任冰如,呂 寒,陳 劍,梁呈元,吳菊蘭,李維林

〔江蘇省·中國(guó)科學(xué)院植物研究所(南京中山植物園)江蘇省藥用植物研究開(kāi)發(fā)中心江蘇省抗糖尿病藥物篩選技術(shù)服務(wù)中心,江蘇南京210014〕

紅鳳菜新鮮莖葉中總黃酮提取物的LC-MS分析

任冰如,呂 寒,陳 劍,梁呈元,吳菊蘭,李維林①

〔江蘇省·中國(guó)科學(xué)院植物研究所(南京中山植物園)江蘇省藥用植物研究開(kāi)發(fā)中心江蘇省抗糖尿病藥物篩選技術(shù)服務(wù)中心,江蘇南京210014〕

紅鳳菜;LC-MS;總黃酮;槲皮素;山柰酚

紅鳳菜(Gynura bicolor DC.)為菊科(Compositae)菊三七屬(Gynura Cass.)植物,別名血皮菜、觀(guān)音菜、觀(guān)音莧、紫背天葵等,主要分布于中國(guó)南方各地,全草均可入藥[1];也可作為蔬菜食用,在國(guó)內(nèi)多個(gè)地區(qū)均有栽培和銷(xiāo)售。目前已知紅鳳菜含有黃酮類(lèi)、酚性酸類(lèi)、萜類(lèi)、甾醇類(lèi)、脂肪酸類(lèi)、生物堿類(lèi)及花青素類(lèi)等[2-7]成分。由于黃酮類(lèi)成分多具有保護(hù)心血管、抗腫瘤、抗糖尿病、抗氧化、抗炎和抗病毒等作用[8],因此對(duì)紅鳳菜中黃酮類(lèi)成分的研究具有深度開(kāi)發(fā)價(jià)值。

作者采用“乙醇提取-大孔樹(shù)脂柱層析-聚酰胺柱層析-重結(jié)晶”方法從紅鳳菜新鮮莖葉中提取獲得不同分離階段的黃酮類(lèi)化合物,并采用LC-MS技術(shù)結(jié)合薄層層析對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)分析,考察提取分離過(guò)程中黃酮類(lèi)化合物的富集和純化狀況,以期為紅鳳菜中黃酮類(lèi)化合物高效提取純化工藝的建立提供基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

供試紅鳳菜取自江蘇省·中國(guó)科學(xué)院植物研究所實(shí)驗(yàn)苗圃,于2003年7月引自重慶,憑證標(biāo)本保存于江蘇省·中國(guó)科學(xué)院植物研究所標(biāo)本館(NAS),憑證標(biāo)本號(hào)為0648614。

使用的乙腈(美國(guó)Fisher公司)和甲酸(美國(guó)Tedia公司)均為色譜純級(jí);采用Milli-Q純水儀(美國(guó)Millipore公司)制備超純水。

1.2 方法

1.2.1 對(duì)照品溶液制備 參照陳劍[5]的方法從紅鳳菜中分離制得黃酮苷類(lèi)對(duì)照品蘆丁(rutin)、異槲皮苷(isoquercitrin)和紫云英苷(astragalin)以及有機(jī)酸類(lèi)對(duì)照品異綠原酸A (isochlorogenic acid A)和異綠原酸C(isochlorogenic acid C),上述5個(gè)對(duì)照品均通過(guò)NMR、MS和文獻(xiàn)比對(duì)等進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。分別取各對(duì)照品適量,用甲醇配成質(zhì)量濃度0.1 mg·mL-1的對(duì)照品溶液。

1.2.2 總黃酮成分的分離及樣品溶液的制備 取紅鳳菜新鮮莖葉5 kg,用20 L體積分?jǐn)?shù)95%乙醇室溫冷浸提取7 d,提取液減壓濃縮并冷沉去雜。上清液上NKA大孔樹(shù)脂柱,依次用2倍體積的水以及體積分?jǐn)?shù)30%、50%、70%和95%乙醇進(jìn)行梯度洗脫;以BAW〔V(正丁醇)：V(乙酸)：V(水)=4：1：5〕為展開(kāi)劑、質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)1%A lCl3為顯色劑對(duì)洗脫液進(jìn)行聚酰胺薄層層析;合并具有黃酮反應(yīng)的洗脫液,減壓濃縮至無(wú)醇味。取一部分洗脫液在沸水浴上蒸干,得到樣品Ⅰ;另一部分洗脫液進(jìn)行聚酰胺柱層析,依次用2倍體積的水以及體積分?jǐn)?shù)30%、50%、70%和95%乙醇梯度洗脫,收集洗脫液,每流份為1/10柱床體積,減壓濃縮后室溫放置,至黃酮結(jié)晶析出后,過(guò)濾,將濾液合并后進(jìn)行干燥,得到樣品Ⅱ,同時(shí)得到不同流份的結(jié)晶即樣品Ⅲ和樣品Ⅳ。各樣品均取5 mg,分別用體積分?jǐn)?shù)80%甲醇溶解并定容至10mL,用孔徑0.22μm微孔濾膜過(guò)濾,即為供試樣品溶液。

1.2.3 LC-MS檢測(cè)條件 參照文獻(xiàn)[5]、使用Agilent 6530 Accurate-Mass Q-TOF LC-MS超高效液相-精確飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國(guó)Agilent公司)進(jìn)行LC-MS分析。

色譜分析條件:AgilentZorbaxSB-C18色譜柱(100mm× 4.6mm,1.8μm,美國(guó)Agilent公司);流速0.5 mL·min-1,柱溫25℃,進(jìn)樣量5.0μL。流動(dòng)相A為乙腈、流動(dòng)相B為體積分?jǐn)?shù)0.1%甲酸溶液,梯度洗脫過(guò)程:0～30 m in,5%～40%A; 30～40 min,40%～100%A;40～45 min,100%～5%A。紫外采集數(shù)據(jù)范圍為200～400 nm,檢測(cè)波長(zhǎng)360 nm。

質(zhì)譜分析條件:ESI負(fù)離子模式,噴霧氣壓力50 psig,干燥氣流速10 L·min-1,干燥氣溫度350℃,毛細(xì)管電壓3 500 V;碎裂電壓175 V;掃描范圍(m/z)50～1 000。

表1 紅鳳菜新鮮莖葉總黃酮提取物的LC-MS分析結(jié)果Table 1 LC-MS analysis result of total flavonoids extracts from fresh stem and leaf of Gynura bicolor DC.

2 結(jié)果和分析

2.1 紅鳳菜總黃酮提取物的組成成分解析

紅鳳菜新鮮莖葉總黃酮提取物的LC-MS檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1,表中的化合物名稱(chēng)根據(jù)對(duì)照品和樣品的LC-MS圖譜、保留時(shí)間(Rt)和負(fù)離子模式下一級(jí)質(zhì)譜的分子離子峰[M-H]-并結(jié)合文獻(xiàn)[4-5]中的數(shù)據(jù)確定。

根據(jù)對(duì)照品的質(zhì)譜信息,鑒定出1號(hào)峰(Rt17.64 min, [M-H]-m/z609)為蘆丁,3號(hào)峰(Rt18.60 min,[M-H]-m/z 463)為異槲皮苷,6號(hào)峰(Rt 20.35 min,[M-H]-m/z447)為紫云英苷。因作者采用的LC-MS檢測(cè)條件與文獻(xiàn)[5]完全一致,故參照文獻(xiàn)[5]確定樣品中其余黃酮苷類(lèi)成分分別為:3號(hào)峰(Rt18.67 m in,[M-H]-m/z 593)為山柰酚-3-O-洋槐苷(kaempferol-3-O-rubinobioside),4號(hào)峰(Rt19.31 min,[M-H]-m/z593)為山柰酚-3-O-蕓香苷(kaempferol-3-O-rutinoside),5號(hào)峰(Rt19.72min,[M-H]-m/z447)為山柰酚-3-O-半乳糖苷(kaempferol-3-O-galactoside)。

表1分析結(jié)果顯示:紅鳳菜中的黃酮苷多以槲皮素或山柰酚為苷元,其連接的糖包括六碳醛糖〔如D-葡萄糖(D-glucose)或D-半乳糖(D-galactose)〕和甲基五碳糖〔如L-鼠李糖(L-rhamnose)〕。鑒于樣品Ⅰ和樣品Ⅱ的1號(hào)峰呈不對(duì)稱(chēng)肩峰,故推測(cè)1號(hào)峰(Rt17.64 min,[M-H]-m/z609)除含蘆丁外,還含有槲皮素-3-O-洋槐苷(quercetin-3-O-rubinobioside); 2號(hào)峰(Rt 18.35 min,[M-H]-m/z463)和與其相鄰的異槲皮苷具有相同的分子量,故推測(cè)其為金絲桃苷(hyperoside)。

2.2 紅鳳菜總黃酮提取物的分離效果分析

由表1還可見(jiàn):樣品Ⅰ除了具有6組黃酮苷吸收峰外,還有3個(gè)包含4種成分的雜質(zhì)峰(即7～9號(hào)峰),對(duì)照文獻(xiàn)[5],確定7號(hào)峰(Rt 20.81 min,[M-H]-m/z515)為異綠原酸A (isochlorogenic acid A),8號(hào)峰(Rt 21.66 min,[M-H]-m/z 515)為異綠原酸C(isochlorogenic acid C),另外2種成分尚未能確定。樣品Ⅰ經(jīng)過(guò)聚酰胺柱層析得到的樣品Ⅱ中不含有7～9號(hào)雜質(zhì)峰,且保留了6個(gè)黃酮苷吸收峰,說(shuō)明聚酰胺柱層析可有效純化紅鳳菜的黃酮苷提取物。

樣品Ⅲ含有1號(hào)峰(Rt 17.64 min,[M-H]-m/z 609)、3號(hào)峰(Rt 18.67 min,[M-H]-m/z 593)和4號(hào)峰(Rt 19.31min,[M-H]-m/z 593)3個(gè)峰信號(hào);樣品Ⅳ含有2號(hào)峰(Rt 18.35min,[M-H]-m/z463)、3號(hào)峰(Rt18.60 min,[M-H]-m/z463)、5號(hào)峰(Rt 19.72 min,[M-H]-m/z447)和6號(hào)峰(Rt20.35 m in,[M-H]-m/z447)4個(gè)峰信號(hào)。與樣品Ⅰ不同的是,樣品Ⅲ中的1號(hào)峰為對(duì)稱(chēng)的峰信號(hào),3號(hào)峰只有1個(gè)分子離子峰信號(hào)([M-H]-m/z 593),而樣品Ⅳ中的3號(hào)峰也只有1個(gè)分子離子峰信號(hào)([M-H]-m/z463)。以上結(jié)果說(shuō)明,采用聚酰胺柱層析結(jié)合重結(jié)晶方法可使紅鳳菜中的不同黃酮苷成分得到較好的分離。

3 討 論

在上述獲得的黃酮苷成分中,槲皮素-3-O-洋槐苷和槲皮素-3-O-半乳糖苷在紅鳳菜化學(xué)成分的相關(guān)研究中未見(jiàn)報(bào)道,造成這一結(jié)果的原因除與分離手段不同有關(guān)外,還與供試樣品的性質(zhì)不同有關(guān)。前人的研究多采用紅鳳菜干燥葉片,而作者采用的是紅鳳菜新鮮莖葉,采用新鮮植物樣品能更全面地保留原有的化學(xué)成分。雖然如此,還應(yīng)采用其他分析手段對(duì)紅鳳菜中上述2種成分進(jìn)行進(jìn)一步的驗(yàn)證。

此外,從紅鳳菜新鮮莖葉中分離或檢測(cè)到的黃酮苷成分主要以槲皮素或山柰酚為苷元,這與他人的研究結(jié)果[2-5]一致。因此,在測(cè)定紅鳳菜總黃酮成分時(shí)建議將樣品中的黃酮苷進(jìn)行酸水解,并以槲皮素和山柰酚為對(duì)照品采用高效液相法進(jìn)行定量測(cè)定,以獲得較準(zhǔn)確的結(jié)果。

采用“體積分?jǐn)?shù)95%乙醇提取-NKA大孔樹(shù)脂柱層析-聚酰胺柱層析-重結(jié)晶”的工藝流程可有效地從紅鳳菜新鮮莖葉中分離獲得總黃酮,該工藝能耗低、操作簡(jiǎn)便、產(chǎn)品純度高,可用于工廠(chǎng)化生產(chǎn)。

[1] 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典:上冊(cè)[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1977:988-989.

[2] 卓 敏,呂 寒,任冰如,等.紅鳳菜化學(xué)成分研究[J].中草藥,2008,39(1):30-32.

[3] 呂 寒,裴詠萍,李維林.紅鳳菜中黃酮類(lèi)化學(xué)成分的研究[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué),2010,27(7):613-614.

[4] 呂 寒,裴詠萍,李維林,等.紅鳳菜中黃酮類(lèi)化合物的高效液相色譜與多級(jí)質(zhì)譜聯(lián)用分析[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2011,22 (11):2582-2583.

[5] 陳 劍.紅鳳菜、白子菜的降血糖活性成分研究[D].南京:中國(guó)藥科大學(xué)中藥學(xué)院,2013:156-179.

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[8] 吳立軍.天然藥物化學(xué)[M].4版.北京:人民衛(wèi)生出版社, 2004:173-216.

(責(zé)任編輯:佟金鳳)

不同種植模式對(duì)滇龍膽草總裂環(huán)烯醚萜苷含量的影響

李遠(yuǎn)菊1,2,沈 濤3,張 霽1,趙艷麗1,王元忠1,①

(1.云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院藥用植物研究所,云南昆明650200;2.云南中醫(yī)學(xué)院中藥學(xué)院,云南昆明650500; 3.玉溪師范學(xué)院資源環(huán)境學(xué)院,云南玉溪653100)

Abstract:Effect of different planting patterns on total secoiridoid glycoside content in different parts of Gentiana rigescens Franch.ex Hemsl.was researched.The results show that different planting patterns have significant or extremely significant effects on total secoiridoid glycoside content in root,stem and leaf of G.rigescens.Total secoiridoid glycoside content in root is the highest under planting pattern of G.rigescens-Alnus nepalensis D.Don and is the lowest under p lanting pattern of G.rigescens-Chaenomeles sinensis(Thouin)Koehne,that in stem is the highest under single p lanting pattern of G.rigescens and is the lowest under planting pattern of G.rigescens-Juglans regia Linn.,and that in leaf is the highest under planting pattern of G.rigescens-Cunninghamia lanceolata(Lamb.)Hook.and is the lowest under single planting pattern of G.rigescens.

關(guān)鍵詞:滇龍膽草;復(fù)合種植;總裂環(huán)烯醚萜苷含量

Key words:Gentiana rigescens Franch.ex Hemsl.;complex planting;total secoiridoid glycoside content

DOI:10.3969/j.issn.1674-7895.2014.03.16

滇龍膽草(Gentiana rigescens Franch.ex Hemsl.)為龍膽科(Gentianaceae)龍膽屬(Gentiana Linn.)多年生草本植物,主要分布于云南、四川、貴州、湖南和廣西等地,生長(zhǎng)于山坡、草地、灌叢、林下及山谷中[1]。該種為傳統(tǒng)中藥龍膽的基源植物,其干燥根及根莖均可入藥,具有清熱燥濕和瀉肝膽火的功效[2]。因其資源需求量逐年增加,滇龍膽草的人工種植越來(lái)越普遍,并出現(xiàn)了多種種植模式[3]。目前滇龍膽草主要種植模式有單一種植和林藥復(fù)合種植,常見(jiàn)的有滇龍膽草與茶樹(shù)〔Camellia sinensis(Linn.)Kuntze〕、桉樹(shù)(Eucalyptus robusta Smith)、木瓜〔Chaenomeles sinensis(Thouin)Koehne〕和旱冬瓜(Alnus nepalensis D.Don)的復(fù)合種植模式[4]。與傳統(tǒng)林業(yè)系統(tǒng)相比,林藥復(fù)合系統(tǒng)具有良好的生態(tài)效益、社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益[5]。周幸[6]的研究結(jié)果表明:在太行山山地林藥復(fù)合種植模式中,分布于土壤表層的藥用植物淺根系對(duì)表層土有加筋固著作用,可減少水土流失。Sujatha等[7]認(rèn)為:在檳榔(Areca catechu Linn.)園間作芳香藥用植物有助于提高其產(chǎn)量并增加單位面積收入。目前有關(guān)林藥復(fù)合種植的研究主要集中于其生態(tài)效益和經(jīng)濟(jì)效益,對(duì)復(fù)合種植模式下藥用植物有效成分變化的研究尚不多見(jiàn)[8-9]。

裂環(huán)烯醚萜苷是龍膽科藥用植物的特征性成分,主要有龍膽苦苷、獐牙菜苦苷和獐牙菜苷等[10-11],是龍膽藥材的主要藥效成分[12-14]。作者以滇龍膽草中總裂環(huán)烯醚萜苷含量為評(píng)價(jià)指標(biāo),分析不同種植模式對(duì)其不同部位總裂環(huán)烯醚萜苷含量的影響,為滇龍膽草復(fù)合種植模式的實(shí)施提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料、儀器和試劑

1.1.1 材料 供試樣品于2012年10月采集自云南臨滄滇龍膽栽培樣地,所有樣品均栽培2 a。共設(shè)置8種種植模式,包括單一種植以及滇龍膽草與茶樹(shù)、桉樹(shù)、木瓜、旱冬瓜、核桃(Juglans regia Linn.)、杉木〔Cunninghamia lanceolata(Lamb.)Hook.〕及木果柯〔Lithocarpus xylocarpus(Kurz)Markgraf〕復(fù)合種植。每種模式樣地面積48m2,樣地年平均氣溫18.5℃,年平均降水量1 158 mm。不同種植模式按五點(diǎn)取樣法進(jìn)行取樣,并由云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院藥用植物研究所張金渝研究員鑒定;取樣后每個(gè)樣地隨機(jī)選取10株,每株分成根、莖和葉片3部分,分別置于50℃條件下干燥至恒質(zhì)量,粉碎后過(guò)100目篩,備用。

1.1.2 儀器與試劑 UV-2550型紫外分光光度計(jì)(日本島津公司),SY3200-T型超聲波清洗器(上海聲源超聲波儀器設(shè)備有限公司),AR1140萬(wàn)分之一分析天平(美國(guó)奧豪斯公司), FW-100高速萬(wàn)能粉碎機(jī)(北京市永光明醫(yī)療儀器廠(chǎng)),UPTI-10L優(yōu)普超純水機(jī)(成都優(yōu)越科技有限公司)。龍膽苦苷對(duì)照品(批號(hào)110770-201314,純度96.9%)購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所;乙醇為分析醇,蒸餾水自制。

1.2 方法

1.2.1 對(duì)照品溶液及樣品溶液制備 稱(chēng)取龍膽苦苷對(duì)照品3.0mg,用體積分?jǐn)?shù)70%乙醇配制成60μg·mL-1對(duì)照品溶液。分別稱(chēng)取各種植模式下滇龍膽草不同部位樣品粉末25.0 mg,加入體積分?jǐn)?shù)70%乙醇10 mL,超聲(功率150W)提取40 m in,過(guò)濾;取濾液5.0 mL,用體積分?jǐn)?shù)70%乙醇定容至50 mL,即為質(zhì)量濃度250μg·mL-1的供試樣品溶液。

1.2.2 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 分別取上述龍膽苦苷對(duì)照品溶液和樣品溶液,以體積分?jǐn)?shù)70%乙醇為空白,在波長(zhǎng)190～400 nm范圍內(nèi)掃描,兩者均在波長(zhǎng)270 nm處有最大吸收峰,故選擇270 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

1.2.3 對(duì)照品線(xiàn)性關(guān)系考察 分別取對(duì)照品溶液1.0、3.0、4.0、5.0和8.0 mL,分別用體積分?jǐn)?shù)70%乙醇定容至10 mL,以體積分?jǐn)?shù)70%乙醇為空白,于波長(zhǎng)270 nm處測(cè)定吸光度值;以吸光度值(A)為縱坐標(biāo)、對(duì)照品質(zhì)量濃度(C)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn):A=0.023 08C-0.005 81(r=0.999 7),龍膽苦苷在質(zhì)量濃度6.0～48.0μg·mL-1范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

1.2.4 樣品溶液測(cè)定 取上述各樣品溶液,以體積分?jǐn)?shù)70%乙醇為空白,于波長(zhǎng)270 nm處測(cè)定吸光度值,平行測(cè)定3次,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中總裂環(huán)烯醚萜苷含量。

1.2.5 方法學(xué)考察 精密吸取質(zhì)量濃度24μg·mL-1的對(duì)照品溶液,測(cè)定波長(zhǎng)270 nm處的吸光度值,重復(fù)測(cè)定5次,RSD為0.15%,結(jié)果表明該方法精密度良好。

精密吸取同一樣品溶液,分別在0、1、2、3和4 h測(cè)定波長(zhǎng)270 nm處的吸光度值,總裂環(huán)烯醚萜苷含量分別為122.62、120.58、122.56、126.32和125.14μg·mg-1,平均含量為123.44μg·mg-1,RSD為1.85%,結(jié)果表明該樣品溶液穩(wěn)定性良好。

分別稱(chēng)取同一批樣品粉末6份,按上述方法制備樣品溶液并測(cè)定吸光度值,RSD為1.97%,結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

稱(chēng)取總裂環(huán)烯醚萜苷含量為119.856μg·mg-1的樣品粉末20.0 mg,稱(chēng)取6份,按上述方法制備樣品溶液;然后分別加入質(zhì)量濃度97.71μg·mL-1龍膽苦苷對(duì)照品溶液1.0、1.0、2.0、2.0、3.0和3.0 mL,用體積分?jǐn)?shù)70%乙醇定容至25 mL,于波長(zhǎng)270 nm處測(cè)定吸光度值并計(jì)算總裂環(huán)烯醚萜苷含量;樣品中龍膽苦苷的平均回收率達(dá)到98.83%,RSD為3.39%,表明該方法的回收率較高。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和分析

采用EXCEL 2003和SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析和多重比較分析。

2 結(jié)果和分析

不同種植模式下滇龍膽草不同部位總裂環(huán)烯醚萜苷含量見(jiàn)表1。

由表1可知:滇龍膽草根中的總裂環(huán)烯醚萜苷含量在滇龍膽草-木瓜種植模式下最低(82.03μg·mg-1),而在滇龍膽草-旱冬瓜和滇龍膽草-核桃種植模式下較高(分別為105.52和102.88μg·mg-1),前者與后2種復(fù)合種植模式間差異顯著(P＜0.05);在7種復(fù)合種植模式中,除滇龍膽草-木瓜種植模式外,在其他復(fù)合種植模式下根中總裂環(huán)烯醚萜苷含量均高于滇龍膽草單一種植模式。

莖中的總裂環(huán)烯醚萜苷含量在滇龍膽草單一種植模式下最高(80.46μg·mg-1),在滇龍膽草-旱冬瓜種植模式下也較高(73.66μg·mg-1),而在滇龍膽草-核桃種植模式下則最低(60.53μg·mg-1);在7種復(fù)合種植模式中,除滇龍膽草-旱冬瓜、滇龍膽草-木果柯種植模式外,在其余種植模式下莖中總裂環(huán)烯醚萜苷含量均顯著低于滇龍膽草單一種植。

表1 不同種植模式下滇龍膽草不同部位總裂環(huán)烯醚萜苷含量的比較(ˉX±SD,n=10)1)Table 1 Comparison of totalsecoiridoid glycoside content in different parts of Gentiana rigescens Franch.ex Hemsl.under different p lanting patterns(ˉX±SD,n=10)1)

葉片中總裂環(huán)烯醚萜苷含量在滇龍膽草-杉木種植模式下最高(109.26μg·mg-1),在滇龍膽草單一種植模式最低(僅為66.75μg·mg-1);在7種復(fù)合種植模式中,在滇龍膽草-杉木、滇龍膽草-木瓜、滇龍膽草-桉樹(shù)種植模式下葉片中總裂環(huán)烯醚萜苷含量顯著高于滇龍膽草單一種植模式,而在其他復(fù)合種植模式下葉片中總裂環(huán)烯醚萜苷含量與滇龍膽草單一種植模式差異不顯著。

由表1還可知:不同種植模式下滇龍膽草根、葉片和莖中總裂環(huán)烯醚萜苷平均含量依次降低,分別為92.97、84.45和68.44μg·mg-1。方差分析結(jié)果表明:種植模式對(duì)滇龍膽草根中總裂環(huán)烯醚萜苷含量有顯著影響,對(duì)莖和葉片中總裂環(huán)烯醚萜苷含量有極顯著影響(P＜0.01)。

3 討論和結(jié)論

藥用植物藥效成分的產(chǎn)生和積累受生態(tài)環(huán)境因素影響[15]。權(quán)秋梅等[16]的研究結(jié)果表明:不同生境中柔毛淫羊藿(Epimedium pubescens Maxim.)有效成分有差異,在光照強(qiáng)度較高的生境中其總黃酮和淫羊藿苷含量高于光照強(qiáng)度較低的生境。曹建華等[17]認(rèn)為:適宜的間作復(fù)合生態(tài)系統(tǒng)可以改善生態(tài)環(huán)境小氣候。因而,推測(cè)不同種植模式下滇龍膽草體內(nèi)總裂環(huán)烯醚萜苷含量變化可能與其生長(zhǎng)的小環(huán)境有關(guān)。

滇龍膽草的主要藥用部位為根部,在不同種植模式下,除滇龍膽草-木瓜種植模式外,在其余復(fù)合種植模式下滇龍膽草根中總裂環(huán)烯醚萜苷含量均高于單一種植模式,其中在滇龍膽草-旱冬瓜種植模式下滇龍膽草根中總裂環(huán)烯醚萜苷含量最高,但由于桉樹(shù)和旱冬瓜葉片水提物對(duì)滇龍膽草種子萌發(fā)有顯著抑制作用[4],因此,滇龍膽草與茶樹(shù)、核桃、杉木及木果柯復(fù)合種植較為適宜。

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(責(zé)任編輯:張明霞)

LC-MS analysis of total flavonoids extracts from fresh stem and leaf of Gynura bicolor

REN Bingru,LYU Han, CHEN Jian,LIANG Chengyuan,WU Julan,LIWeilin①(Jiangsu Center for Research and Development of Medicinal Plants,Jiangsu Provincial Service Center for Anti-diabetic Drugs Screening,Institute of Botany,Jiangsu Province and the Chinese Academy of Sciences,Nanjing 210014,China),J.Plant Resour.&Environ.2014,23(3):108-110

Four total flavonoids extractswere obtained from fresh stem and leaf of Gynura bicolor DC.bymethod of ethanol extraction-macroporous resin column chromatography-polyamide column chromatography-recrystallization,and their compositions were analyzed by LC-MS technology.The results show that there are six groups of flavonoid absorption peak in total flavonoids extracts of G.bicolor,which is identified to be eight components including rutin,quercetin-3-O-rubinobioside,hyperoside,isoquercitrin,kaempferol-3-O-rubinobioside,kaempferol-3-O-rutinoside,kaempferol-3-O-galactoside and astragalin.This extractionmethod can effectively extract and purify total flavonoids from fresh stem and leaf of G.bicolor,so it can be used for factory production.

Gynura bicolor DC.;LC-MS;total flavonoids;quercetin;kaempferol

E ffect of different p lanting patterns on total secoiridoid glycoside content in

Gentiana rigescens LI Yuanju1,2, SHEN Tao3,ZHANG Ji1,ZHAO Yanli1,WANG Yuanzhong1,①(1.Institute of Medicinal Plants,Yunnan Academy of Agricultural Sciences,Kunming 650200,China;2.College of Traditional Chinese Medicine,Yunnan University of Traditional Chinese Medicine,Kunming 650500,China;3.College of Resources and Environment,Yuxi Normal University,Yuxi653100,China),J.Plant Resour.&Environ.2014,23(3):111-113

Q946.83;R284.1

A 文章編號(hào):1674-7895(2014)03-0108-03

10.3969/j.issn.1674-7895.2014.03.15

946.83;Q949.776.4;R282.2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

1674-7895(2014)03-0111-03

2013-09-29

江蘇省產(chǎn)學(xué)研聯(lián)合創(chuàng)新資金項(xiàng)目(BY2012213);江蘇省科技基礎(chǔ)設(shè)施建設(shè)計(jì)劃——科技公共服務(wù)平臺(tái)項(xiàng)目(BM2011117)

任冰如(1964—),女,江蘇宜興人,博士,研究員,主要從事植物資源的研究與開(kāi)發(fā)工作。

①通信作者E-mail:lwlcnbg@mail.cnbg.net

收稿日期:2013-10-08

基金項(xiàng)目:國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81260608);國(guó)家“十二五”科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2011BAI13B02-04);云南省技術(shù)創(chuàng)新人才培養(yǎng)項(xiàng)目(2010CI068);云南省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2012AE002);云南省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(2013FZ150;2013FZ151);2012年度國(guó)家中藥材生產(chǎn)扶持項(xiàng)目(41);國(guó)家農(nóng)業(yè)部公益性行業(yè)科研專(zhuān)項(xiàng)(201303117)

作者簡(jiǎn)介:李遠(yuǎn)菊(1989—),女,云南麗江人,碩士研究生,主要從事中藥資源開(kāi)發(fā)與利用研究。

①通信作者E-mail:boletus@126.com