況媛媛， 王 彥， 谷 雪， 李 靜， 閻 超

(上海交通大學(xué)藥學(xué)院，上海200240)

近年來，隨著極性化合物的分離分析在藥物分析、藥物代謝、食品和環(huán)境科學(xué)［1-4］等領(lǐng)域越來越受到重視，親水作用色譜(hydrophilic interaction liquid chromatography，HILIC)得到了快速發(fā)展。親水作用色譜的概念最早由 Alpert［5］于 1990年提出。HILIC可以較好地分析反相色譜不能分離的極性化合物，并且由于它的流動相由有機(jī)試劑與水混合而成，彌補(bǔ)了正相色譜對于水溶性物質(zhì)溶解差、保留時間對流動相中水含量敏感以及與質(zhì)譜檢測器不兼容等缺點(diǎn)［6］。

整體柱(monolithic column)是將單體、交聯(lián)劑、致孔劑和引發(fā)劑等混合通過原位聚合制備而成的棒狀連續(xù)床層。因其傳質(zhì)速度快、反壓低、柱效高而被稱為第四代分離介質(zhì)，已在蛋白質(zhì)、多肽、核酸等［7］樣品的分離分析中顯示優(yōu)勢。親水整體柱集合了親水作用色譜與整體柱的特點(diǎn)，與反相色譜整體柱相比更適合分離極性物質(zhì)，為微分離技術(shù)提供了更多的選擇空間。L?mmerhofer等［8］最早采用 2-甲基丙烯酸二甲胺乙酯(DMAEMA)、2-甲基丙烯酸羥乙酯(HEMA)和亞乙基二甲基丙烯酸酯(EDMA)共聚獲得DMAEMA-co-HEMA-co-EDMA親水整體柱并應(yīng)用于布洛芬類非甾體抗炎藥物的分離。Wang等［9］采用HEMA與季戊四醇三丙烯酸酯(PETA)制備了聚(PETA-co-HEMA)中性整體柱，所制得整體柱表面不帶電荷，適合于分離堿性物質(zhì)［10］。最近，Lin等［11］采用無機(jī)單體多面體低聚倍半硅氧烷(POSS-MA)與HEMA合成了有機(jī)-無機(jī)硅膠雜化親水整體柱，并成功應(yīng)用于5種腦啡肽的分離。

以磺酸鹽甜菜堿作為聚合物的制備單體［12］，因其結(jié)構(gòu)中同時含有季銨基和磺酸基兩個活性基團(tuán)，且二者數(shù)目相等，凈電荷為零，故不易產(chǎn)生自發(fā)聚合，易進(jìn)行自由基引發(fā)聚合。由于其具有良好的化學(xué)及熱穩(wěn)定性及pH值耐受范圍寬等特點(diǎn)而逐漸引起人們的關(guān)注。N，N-二甲基-N-甲基丙烯酰胺基丙基-N，N-二甲基-N-丙烷磺酸內(nèi)鹽(SPP)作為磺酸甜菜堿類兩性離子化合物具有很強(qiáng)的親水性，可用于制備親水性固定相。

李新燕等［13］以甲基丙烯酸丁酯(BMA)和磺酸甜菜堿類化合物3-(N，N-二甲基-(2-(2-甲基丙-2-烯酰氧基)乙基)銨)丙烷-1-磺酸內(nèi)鹽(SPP)為單體，制備了新型的親水作用毛細(xì)管整體柱，以加壓毛細(xì)管電色譜為技術(shù)平臺，無需添加離子對試劑即可用于奶制品中三聚氰胺的定量測定。高也等［14］以SPP與季戊四醇三丙烯酸酯(PETA)為單體，分別用甲醇/1，4-丁二醇和乙醇/乙二醇為致孔劑制備了親水整體柱，其中用乙醇/乙二醇制備的親水柱與甲醇/1，4-丁二醇制備的親水柱相比，滲透性較差，但柱效較高。本文在此基礎(chǔ)上，以SPP為單體，PETA為交聯(lián)劑，偶氮二異丁腈(AIBN)為引發(fā)劑，采用聚乙二醇(PEG)/甲醇作為致孔體系制備了一種新型親水性整體柱，并以毛細(xì)管液相色譜(capillary liquid chromatography，cLC)和加壓毛細(xì)管電色譜(pressurized capillary electrochromatography，pCEC)為平臺，應(yīng)用于核苷類、酚類、胺類等極性化合物的分離，獲得了很好的效果。

1 實驗部分

1.1 試劑、材料和儀器

SPP和PETA(Sigma-Aldrich，USA);AIBN 和氫氧化鈉(NaOH)(中國醫(yī)藥集團(tuán)上海化學(xué)試劑有限公司);PEG(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);甲醇和乙腈(色譜純，Tedia公司);去離子水(南京娃哈哈飲料有限公司);γ-(甲基丙烯酰氧)(γ-MAPS;Alfa Aesar，USA);熔融石英毛細(xì)管(100 μm i.d.×360 μm o.d.，河北永年銳灃色譜器件有限公司)。胸腺嘧啶、尿嘧啶、腺嘌呤、尿苷、肌苷、胞嘧啶、鳥嘌呤、鳥苷(北京百靈威科技有限公司);苯酚、鄰苯二酚、間苯二酚、對苯二酚、焦棓酸、間苯三酚、甲酰胺、對甲苯胺、丙烯酰胺、煙酰胺、N，N'-亞甲基雙丙烯酰胺(中國醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑有限公司)。

TriSep-2100GV加壓毛細(xì)管電色譜儀(Unimicro Technologies，Inc.，USA)，包括柱上紫外檢測器、微流控系統(tǒng)、溶劑輸送系統(tǒng)、高壓電源和數(shù)據(jù)采集系統(tǒng);場發(fā)射掃描電鏡(FEI;Hillsboro，USA);Pore-Master33 Mercury Porosimetry Analyzer全自動壓汞儀(Quantachrome，USA);KQ2200B型超聲波清洗器(昆山超聲儀器有限公司)。

1.2 毛細(xì)管整體柱的制備

毛細(xì)管的預(yù)處理:用配制的0.1 mol/L NaOH溶液沖洗毛細(xì)管30 min，再用去離子水沖洗10 min至流出的液體為中性;將沖洗過的毛細(xì)管用氮?dú)獯? h至毛細(xì)管完全干燥。將配制好的體積分?jǐn)?shù)為50%的γ-MAPS甲醇溶液充滿毛細(xì)管，兩端用橡膠塞封口，放入25℃恒溫水浴中反應(yīng)12 h，反應(yīng)完全后取出毛細(xì)管，用甲醇沖洗1 h后通氮?dú)獯蹈?，備用?/p>

整體柱的制備:稱取適量的PEG與甲醇超聲至完全澄清透明，加入適量的 SPP和 PETA，渦旋3 min，置于水浴中超聲15 min，加入適量的AIBN，超聲10 min，通氮?dú)馀艢? min;將聚合液用注射器注入到預(yù)處理好的毛細(xì)管中，兩端用橡膠塞封口，放入60℃水浴中反應(yīng)20 h。反應(yīng)結(jié)束后將毛細(xì)管柱接到高壓泵上，用甲醇沖洗1 h以除去未反應(yīng)的單體與致孔劑。

在柱填料的末端做標(biāo)記，利用加熱的電阻絲在標(biāo)記處燒一段2～3 mm的窗口，截取2 cm的毛細(xì)管柱做場發(fā)射掃描電鏡(scanning electron microscope，SEM)實驗。

1.3 整體柱性能的考察

1.3.1 滲透率K的測定

所有試驗均在室溫下進(jìn)行。在毛細(xì)管液相色譜模式下，根據(jù)公式× η［15］計算甲醇通過整體柱時的滲透率K，其中μ為甲醇通過整體柱的線性流速，η為甲醇在室溫下的動態(tài)黏滯度(0.58 mPa)［16］，L為整體柱的有效長度，ΔP為甲醇通過整體柱的柱壓。

1.3.2 整體柱色譜性能的考察

通過毛細(xì)管液相色譜和加壓毛細(xì)管電色譜分離不同極性化合物考察毛細(xì)管整體柱的色譜性能。毛細(xì)管整體柱規(guī)格為250 mm(總長500 mm)×100 μm，分流管規(guī)格為2 m×50 μm，分流前進(jìn)樣環(huán)體積約為1 μL，分流比約為200∶1，實際進(jìn)樣量為5 nL。

2 結(jié)果與討論

2.1 親水整體柱聚合液組成比例的優(yōu)化

致孔劑的種類和用量在很大程度上影響整體柱的孔徑大小及分布，從而影響整體柱的滲透性。致孔劑的選擇原則一般為致孔劑要與單體互溶，且不與單體反應(yīng);反應(yīng)完全后易于去除等。PEG是一種無毒高分子聚合物，具有良好的水溶性，并與多種有機(jī)組分有極好的互溶性，一般作為模板劑應(yīng)用于硅膠整體柱的溶膠-凝膠制備過程，而較少用于聚合物整體柱的制備過程［17］。但由于它的相對分子質(zhì)量范圍可以從幾百到幾萬，可以更好地調(diào)節(jié)聚合物的孔尺寸、密度和體積，因此在本研究中選擇PEG/甲醇為致孔體系。

單體與致孔體系比例的優(yōu)化。依次按照單體與致孔體系的質(zhì)量比為 1∶4、1∶3、1∶2.5、1∶2 制備 A、B、C、D 4批整體柱(見表1)，制備過程中其他反應(yīng)物含量均保持不變。結(jié)果表明，隨著致孔體系含量的減少，整體柱的通透性呈下降趨勢，柱效呈上升趨勢。其中，當(dāng)單體與致孔體系的質(zhì)量比為1∶2時，聚合液呈現(xiàn)不溶解的狀態(tài)，無法制備均勻連續(xù)的整體柱。綜合考慮柱效和柱的通透性，在后續(xù)的實驗中選擇單體與致孔體系的質(zhì)量比為1∶2.5。

致孔體系內(nèi)部比例的優(yōu)化。依次按照PEG-6000 與甲醇的質(zhì)量比為 1∶3、1∶2.5、1∶2、1∶1.5 制備E、F、C、G 4批整體柱(見表1)。其中隨著PEG含量的增加，滲透性與柱效呈現(xiàn)升高趨勢。當(dāng)PEG與甲醇的質(zhì)量比為1∶1.5時，聚合液不溶解，達(dá)到飽和狀態(tài)，無法制備擁有均一柱床的整體柱。綜合考慮柱效與滲透性二者的最優(yōu)化，在后續(xù)的實驗中選擇PEG與甲醇的質(zhì)量比為1∶2。

交聯(lián)劑與單體比例的優(yōu)化。按照交聯(lián)劑與單體的質(zhì)量比分別為 1∶2、1∶1.5、1∶1、1∶0.5 制備 H、I、C、J 4批整體柱(見表1)。由表1可見，隨著交聯(lián)劑比例的增大，整體柱的滲透性越來越小，柱效增加;當(dāng)PETA與SPP的質(zhì)量比為1∶0.5時，交聯(lián)劑比例過大導(dǎo)致整體柱滲透性太差，甲醇無法將整體柱沖開。綜上所述，在后續(xù)的實驗中選擇單體與交聯(lián)劑的質(zhì)量比為1∶1。

表1 制備親水整體柱聚合液的組成Table 1 Composition of polymerization mixtures for the preparation of hydrophilic monolithic columns

PEG隨著聚合度的增加，熔點(diǎn)和黏度也都相應(yīng)增大，我們選取了相對分子質(zhì)量從2 000到10 000的PEG作為致孔劑制備親水整體柱，考察PEG的相對分子質(zhì)量對整體柱的孔徑、柱效以及滲透性等因素的影響(見表2)。可見，由不同相對分子質(zhì)量的PEG制備而成的整體柱存在差異，隨著PEG相對分子質(zhì)量的增加，整體柱的滲透性與柱效均呈升高趨勢，這可能是因為隨著相對分子質(zhì)量的增大，致孔劑溶液中存在著更大的空間位阻，導(dǎo)致貫穿孔增多，滲透性增大，但用PEG-6000制備的柱C的柱效高于用PEG-10000制備的柱M，柱效達(dá)到148 000塔板/m。綜合以上所有因素，選取親水整體柱的最優(yōu)化制備條件為:單體與致孔劑的質(zhì)量比為1∶2.5，致孔劑中PEG-6000與甲醇的質(zhì)量比為1∶2，SPP與 PETA的質(zhì)量比為1∶1，AIBN為總質(zhì)量的0.1%。

表2 以不同相對分子質(zhì)量的PEG制備的整體柱的滲透性及柱效Table 2 Permeabilities(K)and column efficiencies of the monolithic columns prepared using PEG with different relative molecular masses

2.2 整體柱的表征

2.2.1 整體柱的形貌表征

用場發(fā)射掃描電鏡表征最終制得的聚合物親水整體柱的骨架與大孔尺寸。從圖1可以看出，在優(yōu)化條件下制備的整體柱擁有均一的孔結(jié)構(gòu)，固定相與毛細(xì)管管壁牢固地結(jié)合成一個整體，沒有發(fā)生脫落的現(xiàn)象;整體結(jié)構(gòu)中有微米級的貫穿孔，保證了整體柱有良好的通透性。

2.2.2 整體柱的孔徑分布

通過壓汞法測得整體柱的平均孔徑為208 nm左右。根據(jù)文獻(xiàn)［18］可以計算出整體柱的孔隙率為0.72。

由以上數(shù)據(jù)可以看出，整體柱具有較大的孔徑及較高的孔隙率，通透性相對較好。

2.3 親水整體柱的色譜性能

在cLC模式下，在不同流速下對制備的整體柱C擬合范第姆特方程曲線(見圖2)。當(dāng)線性流速達(dá)到0.778 mm/s時，最高柱效為1.02 ×105塔板/m。另外，在cLC模式下對整體柱C的親水性進(jìn)行了考察。當(dāng)流動相中乙腈含量為95%時，甲苯、丙烯酰胺和硫脲3種物質(zhì)的出峰順序與極性相關(guān)，極性越大出峰越晚;在反相色譜模式下不保留的硫脲在17 min左右出峰，說明整體柱C具有良好的親水性。

圖1 親水整體柱C場發(fā)射掃描電鏡照片F(xiàn)ig.1 SEM photographs of the hydrophilic monolithic column C

圖2 親水整體柱C的范第姆特方程曲線Fig.2 van Deemter plot of the height equivalent to a theoretical plate height as a function of flow rate of hydrophilic monolithic column CConditions:cLC mode;column dimension，250 mm(total length 500 mm)×100 μm;mobile phase，ACN/H2O(88/12，v/v)containing 10 mmol/L ammonium formate;detection，UV at 214 nm.

2.4 親水整體柱的重復(fù)性與穩(wěn)定性

選取甲苯與丙烯酰胺為樣品，在cLC模式下考察親水整體柱的保留因子與柱效的重復(fù)性與穩(wěn)定性，結(jié)果如表3所示。其中整體柱的日內(nèi)與日間RSD均小于5%。同時考察不同批次間親水整體柱保留因子與柱效的重復(fù)性，6根整體柱的RSD均在可接受范圍內(nèi)，表明所制備的整體柱具有良好的重復(fù)性與穩(wěn)定性。

表3 親水整體柱C的保留因子與柱效的重復(fù)性Table 3 R eproducibilities of retention factor and column efficiencies on column C

2.5 對于分離機(jī)理的探討

HILIC分離機(jī)理［19］被認(rèn)為是多種機(jī)理的混合作用，如氫鍵、吸附、偶極矩為初級作用機(jī)理;而帶電荷的固定相可以提供第二個十分重要的有選擇性的保留作用，也就是待分離物質(zhì)與固定相上的電荷之間的靜電作用。并且HILIC的作用機(jī)理受到許多因素的影響，最主要的是受到固定相的種類、流動相中有機(jī)相的含量、流動相的pH以及緩沖鹽離子濃度等因素的影響。

為了研究磺酸甜菜堿兩性離子親水整體柱的分離機(jī)理，我們選取甲苯、丙烯酰胺、硫脲3種極性相差較大的物質(zhì)，通過改變流動相中有機(jī)相乙腈的含量來考察3種物質(zhì)保留時間的變化趨勢。如圖3所示，在流動相中乙腈含量超過39%時，硫脲的保留時間比甲苯和丙烯酰胺長;且在乙腈含量由95%降至39%的過程中，硫脲的保留時間也在逐漸降低;在乙腈含量繼續(xù)降至20%的過程中，硫脲的保留時間下降趨勢減緩，趨于穩(wěn)定狀態(tài)。甲苯因其非極性較強(qiáng)，在乙腈含量從95%降到50%的過程中，它的保留時間先略微增長然后基本保持不變;當(dāng)乙腈含量低于50%后，隨著乙腈含量的降低，甲苯的保留時間急劇升高;當(dāng)乙腈含量低于39%時，甲苯在硫脲后面出峰。丙烯酰胺由于其極性介于甲苯與硫脲之間，所以隨著流動相中乙腈含量的升高呈現(xiàn)大致升高的趨勢，在乙腈含量從50%上升到95%的過程中，其保留時間超過甲苯。結(jié)果表明，當(dāng)乙腈含量大于50%時，整體柱的分離機(jī)理表現(xiàn)為親水作用機(jī)理［20］。

2.6 親水整體柱的應(yīng)用

2.6.1 核苷類化合物的分離

由于核苷類化合物具有強(qiáng)極性，因而很難在反相色譜模式下得到較好的分離。為此，我們采用親水模式，分別從流動相pH、鹽濃度以及流動相中乙腈含量等分離條件對核苷類物質(zhì)的分離進(jìn)行了優(yōu)化。

圖3 流動相中乙腈含量對甲苯、丙烯酰胺、硫脲保留時間的影響Fig.3 Influence of the ACN content in mobile phase on the retention times of toluene，acrylamide and thioureaConditions:cLC mode;column dimension，250 mm(total length 500 mm)×100 μm;mobile phase，ACN/H2O system with different volume ratios，containing 10 mmol/L ammonium formate;flow rate，0.05 mL/min;detection，UV at 214 nm.

在cLC模式下8種核苷類化合物隨pH的變化趨勢大致相同，依次調(diào)整流動相的pH 為3、5、7、9，8種物質(zhì)的保留因子都是先增大后減小，當(dāng)pH值為7時達(dá)到最大值。各樣品的pKa值分別為胸腺嘧啶9.94，尿嘧啶 9.5，腺嘌呤 9.8，尿苷 9.25，肌苷 8.9，胞嘧啶12.16，鳥嘌呤9.92，鳥苷9.36?？紤]到當(dāng)流動相的pH為3、5、7時，親水保留機(jī)理和離子交換保留機(jī)理共同作用，此時樣品均呈正電性，更易與磺酸根發(fā)生離子交換，但磺酸根隨著pH增大會呈解離狀態(tài)，而核苷類物質(zhì)在此時也都是正電性，所以離子交換程度增大;pH在7～9范圍時核苷類物質(zhì)的正電性減弱，離子交換程度降低，因此保留減弱。

同樣，我們也考察了流動相中甲酸銨的濃度對核苷類物質(zhì)保留的影響。實驗中將流動相的甲酸銨濃度從10 mmol/L一直升高到70 mmol/L，這些核苷類物質(zhì)在整體柱上的保留先增大后減小，當(dāng)甲酸銨濃度為40 mmol/L時保留因子最大;當(dāng)甲酸銨濃度從10 mmol/L升高到40 mmol/L時，樣品的保留逐漸增大。根據(jù)Alpert［21］的理論，在流動相的鹽濃度逐漸增大的情況下，越來越多的鹽離子進(jìn)入固定相的水化層，從而增大了固定相的容積，使樣品保留增加。當(dāng)甲酸銨濃度從40 mmol/L增加到70 mmol/L時，水化層中鹽離子數(shù)量足夠多，以至于與固定相中的磺酸根離子發(fā)生離子交換，使樣品與固定相的離子交換減弱，保留也隨之減弱。

通過以上考察我們選取pH為7，流動相中甲酸銨濃度為40 mmol/L作為核苷類物質(zhì)的分離條件。另外，我們也考察了不同含量的乙腈對分離的影響。如圖4所示，在95%乙腈條件下，各物質(zhì)因結(jié)構(gòu)相似很難達(dá)到有效分離;在90%乙腈條件下，峰形與分離度都有所改善，其中只有尿苷與肌苷未達(dá)到基線分離;當(dāng)乙腈濃度減少為85%時，8種物質(zhì)的保留時間較為接近，分離度變差。所以我們選擇90%乙腈作為后續(xù)的實驗條件。

圖4 乙腈含量對核苷化合物在親水整體柱C上分離的影響Fig.4 Effect of ACN content on the retention of nucleosides on hydrophilic monolithic column CConditions:cLC mode;column dimension，250 mm(total length 500 mm)×100 μm;mobile phase，ACN/H2O system with different volume ratios，containing 40 mmol/L ammonium formate;flow rate，0.05 mL/min;detection，UV at 254 nm.Peaks:0.toluene;1.thymine;2.uracil;3.ademine;4.uridine;5.inosine;6.cytosine;7.guanine;8.guanosine.

在加壓毛細(xì)管電色譜模式下，整體柱兩端施加正電。如圖5所示，隨著電壓的增大，峰形變好，分離度提高，柱效也有所增加，其中電壓為10 kV時8種核苷類化合物都得到基線分離;15 kV時分離度并未繼續(xù)提高，而峰形卻不如10 kV時。綜上所述，8種核苷化合物的最優(yōu)分離條件為pH為7，甲酸銨濃度為40 mmol/L，電壓為10 kV。

2.6.2 其他極性化合物的分離

酚類化合物的分離 圖6為親水整體柱C對酚類化合物的分離圖。結(jié)果顯示，隨著化合物中羥基數(shù)目的增加，保留時間相應(yīng)增加，6種酚類混合物得到基線分離，出峰順序也與文獻(xiàn)［22］報道一致。

胺類化合物的分離 在毛細(xì)管液相色譜模式下對胺類極性小分子化合物進(jìn)行了分離并獲得了理想效果。如圖7a所示，其中分離N，N'-亞甲基雙丙烯酰胺的柱效可達(dá)到2.4×105塔板/m，而圖7b中，乙酰苯胺與N，N'-亞甲基雙丙烯酰胺的分離度為1.4，沒有達(dá)到基線分離。

圖5 分離電壓對核苷化合物在親水色譜柱C上分離的影響Fig.5 Effect of separation voltage on the retention of nucleosides on hydrophilic monolithic column CConditions:pCEC mode;mobile phase，ACN/H2O(90/10，v/v)containing 40 mmol/L ammonium formate，pH 7;others are the same as in Fig.4.Peak identifications are the same as in Fig.4.

圖6 親水色譜柱C對酚類化合物的分離Fig.6 Chromatogram of phenols on hydrophilic monolithic column CConditions:cLC mode;mobile phase，ACN/H2O(95/5，v/v)containing 10 mmol/L ammonium formate;detection，UV at 214 nm;others，same as in Fig.4.Peak identifications:0.toluene;1.phenol;2.quinol;3.catechol;4.resorcinol;5.pyrogallol;6.phloroglucinol.

雜環(huán)類化合物的分離 雜環(huán)類化合物具有一定的生物活性，在醫(yī)藥領(lǐng)域中有廣泛的應(yīng)用。由于雜環(huán)類化合物結(jié)構(gòu)較為相近，分離困難，我們用制備的新型親水整體柱C在加壓電色譜模式下在7 min內(nèi)分離了4種雜環(huán)類化合物，如圖8所示，4種物質(zhì)達(dá)到了基線分離。

圖7 親水色譜柱C對胺類化合物的分離Fig.7 Chromatograms of amides on hydrophilic monolithic column CThe conditions are the same as in Fig.6.Peak identifications:a.0.toluene;1.paratoluidine;2.N，N'-dimethylenebisacrylamide;3.formamide;4.thymine.b.0.toluene;1.acetanilide;2.N，N'-dimethylenebisacrylamide;3.acrylamide;4.nicotinamide;5.formamide.

圖8 親水色譜柱C對雜環(huán)類化合物的分離Fig.8 Electrochromatogram of heterocyclics on hydrophilic monolithic column CConditions:pCEC mode;mobile phase，ACN/H2O(88/12，v/v)containing 10 mmol/L ammonium formate;backpressure，6.4 MPa;applied voltage，20 kV;others，same as in Fig.7.Peak identifications:0.toluene;1.caffeine;2.theophyline;3.nicotin;4.thymine.

3 結(jié)論

本文以PEG/甲醇為二元致孔劑，SPP與PETA為單體，原位聚合制備了親水整體柱;所制備的整體柱機(jī)械強(qiáng)度好，孔徑分布均勻，滲透性好，反壓低，并且具有良好的親水性，能夠很好地分離酚類、胺類、雜環(huán)類、核苷類等極性較大的物質(zhì)，可以作為反相色譜應(yīng)用的補(bǔ)充，也可為親水-反相色譜聯(lián)用提供新的思路。

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