周和超陳興貴陳華普余忠華

（1 廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腫瘤中心，廣東 湛江 524001；2 廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院臨床科研中心，廣東 湛江 524001）

HIF-1α在放療敏感性不同的宮頸鱗癌組織中的表達(dá)及意義

周和超1陳興貴1陳華普2余忠華1

（1 廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腫瘤中心，廣東 湛江 524001；2 廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院臨床科研中心，廣東 湛江 524001）

目的 探討不同放療敏感性宮頸癌組織中HIF-lα蛋白的表達(dá)及其與放療敏感性的關(guān)系。方法 選取宮頸鱗癌（Ⅱb、Ⅲa期）患者40例，放療前行宮頸組織活檢并保存標(biāo)本。放療結(jié)束3個(gè)月后，根據(jù)WHO實(shí)體瘤療效判斷標(biāo)準(zhǔn)，將保存的宮頸癌組織標(biāo)本分為高敏感組（28例）及低敏感組（12例），應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測組織中HIF-lα蛋白的表達(dá)。結(jié)果 HIF-lα蛋白在高敏感組的表達(dá)強(qiáng)度高于低敏感組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；HIF-lα蛋白在Ⅲa期患者宮頸癌組織中的表達(dá)強(qiáng)度稍高于Ⅱb組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 乏氧誘導(dǎo)因子-lα可能是導(dǎo)致宮頸癌放療敏感性下降的一個(gè)重要因素。

乏氧誘導(dǎo)因子-lα；宮頸癌；放射敏感性

放射治療是局部中晚期宮頸癌的主要治療手段，但在放射治療中發(fā)現(xiàn)存在對(duì)放療敏感或抵抗的患者，現(xiàn)研究表明發(fā)生放療抵抗主要與腫瘤細(xì)胞內(nèi)存在乏氧細(xì)胞有關(guān)[1]。乏氧激活的最重要的核轉(zhuǎn)錄因子是乏氧誘導(dǎo)因子-lα（HIF-lα），已有報(bào)道宮頸癌組織較腺瘤和正常組織HIF-lα mRNA和蛋白水平的表達(dá)明顯增高[2]。我們采用免疫組織化學(xué)法檢測放療敏感性不同的宮頸鱗癌組織中HIF-lα的表達(dá)水平，探討乏氧誘導(dǎo)因子-lα的作用?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般臨床資料

研究的病例來自2007年1月至2013年1月在我院門診和住院女性患者，共40例，年齡32～65歲，平均（52.4±2.1）歲。臨床分期均為Ⅱb、Ⅲa 期（FIGO分期），其中Ⅱb期28例，Ⅲa期12例。組織樣品為放療前活檢標(biāo)本，病理檢查結(jié)果均為高-中分化鱗癌。所有病例均接受根治性放療，并同步化療（含鉑類藥物為基礎(chǔ)的化療方案）。治療前、放療中期及放療后3個(gè)月，均行婦科檢查、MRI或CT掃描，治療結(jié)束后門診定期復(fù)查，觀察并記錄瘤體變化情況。療效評(píng)價(jià)在治療后3個(gè)月復(fù)查時(shí)進(jìn)行，近期療效判斷按WHO實(shí)體瘤療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，分為完全緩解（CR）：可見腫瘤病變完全消失, 維持4周以上；部分緩解（PR）：腫瘤病灶的最大直徑及其最大的垂直橫徑的乘積縮小50%以上，其他病灶無增大，無新病灶出現(xiàn)，維持4周以上；穩(wěn)定或無變化（SD）：腫瘤病灶的兩徑乘積縮小不足50%，或增大不超過25%，無新病灶出現(xiàn)，維持4周以上；進(jìn)展（PD）：新病灶出現(xiàn)或原有病變估計(jì)增大25%。其中CR為高敏感組，PR+NC＋PD為低敏感組。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

將放療前活檢的宮頸癌組織投入配制好的10%中性甲醛液中固定24～48 h，然后將固定好的標(biāo)本經(jīng)梯度酒精脫水，按標(biāo)準(zhǔn)的組織學(xué)步驟進(jìn)行浸蠟，包埋，4 μm連續(xù)切片，采用免疫組織化學(xué)SABC法檢測兩組腫瘤細(xì)胞中HIF-lα的表達(dá)，具體步驟由專人嚴(yán)格根據(jù)SABC試劑盒提供的說明書操作，HIF-lα陽性細(xì)胞主要著色定位于細(xì)胞胞質(zhì)，胞核也有少許著色，每張片子均有兩位病理醫(yī)師確認(rèn)，免疫組化染色結(jié)果采用Image-Plo Plus圖像處理分析軟件進(jìn)行掃描，測定IOD值并計(jì)算平均值后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。IOD值越大，表示表達(dá)量越多。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料采用均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差（）描述。兩組間比較用t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 40例宮頸鱗癌患者放療近期療效

對(duì)40例宮頸鱗癌患者放療后3個(gè)月進(jìn)行療效評(píng)價(jià)，其中CR為24例，占60%（24/40）；PR為16例，占40%（16/40）；NC為0例；PD為0例。即本研究病例高敏感組24例，低敏感組16例。見表1。

表1 40例宮頸癌患者放療結(jié)束3個(gè)月的近期療效

2.2 HIF-lα在放療敏感性不同宮頸癌組織中的表達(dá)

HIF-lα陽性染色主要著色定位于宮頸癌細(xì)胞胞質(zhì)，胞核也有少許著色。低敏感組HIF-lα蛋白表達(dá)明顯增多，多呈強(qiáng)陽性表達(dá)；而高敏感組的HIF-lα蛋白表達(dá)少，且大多為弱表達(dá)。經(jīng)半定量分析結(jié)果顯示，兩組中HIF-lα表達(dá)量的比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 HIF-lα在放療敏感性不同宮頸癌組織中的表達(dá)

2.3 HIF-lα在不同臨床分期宮頸癌組織中的表達(dá)

Ⅲa期患者HIF-lα蛋白表達(dá)水平有所增多，與Ⅱb期患者比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

3 討 論

宮頸癌的發(fā)病率占我國女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的首位，嚴(yán)重威脅著女性身心健康，其治療原則主要是以手術(shù)治療為主，輔以放化療。近些年來，宮頸癌的綜合治療效果獲得顯著提高，放射治療總的5年生存率達(dá)到55%～65%，但在治療中常出現(xiàn)對(duì)放療抵抗的個(gè)體，療效欠佳，這主要與腫瘤內(nèi)存在乏氧細(xì)胞有關(guān)[3]。缺氧微環(huán)境的出現(xiàn)，是宮頸癌組織對(duì)放療抵抗、化放療后復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移的重要因素[4]。

表3 HIF-lα在不同臨床分期宮頸癌組織中的表達(dá)

乏氧誘導(dǎo)因子-1α（hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）是乏氧激活的最重要的核轉(zhuǎn)錄因子，其幾乎調(diào)控了乏氧所誘導(dǎo)的所有基因的轉(zhuǎn)錄。HIF-lα調(diào)節(jié)的基因涉及離子代謝、細(xì)胞能量代謝、血管發(fā)生及舒縮控制，介導(dǎo)轉(zhuǎn)錄的基因有EPO、VEGF、糖酵解酶的基因等[5]。HIF-1α可能通過抑制腫瘤細(xì)胞凋亡、調(diào)控DNA修復(fù)過程的相關(guān)因子表達(dá)、上調(diào)VEGF轉(zhuǎn)錄而促進(jìn)新的血管形成等，使腫瘤細(xì)胞適應(yīng)乏氧微環(huán)境，降低電離輻射對(duì)腫瘤細(xì)胞DNA的損傷，從而降低放療敏感性[6]。有研究表明在肺癌、口咽癌、胃癌、宮頸癌、前列腺癌等惡性腫瘤中HIF-lα蛋白表達(dá)明顯增高，且和預(yù)后、病死率呈相關(guān)性[7,8]。本研究發(fā)現(xiàn)，HIF-1α在宮頸癌組織中表達(dá)增強(qiáng)，且低敏感組呈高表達(dá)，與高敏感組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與多數(shù)研究一致，我們推測HIF-lα在宮頸癌組織的表達(dá)增高可能是引起放射敏感性下降的機(jī)制之一。目前關(guān)于HIF-1α的表達(dá)是否與分化程度和臨床分期有關(guān)，各家報(bào)道不一。楊斌[9]等報(bào)道HIF-1α的表達(dá)與宮頸鱗癌的分化程度、臨床分期呈正相關(guān)。本研究結(jié)果顯示HIF的表達(dá)與臨床分期有關(guān)，Ⅲa期患者HIF-lα蛋白表達(dá)水平有所增多，與Ⅱb期患者比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與上述報(bào)道一致，但因?yàn)楸狙芯恐形慈虢M低分化癌病例，有關(guān)HIF-1α的表達(dá)與宮頸鱗癌的分化程度的關(guān)系有待進(jìn)一步的研究。

由于乏氧微環(huán)境的存在及HIF-1α在宮頸癌中所起的關(guān)鍵作用，采用RNA干擾HIF-1α增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的放射敏感性在細(xì)胞水平和裸鼠移植瘤的相關(guān)研究已有報(bào)道[10]。我們的研究進(jìn)一步證實(shí)了HIF-1α和宮頸癌放療敏感性下降的關(guān)系，這為宮頸癌的放射增敏治療提供了方向。

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The Expression Level and Significance of HIF-1α in Human Cervical Squamous Cell Carcinoma Tissues with Different Radiosensitivities

ZHOU He-chao1, CHEN Xing-gui1, CHEN Hua-pu2, YU Zhong-hua1
(1 Department of Oncology Center, The Affiliated Hospital of Guangdong Medical College, Zhanjiang 524001, China; 2 Clinical Research Center, The Affiliated Hospital of Guangdong Medical College, Zhanjiang 524001, China)

Objective To study the expression of HIF-lα in human cervical squamous cell carcinoma tissues and its association with radiosensitivity. Methods 40 samples from patients with cervical squamous cell carcinoma (Ⅱb, Ⅲa)were collected and preserved before radiotherapy.Then the samples were divided into two groups: the high radio-sensitivity group and the low radio-sensitivity group, according to according to the WHO response evaluation criteria in solid tumors in 3 months after the end of radiotherapy. The HIF-lα protein were detected by immunohistochemistry technology in tissue. Results The expression levels of HIF-lα in the low radio-sensitivity group were higher than those in the high radio-sensitivity group significantly(P＜0.05) ; The expression levels of HIF-lα in the stage Ⅲa were higher than those in the stage Ⅱb significantly(P＜0.05). Conclusion HIF-lα may be an important factor resulting in decreased sensitivity of cervical carcinoma in radiotherapy.

Hypoxia-inducible factor-1α; Cervical carcinoma; Radiosensitivity

R737.33

B

1671-8194（2014）18-0060-03