黃迪海 張從敬 劉 霞 徐秀榮 盛曉丹 陳宗靜 秦卓明③*（①山東省健牧生物藥業(yè)有限公司 濟(jì)南 250100 ②濟(jì)南市動(dòng)物生物藥品工程技術(shù)研究中心 濟(jì)南③山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所 濟(jì)南)

長(zhǎng)效乳酸環(huán)丙沙星注射液的急性毒性試驗(yàn)和安全評(píng)價(jià)

黃迪海①②張從敬①②劉 霞①②徐秀榮①②盛曉丹①②陳宗靜①②秦卓明①②③*（①山東省健牧生物藥業(yè)有限公司 濟(jì)南 250100 ②濟(jì)南市動(dòng)物生物藥品工程技術(shù)研究中心 濟(jì)南③山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所 濟(jì)南)

通過(guò)對(duì)昆明小鼠肌肉注射和皮下注射緩釋長(zhǎng)效乳酸環(huán)丙沙星注射液，對(duì)其急性毒性進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果表明：小鼠肌肉注射及皮下注射給藥的LD50分別為839.27mg/kg、2504.38mg/kg，95%的可信限分別為750.76mg/kg～938.21mg/kg、1976.97mg/kg～3172.49mg/kg，符合低毒標(biāo)準(zhǔn)，說(shuō)明該產(chǎn)品皮下注射和肌肉注射使用安全。

長(zhǎng)效 乳酸環(huán)丙沙星 急性毒性

乳酸環(huán)丙沙星(Ciprofloxacin Lactate)是第三類人工合成喹諾酮類抗菌藥，具有廣譜抗菌活性，廣泛應(yīng)用于畜牧養(yǎng)殖，主要用于大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、克雷伯氏桿菌、巴氏桿菌及金黃色葡萄球菌等致病菌感染。獸醫(yī)臨床正在使用的乳酸環(huán)丙沙星注射液是其傳統(tǒng)制劑，肌肉注射吸收迅速而完全，生物利用度豬為91.9%，奶牛為82%，半衰期奶牛為5.9h，豬為4.6h[1]，主要存在藥物有效濃度維持時(shí)間短、使用次數(shù)多、大家畜不易注射等問(wèn)題。為解決上述問(wèn)題，我們利用骨架緩釋技術(shù)研制出其新型緩釋長(zhǎng)效制劑，具有延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間、降低毒副作用、節(jié)約人力成本等優(yōu)點(diǎn)。為研究緩釋長(zhǎng)效乳酸環(huán)丙沙星注射液的急性毒性和安全性，進(jìn)行了該試驗(yàn)，以期為其在獸醫(yī)臨床上的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥品 長(zhǎng)效乳酸環(huán)丙沙星注射液，規(guī)格10ml：0.4g，由山東省健牧生物藥業(yè)有限公司提供，批號(hào)：20111101、20111102、20111103。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)昆明種健康小鼠，6～8周齡，體重18～22g，雌雄各半，購(gòu)自山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。試驗(yàn)期間小鼠雌雄分籠，全價(jià)飼料喂養(yǎng)，室溫20～25℃，相對(duì)濕度40%～70%，人工晝夜(12h白晝，12h黑夜)。

1.3 試驗(yàn)方法 取小鼠100只隨機(jī)分成10組，每組10只，雌雄各半，1～5組皮下注射給藥，6～10組肌肉注射給藥。在預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上確定各組小鼠用藥量，按改良寇氏法設(shè)置組間劑量比r1(皮下注射)為1∶0.71，r2(肌肉注射)為1∶0.84。1～5組用藥劑量分別為4800.00、3600.00、2700.00、2025.00、1518.75mg/kg；6～10組用藥劑量分別為1000.00、840.00、705.60、592.70、497.87mg/kg。用生理鹽水將藥物溶解至合適的濃度，并分別按0.2ml/10g體重、0.1ml/10g體重皮下注射和肌肉注射。

1.4 觀察指標(biāo) 給藥后，即刻觀察動(dòng)物外觀體征、飲食、行為活動(dòng)及動(dòng)物死亡情況，連續(xù)觀察7d并記錄觀察結(jié)果。對(duì)死亡動(dòng)物進(jìn)行病理剖檢，記錄病變情況。

1.5 結(jié)果計(jì)算 用改進(jìn)寇氏法計(jì)算半數(shù)致死量(LD50)及其95%可信區(qū)間。公式[2]：LD50=lg-1[Xm-i(∑p-0.5)] (1)，LD50的95%可信限Sx50) (3)。式中，Xm為最大劑量的對(duì)數(shù)值；i為相鄰兩組劑量對(duì)數(shù)值之差；p為各組的死亡率，用小數(shù)表示；q為各劑量組存活率，q=1-p；∑p為各組動(dòng)物死亡率的總和；n為各組動(dòng)物數(shù)；Sx50為lgLD50的標(biāo)準(zhǔn)誤差。

2 結(jié)果與分析

2.1 急性毒性試驗(yàn)結(jié)果 見(jiàn)表1。

表1 緩釋長(zhǎng)效乳酸環(huán)丙沙星對(duì)小鼠毒性 (mg·kg-1、%)

2.2 中毒癥狀及死亡小鼠剖檢觀察 各組小鼠給藥后即見(jiàn)活動(dòng)減少，呆滯，畏寒扎堆，抽搐，食欲減退等癥狀。用藥后3h各組小鼠相繼出現(xiàn)死亡，死前精神極度沉郁，食欲廢絕，抽搐，未見(jiàn)明顯掙扎。死亡時(shí)間多集中于4～10h，死亡動(dòng)物與其性別無(wú)明顯相關(guān)性。用藥后24h，未死亡的小鼠精神、食欲逐漸恢復(fù)。繼續(xù)觀察7d，未見(jiàn)小鼠再有死亡，體重增長(zhǎng)在正常范圍內(nèi)，但是皮下和肌肉注射處出現(xiàn)不同程度的脫毛現(xiàn)象。

剖檢各死亡小鼠，2、3、4組皮下注射處有明顯的組織壞死和潰爛。肌肉注射組織器官無(wú)肉眼可見(jiàn)的明顯病變。

2.3 LD50的計(jì)算 采用改良寇氏法進(jìn)行計(jì)算，皮下注射LD50=2504.38mg/kg，其95%的可信限為1976.97～3172.49 mg/kg；肌肉注射LD50=839.27mg/kg，其95%的可信限為750.76～938.21mg/kg。

3 結(jié)論

本試驗(yàn)表明，緩釋長(zhǎng)效乳酸環(huán)丙沙星注射液按毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)屬于低毒性藥物[2]，皮下和肌肉注射分別為臨床推薦用量(10mg/kg)的250倍和84倍，臨床使用安全。李孝文等[3]報(bào)道，復(fù)方環(huán)丙沙星乳劑腹腔注射最大耐受量為8181.8mg/kg，為復(fù)方環(huán)丙沙星注射液LD50(LD50為1058.93 mg/kg)的7.726倍，毒性顯著降低。本試驗(yàn)也證明了將乳酸環(huán)丙沙星制成緩釋長(zhǎng)效制劑后肌肉注射和皮下注射給藥毒性降低[4]。

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，大劑量注射環(huán)丙沙星后，導(dǎo)致動(dòng)物皮下組織壞死，在臨床應(yīng)用時(shí)應(yīng)引起注意。

[1] 林輝, 中藥緩釋制劑的發(fā)展[J]. 海峽藥學(xué), 2002, 14(5)∶ 114-117.

[2] 獸藥急性毒性試驗(yàn)(LD50測(cè)定)指導(dǎo)原則[S]. 中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告第1247號(hào). 2009.

[3] 李孝文, 李佳緣, 楊亮等. 復(fù)方環(huán)丙沙星乳劑急性毒性試驗(yàn)[J]. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展, 2010, 31(11)∶ 56-58.

[4] 林赴田, 余蘭香, 于鋒等. 環(huán)丙氟哌酸的藥效學(xué)和毒理學(xué)研究[J], 中國(guó)抗生素雜志, 1990(4).

S859.79+4

A

1007-1733(2014)04-0011-02

2014–01–04）

濟(jì)南市企業(yè)自主創(chuàng)新計(jì)劃項(xiàng)目（編號(hào)∶201003070）

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