蔣清民，張可擎，王軍

(1.河南化工職業(yè)學(xué)院應(yīng)用化學(xué)系，河南鄭州 450042;2.陜西省石油化工研究設(shè)計院質(zhì)檢中心，陜西西安 710054)

沙拉沙星(Sarafloxacin)是繼恩諾沙星之后的又一新的動物專用藥，抗菌活性強(qiáng)于雙氟沙星、諾氟沙星、氧氟沙星-丁胺卡那霉素及妥布霉素等，對厭氧菌的抗菌活性與環(huán)丙沙星相當(dāng)。沙拉沙星的測定方法主要有高效液相色譜法(HPLC)［1］、分子熒光光度法［2］與紫外可見分光光度法［3］等。沙拉沙星分子結(jié)構(gòu)中含有α-酮酸基團(tuán)，可與Tb3+配位而產(chǎn)生分子內(nèi)能量轉(zhuǎn)移，發(fā)射熒光。據(jù)此，王磊等［4］測定了鹽酸沙拉沙星注射液中沙拉沙星的含量。研究發(fā)現(xiàn)，Tb3+對 Ce4+-H2SO3-Sarafloxacin化學(xué)發(fā)光體系有很強(qiáng)的增敏作用，據(jù)此建立了流動注射-化學(xué)發(fā)光法測定沙拉沙星的新方法，此法具有靈敏度高、選擇性高等優(yōu)點。不需任何預(yù)處理，適當(dāng)稀釋就可直接測定沙星注射液中沙拉沙星的含量，回收率為95.1% ～101.4%，并與國標(biāo)方法進(jìn)行了對照，結(jié)果令人滿意。

1 實驗部分

1.1 試劑與儀器

鹽酸沙拉沙星注射液;沙拉沙星對照品(河南省藥品食品檢驗鑒定所提供，純度 ＞99.0%);TbCl3、Ce(NH4)2(NO3)6均為分析純;實驗所用水為石英亞沸重蒸水。

IFFM-D流動注射化學(xué)發(fā)光儀。

1.2 溶液配制

1.2.1 鋱儲備液(10 mmol/L)配制 稱取3.73 g TbCl3，溶于三次水，定容至100 mL。

1.2.2 Ce4+溶液(10 mmol/L)配制 稱取 5.48 g Ce(NH4)2(NO3)6，溶于水，定容至 100 mL。

1.3 實驗方法

各溶液流路如圖1所示，采用流動注射技術(shù)，首先將沙拉沙星標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣品溶液與H2SO3溶液混合注入進(jìn)樣閥，然后以Ce4+與Tb3+混合液為載流，將樣品混合液載入流通池中發(fā)生化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，記錄信號，以峰高定量。

圖1 流動注射化學(xué)發(fā)光分析儀流路圖Fig.1 Schematic diagram of flow injection chemiluminescence analysisV.注射閥;P.泵;C.流通池;PMT.光電倍增管;AMP.放大器;R.記錄儀;HV.負(fù)高壓;W.廢液;a.樣品溶液;b.H2SO3溶液(0.8 mmol/L);c.Ce4+溶液 (0.1 mmol/L);d.Tb3+溶液(0.7 mmol/L)

2 結(jié)果與討論

2.1 流路參數(shù)的選擇

沙拉沙星、H2SO3、Tb3+和Ce4+4種溶液的進(jìn)樣方式見圖1，流速與管道長度對發(fā)光強(qiáng)度影響見圖2。

圖2 流速和管道長度對發(fā)光強(qiáng)度的影響Fig.2 Effect of flow rate and pipe length on chemiluminescence intensity

由圖2可知，各溶液的流速均為3.8 mL/min，并且流通反應(yīng)池與樣品混合池之間管道長度為20 cm時，發(fā)光體系的信噪比最大。

2.2 酸度條件的影響

Ce4+化學(xué)發(fā)光體系的反應(yīng)介質(zhì)多為酸性介質(zhì)。本文實驗了 HCl、H3PO4、HNO3和 H2SO4等 4種酸對發(fā)光強(qiáng)度的影響，結(jié)果見圖3。

圖3 酸濃度對發(fā)光強(qiáng)度的影響Fig.3 Effect of acid concentration on chemiluminescence intensity

由圖3可知，H2SO4作為反應(yīng)介質(zhì)濃度為1.5 mmol/L時發(fā)光強(qiáng)度最大，所以，選擇反應(yīng)介質(zhì)硫酸的濃度為1.5 mmol/L。

2.3 Ce4+及H2SO3溶液濃度的選擇

在Tb3+-Ce4+-H2SO3-Sarafloxacin的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)體系中，通過Ce4+氧化H2SO3而產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，其濃度對體系發(fā)光強(qiáng)度的影響，見圖4。

圖4 Ce4+和H2SO3濃度對發(fā)光強(qiáng)度的影響Fig.4 Effect of Ce4+and H2SO3concentration on chemiluminescence intensity

由圖4可知，當(dāng)Ce4+和H2SO3兩種溶液的濃度分別為0.12 mmol/L和1.0 mmol/L時，體系具有最大的發(fā)光強(qiáng)度。

2.4 增敏劑及其濃度的選擇

Ce4+-H2SO3發(fā)光體系的發(fā)光強(qiáng)度很弱，Ce4+-H2SO3-Sarafloxacin體系的化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度也較弱，可加入增敏劑使發(fā)光強(qiáng)度增強(qiáng)。實驗了Tb3+、Eu3+、羅丹明B、羅丹明6G、熒光素、二氯代熒光素等對Ce4+-H2SO3-Sarafloxacin體系發(fā)光強(qiáng)度的增敏效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Tb3+效果最好，可使其發(fā)光強(qiáng)度增加110倍左右，發(fā)光信號隨Tb3+溶液濃度的增大而增強(qiáng)，結(jié)果見圖5。

圖5 Tb3+濃度對發(fā)光強(qiáng)度的影響Fig.5 Effect of Tb3+concentration on chemiluminescence intensity

由圖5可知，當(dāng)Tb3+溶液濃度為0.85 mmol/L時，發(fā)光信號已足夠大。因此，本實驗選擇濃度為0.85 mmol/L 的 Tb3+作 Ce4+-H2SO3-Sarafloxacin發(fā)光體系的增敏劑。

2.5 校準(zhǔn)曲線、精密度與檢出限

在最佳實驗條件下，發(fā)光強(qiáng)度與沙拉沙星濃度呈良好的線性關(guān)系，其線性范圍為1.5×10－8～5.0×10－4g/mL。為了提高測定的精密度與準(zhǔn)確度，校準(zhǔn)曲線按沙拉沙星的濃度范圍進(jìn)行分段繪制，其基本參數(shù)見表1。

圖6 沙拉沙星測定線性曲線Fig.6 Linear curve of Sarafloxacin

表1 校準(zhǔn)曲線線性范圍及回歸方程Table 1 Linear range and regression equations of calibration curve

對濃度為2.5×10－5g/mL的沙拉沙星進(jìn)行11次平行測定，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.2%，檢出限為8.3 ng/mL。

2.6 干擾實驗

實驗了沙拉沙星樣品中可能共存組分對測定的干擾情況，結(jié)果表明，對于濃度為2.5×10－5g/mL的沙拉沙星溶液，以誤差不大于 ±5% 為限，K+、Na+沒有干擾;1 100 倍的 Zn2+、Ba2+、Ca2+、淀粉、硬脂酸鎂，300 倍的 Co2+、Pb2+、Ni2+、Cu2+，對實驗無干擾，抗壞血酸等還原性較強(qiáng)的物質(zhì)干擾測定，與其結(jié)構(gòu)相似的氟喹諾酮類藥物，例如司帕沙星、諾氟沙星、蘆氟沙星等均有嚴(yán)重干擾。

2.7 回收率及樣品測定

取不同批次沙拉沙星注射液各1支，分別準(zhǔn)確量取1 mL樣品(約相當(dāng)于沙拉沙星 0.1 g)于1 000 mL容量瓶中，定容。取上述溶液適量于25 mL容量瓶中，加入適量系列濃度對照品溶液，定容，結(jié)果見表2。

表2 沙拉沙星注射液含量測定結(jié)果Table 2 Determination results of Sarafloxacin in injection

由表2可知，本法測定的回收率在97.6% ～101.2%，符合測定要求，適用于沙拉沙星的測定。

3 結(jié)論

利用Tb3+能大大增強(qiáng)Ce4+-H2SO3-Sarafloxacin體系化學(xué)發(fā)光的現(xiàn)象，可實現(xiàn)對沙拉沙星的測定。最佳實驗條件為:1.5 mmol/L硫酸作為反應(yīng)介質(zhì)，Ce4+濃 度 為 0.12 mmol/L，H2SO3濃 度 為1.0 mmol/L，增敏劑 Tb3+濃度為0.85 mmol/L，此時體系發(fā)光強(qiáng)度最大，方法檢出限為8.3 ng/mL，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為 2.2%，加標(biāo)回收率為 97.6% ～101.2%，測定選擇性較好，但還原性物質(zhì)如抗壞血酸和結(jié)構(gòu)類似的喹諾酮類藥物會對測定帶來干擾。因此，對于復(fù)雜藥物的分析需要與分離效果較好的色譜技術(shù)聯(lián)用，這樣才能得到理想的測定結(jié)果。

［1］李海迪，楊先樂，胡鯤，等.高效液相色譜法測定中華絨螯蟹主要組織中雙氟沙星及其代謝產(chǎn)物沙拉沙星方法［J］.藥物分析雜志，2009，29(7):1142-1147.

［2］葉鹿鳴，謝東華.高效液相色譜熒光檢測法測定牛奶中3種氟喹諾酮?dú)埩粞芯浚跩］.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2008，18(5):804-806.

［3］傅麗，陳金鳳，龍運(yùn)前，等.膠束增敏熒光法測定鹽酸沙拉沙星［J］.分析試驗室，2008，27(11):95-97.

［4］陳玉海，趙風(fēng)利，張彥青，等.鋱-沙拉沙星熒光光度法測定沙拉沙星含量［J］.分析試驗室，2009，28(6):24-26.