蘇嬌玲 李元濤 孟 馨

（深圳市婦幼保健院，廣東 深圳 518000）

七氟醚分娩鎮(zhèn)痛對(duì)新生鼠低氧缺血性耳蝸損害的影響研究

蘇嬌玲 李元濤 孟 馨

（深圳市婦幼保健院，廣東 深圳 518000）

目的 七氟醚分娩鎮(zhèn)痛對(duì)低氧缺血性耳蝸損害的影響。方法 健康雌性SD大鼠，隨機(jī)分為三組：正常組，分娩窒息組，七氟醚組，七氟醚組在分娩時(shí)給與吸入2.4%七氟烷。觀察各組大鼠MDA、NO、SOD變化以及聽(tīng)力域和毛細(xì)胞計(jì)數(shù)，結(jié)果 與對(duì)照組比較，模型組胎鼠血清MDA、NO明顯增高，ABR閾值、SOD明顯降低，毛細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯減少；與模型組相比，治療組胎鼠血清MDA、NO明顯下降，ABR閾值、SOD明顯增高，毛細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯增多。結(jié)論 七氟醚母鼠分娩鎮(zhèn)痛對(duì)新生鼠缺氧性耳蝸損害具有保護(hù)作用。

分娩窒息模型；七氟醚；耳蝸損害

圍生期低氧缺血性腦損害（hypoxic-ischemic brain damage，HIBD）是新生兒急性發(fā)病和幼兒慢性神經(jīng)損害的主要原因。圍生期胎兒宮內(nèi)缺氧、或者在分娩過(guò)程中的一些因素導(dǎo)致新生兒窒息，會(huì)導(dǎo)致不同程度的新生兒缺氧缺血性腦損害?；純簳?huì)導(dǎo)致永久性神經(jīng)功能障礙，包括聽(tīng)力障礙、腦癱、智力發(fā)育障礙、和視力障礙等[1]。HIBD引起的神經(jīng)后遺癥治療時(shí)間較久，并且費(fèi)用昂貴，增加了家庭和社會(huì)的負(fù)擔(dān)。目前臨床上的預(yù)防措施主要采取出生后低溫腦保護(hù)，療效并不理想，因此醫(yī)學(xué)工作者力圖尋找HIBD發(fā)病機(jī)制并尋求更有效的防治方法。本研究建立前列腺素誘發(fā)孕鼠分娩模型，給予母鼠吸入七氟醚分娩鎮(zhèn)痛，觀察七氟醚分娩鎮(zhèn)痛對(duì)低氧缺血性耳蝸損害的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

健康雌性SD大鼠，體質(zhì)量180～220 g，從暨南大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心購(gòu)買，合格證號(hào)2010A035無(wú)耳毒性藥物使用史。分為正常組（自然分娩），分娩窒息組（模型組），七氟醚組（治療組），每組40只。大鼠飼養(yǎng)于SPF級(jí)動(dòng)物室，室溫21～25 ℃，相對(duì)濕度40%～70%的屏障系統(tǒng)內(nèi)飼養(yǎng)。分娩窒息組通過(guò)建立前列腺素誘發(fā)分娩胎鼠窒息模型，正常組（自然分娩），分娩窒息組給與50%氧氣，七氟醚組吸入2.5%七氟醚混合50%O2。

1.2 動(dòng)物模型的建立

動(dòng)物不控制飲食，發(fā)情期將雌性大鼠和雄性大鼠（比例為5∶1）同籠飼養(yǎng)，每天通過(guò)陰道涂片，鏡下見(jiàn)到精子作為妊娠的第1天。選用妊娠21 d孕鼠為研究對(duì)象。

1.3 分娩模型建立

在妊娠第21天上午10點(diǎn)，對(duì)孕鼠管祠法給予前列腺素5 mg/kg 486個(gè)單位誘發(fā)24 h內(nèi)分娩[2]。

1.4 分娩胎鼠窒息模型建立

在妊娠第21天上午10點(diǎn)，對(duì)孕鼠管祠法給予前列腺素5 mg/kg誘發(fā)24 h內(nèi)分娩，有宮縮發(fā)作后，七氟醚組吸入2.5%七氟醚混合50%0持續(xù)吸入3 h，正常組（自然分娩）、分娩窒息組吸入氧濃度50%，氧流量2 L，持續(xù)吸入3 h。頸脫法處死母鼠，取子宮放在37 ℃水浴槽20 min后，迅速取出胎鼠，斷臍帶，擦拭身體（刺激呼吸），放在37 ℃恒溫箱保暖。

1.5 檢測(cè)指標(biāo)

血清NO、MDA、SOD濃度測(cè)定及聲波檢查。每組40只新生大鼠心腔穿刺采血，離心分離血清20 ℃保存待用。血清NO的測(cè)定采用硝酸還原酶法，按照試劑盒說(shuō)明操作。聲波檢查根據(jù)傳統(tǒng)方法[3，4]。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，多組間比較采用方差分析，兩兩組間比較采用LSD-t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 各組鼠耳蝸聽(tīng)性腦干反應(yīng)（ABR）閾值的影響

治療組其ABR閾值比用藥前明顯提高，并且與正常對(duì)照組比較，差異顯著（P＜0.05），正常對(duì)照組和模型組在整個(gè)期間ABR閾值無(wú)明顯變化，見(jiàn)表1、表2。

表1 各組大鼠耳蝸ABR閾值的影響（）

表1 各組大鼠耳蝸ABR閾值的影響（）

注：*代表與正常組比較，P＜0.05

組別 n 給藥前 給藥后正常組 40 20.8±7.6 22.10±5.1模型組 40 77.5±3.6* 76.3±4.2*

表2 各組大鼠耳蝸ABR閾值的影響（）

表2 各組大鼠耳蝸ABR閾值的影響（）

注：#代表與模型組比較，P＜0.05

組別 n 給藥前 給藥后模型組 40 77.5±3.6 76.3±4.2治療組 40 74.3±6.1# 40.9±3.4#

2.2 耳蝸鋪片及細(xì)胞計(jì)數(shù)耳蝸鋪片顯示

模型組毛細(xì)胞數(shù)量下降，形態(tài)不清，排列紊亂；治療組毛細(xì)胞數(shù)量也不高，與模型組比較，形態(tài)結(jié)構(gòu)清楚，細(xì)胞殘余量較高。外毛細(xì)胞計(jì)數(shù)與正常組比較（1106.78±76.29），模型組（532.16±165.72）明顯降低（P＜0.05），與模型組比較，治療組（749.76±102.14）外毛細(xì)胞計(jì)數(shù)分別明顯升高，（P＜0.05）。

2.3 血清NO含量的測(cè)定結(jié)果

正常組、模型組、治療組新生胎鼠血清NO含量分別為（9.8± 6.9）ng/mL、（40.5±15.7） ng/mL、（24.1±8.7）ng/mL，血清NO含量存在差別，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與對(duì)照組比較，模型組胎鼠血清MDA明顯增高、SOD明顯降低（P＜0.05）；與模型組比較，治療組胎鼠血清MDA明顯降低、SOD明顯升高（P＜0.05），見(jiàn)表3、表4。

表3 各組大鼠血清NO的含量（）

表3 各組大鼠血清NO的含量（）

注：*代表與對(duì)照組比較，P＜0.05

groups n NO(ng/L) MDA(μmol/L) SOD正常組 40 9.8±6.9 4.3±0.9 139.1±16.6模型組 40 40.5±15.7* 6.8±0.6* 102.8±11.3*

表4 各組大鼠血清NO的含量（）

表4 各組大鼠血清NO的含量（）

注：#代表與模型組比較，P＜0.05

groups n NO(ng/L) MDA(umol/L) SOD模型組 40 40.5±15.7 6.8±0.6 102.8±11.3治療組 40 24.1±8.7# 5.2±0.3# 141.5±10.4#

3 討 論

新生兒HIBD缺氧缺血（如胎兒窒息）后腦損傷的發(fā)生病因較多比如：腦細(xì)胞高能磷酸耗竭及酸中毒；自由基的產(chǎn)生、炎性細(xì)胞因子的作用，非NMDA受體被激活，引起細(xì)胞水腫等等[2]。目前的研究發(fā)現(xiàn)七氟醚等多種麻醉藥物可以通過(guò)以上途徑預(yù)防和治療缺血缺氧性腦損傷作用，另外臨床上聯(lián)合低溫或α2受體激動(dòng)劑等，對(duì)神經(jīng)可以起到保護(hù)作用。

聽(tīng)覺(jué)系統(tǒng)分為外周部分和中樞部分。研究人員指出美國(guó)每年大約有5000例不同程度的聽(tīng)力損害與缺氧缺血性腦病有關(guān)，而新生兒聽(tīng)力損害與出生時(shí)窒息缺氧有關(guān)。圍生期缺血缺氧性聽(tīng)力損害的部位可能主要在耳蝸、耳蝸核及下丘腦，主要引起聽(tīng)力障礙、智力發(fā)育落后等后遺癥。圍生期窒息缺氧缺血引起耳蝸供氧不足，耳蝸毛細(xì)胞功能等明顯受損，認(rèn)知功能障礙。研究者發(fā)現(xiàn)：臨床上檢測(cè)到聽(tīng)覺(jué)電生理異常時(shí)，耳蝸在內(nèi)的聽(tīng)覺(jué)系統(tǒng)已經(jīng)受損[5]。

分娩疼痛作為一應(yīng)激源引起一系列內(nèi)分泌反應(yīng)，使產(chǎn)婦過(guò)度緊張，影響子宮有效收縮，使產(chǎn)程延長(zhǎng)，而分娩鎮(zhèn)痛可縮短產(chǎn)程，降低胎兒缺氧和新生兒窒息。七氟醚是一種新型吸入全身麻醉劑，它具有芳香氣味，可以抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)，不刺激呼吸道，應(yīng)用于成人、兒童和老年人均安全，尤其在分娩鎮(zhèn)痛中有很好的前景。

內(nèi)耳NO的功能可能是調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度。鈣離子與外毛細(xì)胞活動(dòng)性調(diào)節(jié)有關(guān)，細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度升高可導(dǎo)致內(nèi)毛細(xì)胞神經(jīng)遞質(zhì)的釋放[6]。另外NO在內(nèi)耳的血液循環(huán)中也起作用。本研究顯示，新生大鼠缺氧缺血時(shí)，導(dǎo)致NO的分泌增多，使新生大鼠的聽(tīng)覺(jué)生理發(fā)生紊亂，造成新生大鼠的耳蝸損傷；七氟醚給予缺氧缺血的新生大鼠后，減少NO的分泌，ABR測(cè)試顯示聽(tīng)性腦千反應(yīng)閾降低。治療組與模型組相比聽(tīng)性腦干反應(yīng)閾降低，表明應(yīng)用七氟醚對(duì)缺氧缺血大鼠進(jìn)行干預(yù)，可以促進(jìn)其聽(tīng)覺(jué)生理的恢復(fù)，因此，七氟醚母鼠分娩鎮(zhèn)痛對(duì)新生鼠缺氧性耳蝸損害具有保護(hù)作用。

[1] 韓明訓(xùn),趙烏蘭.針刺及川芎嗪對(duì)急性藥物性聾豚鼠耳蝸內(nèi)氧自由基生成影響實(shí)驗(yàn)研究[J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志,2013,22(10): 782-784.

[2] Catheline G,Touquet B,Besson JM,et al.Parturition in the rat:a physiological pain model[J].Anesthesiology,2006,104(6):1257-1265.

[3] 謝利紅,唐安洲,尹時(shí)華.60cO照射對(duì)豚鼠聽(tīng)力及耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞Caspase表達(dá)的影響[J].聽(tīng)力學(xué)及言語(yǔ)疾病雜志,2012,20(1):32-35.

[4] 王愛(ài)梅,湯浩,寶東艷.丹參注射液對(duì)慶大霉素耳中毒豚鼠耳蝸NOS異構(gòu)體表達(dá)的影響[J].中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志,2011,27(2): 246-248.

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[6] 金大玉,崔廣帥,邢巍巍.電離輻射對(duì)耳蝸毛細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響[J].聽(tīng)力學(xué)及言語(yǔ)疾病雜志,2010,18(5):496-497.

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1671-8194（2014）18-0092-02