inhalant on the airway remodeling of chronic obstructive pulmonary disease(COPD)in rats and its possible mechanism.MethodsForty Wistar rats were divided into four groups:the control(group A),the model(group B),the low dose of LABA/ICS(groups C),and the high dose of LABA/ICS(group D).Rats were exposed to cigarette smoking daily and intratracheal instillation of lipopolysaccharide (LPS)twice daily to establish the COPD model.LABA/ICS was inhaled to the rats of COPD models for 30 days in groups of C and D.The pathological changes in lung were observed and spirometry function was detected.The expression of TGF-β1in BALF was tested by ELISA.The expression of MMP-9 and SLPI in lung was determined by immunohistochemistry.The expression of MMP-9 mRNA in bronchi and lung was assessed by RT-PCR.ResultsThe inflammatory cells infiltration,alveolar wall damage,bullae formation in lung and thickening of trachea wall and smooth muscle were found in group B,but less obvious in group C and D.Compared to group A,group B had higher expression of MMP-9 and TGF-β1level,but lower SLPI(P＜0.05).After intervention with ICS/LABA,both MMP-9 mRNA expression and TGF-β1level were dramatically decreased,but SLPI was increased in group C and D compared with group B(P＜0.05).The TGF-β1,MMP-9 and its mRNA in group D[(82.06±4.43),(2.41±0.22),(6.156± 8.86)]were lower than group C[(118.59±5.28),(3.09±0.28),(9.616±10.56)],the SLPI(2.95±0.28)was much higher than group C(2.11±0.26).ConclusionICS/LABA inhibits the airway wall remodeling of the COPD rats in a dose-dependent manner,which may be associated with upregulation of TGF-β1and MMP-9 expression and elevation of SLPI.

Salmeterol/fluticasone inhalant;Lung diseases,obstructive,chronic;Transforming growth factor beta1; Matrix metalloproteinase-9;Secretory leukocyte proteinase inhibitor

R974.3;R965

A

1004-0781(2014)03-0318-05

2013-05-02

2013-06-25

金明哲(1988-),男,吉林梅河口人,醫(yī)師,碩士,主要研究COPD的基礎(chǔ)與臨床。E-mail：378420578@qq.com。