傅永波 季衛(wèi)鋒 馬鎮(zhèn)川

（1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)，浙江 杭州 310053；2.浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，浙江 杭州 310006）

人軟骨降解標(biāo)志物尿Ⅱ型膠原羧基段多肽（CTX-Ⅱ）與腰椎間盤突出癥及其中醫(yī)證型的相關(guān)性研究

傅永波1季衛(wèi)鋒2馬鎮(zhèn)川2

（1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)，浙江 杭州 310053；2.浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，浙江 杭州 310006）

目的分析尿中尿Ⅱ型膠原羧基段多肽（CTX-Ⅱ）水平與患者腰椎間盤突出癥的關(guān)系。方法隨機(jī)納入20～60歲的腰椎間盤突出癥患者40例，健康體檢患者20例，收集留取患者尿樣，用人骨退化特異標(biāo)志物（CTX-Ⅱ）ELISA試劑盒測(cè)定尿液中的CTX-Ⅱ值，然后對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行整理和分析。結(jié)果椎間盤突出患者中存在顯著差異（P＜0.05），其尿中Ⅱ型膠原C端肽明顯升高。青壯年患者尿中CTX-Ⅱ水平均較中老年患者尿中CTX-Ⅱ水平高，血瘀型患者和濕熱型患者尿中CTX-Ⅱ水平較肝腎虧虛型患者尿中CTX-Ⅱ水平高（P＜0.05），而其他各組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論尿中CTX-Ⅱ水平的升高與腰椎間盤突出癥的發(fā)生具有正相關(guān)性，尿中CTX-Ⅱ水平青壯年人群較中老年人群高，血瘀型患者和濕熱型患者較肝腎虧虛型患者高。

軟骨降解標(biāo)志物 腰椎間盤突出 中醫(yī)證型 Ⅱ型膠原羧基段多肽

腰椎間盤退變性疾病病理特點(diǎn)主要是椎間盤組織含水量的下降以及軟骨終板的退變，從而導(dǎo)致椎間盤纖維環(huán)破裂，髓核突出［1-2］。目前，主要依靠臨床表現(xiàn)（如疼痛、感覺減退、活動(dòng)受限等）、放射影像來診斷腰椎間盤突出癥。但是X線、CT及臨床體征對(duì)軟骨退變的敏感性較低，而MRI雖然能早期診斷腰椎間盤退變［3-4］，但由于價(jià)格比較昂貴，很難以普及和臨床應(yīng)用。有研究表明，尿Ⅱ型膠原羧基段多肽（CTX-Ⅱ）能早期預(yù)測(cè)關(guān)節(jié)軟骨破壞進(jìn)展的情況［5］，在椎間盤退變發(fā)生后，患者尿液中CTX-Ⅱ水平也有顯著升高［6］。另有表明頸椎不穩(wěn)可誘發(fā)鄰近節(jié)段頸椎退變，表現(xiàn)為椎間盤發(fā)生形態(tài)學(xué)變化，蛋白多糖、Ⅱ型膠原含量下降［7］。說明尿中CTX-Ⅱ水平與椎間盤退變具有正相關(guān)性，為早期預(yù)防和診斷腰椎間盤退行性疾病提供有力證據(jù)。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為腰椎間盤退變性疾病屬 “痹證”、“痿證”等范疇?！皻馓撗觥?、“本虛標(biāo)實(shí)”是椎間盤退變的重要病理基礎(chǔ)。目前《中醫(yī)病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)》將其分為血瘀型、寒濕型、濕熱型、肝腎虧虛4型。臨床上以血瘀型和肝腎虧虛型最為多見，通過探究中醫(yī)證型和CTX-Ⅱ的關(guān)系，尋找防治腰椎間盤退變性疾病的新思路和新方法?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 研究對(duì)象為浙江省中醫(yī)院骨科病房的40例腰椎間盤突出癥患者和體檢中心20例健康人群，均無其他骨骼系統(tǒng)疾病。分別確定為A組和B組，同時(shí)根據(jù)中醫(yī)辨證分析。A組男性22例，女性18例，其中20～39歲21例，40～60歲19例，中位年齡39.3歲。分型：血瘀型16例，寒濕型5例，濕熱型8例，肝腎虧虛型11例。B組男性11例，女性9例；年齡20～39歲11例，40～60歲9例，中位年齡41.00歲。A、B兩組患者年齡、性別差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 尿樣收集 收集兩組患者晨尿10 mL，密封保存于-20℃冰箱。

1.3 檢測(cè)方法 采用人骨退化特異標(biāo)志物（CTX-Ⅱ）ELISA試劑盒，將稀釋離心后的檢測(cè)液與底物溶液反應(yīng)，最后加入終止溶液，用酶聯(lián)儀在450 nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。底物溶液：四甲基聯(lián)苯胺（TMB）底物溶于酸性溶液中。終止液：2NH2SO4。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 根據(jù)樣品的OD值，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線（使用專業(yè)制作曲線軟件curve expert 1.3進(jìn)行分析），測(cè)定結(jié)果用SPSS 17進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，將兩組患者的CTX-Ⅱ校正值進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)、正態(tài)性分布后，再將組與組之間的單樣本作方差分析，并分別對(duì)腰椎間盤突出癥患者的年齡、性別及中醫(yī)證型與尿中CTX-Ⅱ進(jìn)行回歸分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者尿液中CTX-Ⅱ測(cè)定結(jié)果 見表1。A組20～39歲，年齡段患者尿CTX-Ⅱ值高于40～60歲年齡段患者（P＜0.05）；B組不同年齡段CTX-Ⅱ值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；A組、B組相同年齡段CTX-Ⅱ值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。由此可知，A組尿中CTX-Ⅱ水平較同一年齡段的B組尿中CTX-Ⅱ水平高；同一組別中青壯年人群尿中CTX-Ⅱ含量較中老年者尿中CTX-Ⅱ含量高。

表1 兩組不同年齡段尿中的CTX-Ⅱ值測(cè)定結(jié)果（g/moL，±s）

表1 兩組不同年齡段尿中的CTX-Ⅱ值測(cè)定結(jié)果（g/moL，±s）

與本組40～60歲比較，*P＜0.05；與B組同年齡段比較，△P＜0.05。

組 別 年齡（歲）n 尿CTX-ⅡA組 20～39 40～60 B組 20～39 21 55.5±10.3*△19 39.1±6.6△11 43.3±10.0*△40～609 32.2±7.6△

2.2 不同中醫(yī)證型患者尿液中CTX-Ⅱ值結(jié)果 見表2。血瘀型組和寒濕型組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；血瘀型組和濕熱型組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；血瘀型組和肝腎虧虛型組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；寒濕型組和濕熱型組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；寒濕型組和肝腎虧虛型組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；濕熱型組和肝腎虧虛型組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。由此得出，血瘀型患者尿中CTX-Ⅱ水平較寒濕型、肝腎虧虛型患者高，濕熱型患者尿中CTX-Ⅱ水平也較肝腎虧虛型患者高，其他各組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

表2 不同證型患者尿中CTX-Ⅱ值測(cè)定結(jié)果（g/moL，±s）

表2 不同證型患者尿中CTX-Ⅱ值測(cè)定結(jié)果（g/moL，±s）

與寒濕型比較，△P＜0.05；與血瘀型比較，▲P＜0.05；與濕熱型比較，#P＜0.05。

證型n 尿CTX-Ⅱ血瘀型寒濕型濕熱型16 56.1±10.1△5 39.6±7.6▲8 48.9±11.8肝腎虧虛型11 38.3±6.7▲#

3 討論

自Eyre等在1987年首次發(fā)現(xiàn)CTX-Ⅱ后，一直是以生物標(biāo)記物的形式，研究軟骨退變變性疾?。?］。近年許多學(xué)者也都將對(duì)CTX-Ⅱ的研究重點(diǎn)放在骨性關(guān)節(jié)炎上，而對(duì)椎間盤突出癥的相關(guān)性研究相對(duì)較少，但椎間盤作為軟骨的一部分，主要成分就是Ⅰ、Ⅱ型膠原，Ⅰ、Ⅱ型膠原之間的比例失調(diào)，是椎間盤退變最直接的原因。近來的一些研究也顯示，腰椎間盤退變的患者中往往都存在尿中CTX-Ⅱ水平的升高。因?yàn)樽甸g盤變性后，Ⅱ型膠原不斷降解，降解后產(chǎn)物隨尿液排出體外。所以尿中的CTX-Ⅱ水平健康人群都低于腰椎間盤突出的患者，這與本試驗(yàn)的結(jié)果相符。在青壯年的時(shí)候，由于組織代謝活躍，細(xì)胞的凋零和重生能力較快，即生活條件及自身體質(zhì)的改變很容易導(dǎo)致椎間盤發(fā)生退行改變，整個(gè)椎間盤的Ⅰ型膠原正比例上升，Ⅱ型膠原降解迅速，故青壯年時(shí)期尿中CTX-Ⅱ水平越高，這與本試驗(yàn)的結(jié)果是一致的，即20～40歲人群的尿中CTX-Ⅱ水平較40～60歲人群尿中的CTX-Ⅱ高。

中醫(yī)對(duì)腰椎間盤突出很早就有認(rèn)識(shí)。如《素問·刺腰痛》篇中說“衡絡(luò)之脈令人腰痛，不可以俯仰，仰則恐仆，得之舉重傷腰”，《醫(yī)學(xué)心悟》也說“腰痛拘急，牽引腿足”。目前，對(duì)腰椎間盤突出癥的中醫(yī)分型較多，大多從“氣血”、“虛實(shí)”進(jìn)行辨證。但較為多見的是血瘀型、寒濕型、濕熱型、肝腎虧虛4型。有研究表明，益氣化瘀法能夠使退變的椎間盤高度明顯增加，防止纖維環(huán)撕裂，增加膠原聯(lián)系，減少裂隙，防止軟骨終板非鈣化層膠原基質(zhì)排列紊亂［9］。益氣化瘀法還能降低軟骨終板膠原表達(dá)，增加椎間盤髓核細(xì)胞外基質(zhì)中Ⅱ型膠原的蛋白表達(dá)，其機(jī)制是促進(jìn)Ⅱ型膠原基因轉(zhuǎn)錄過程中一些酶的作用，開啟了Ⅱ型膠原合成的基因表達(dá)。即血瘀證腰突癥患者，其Ⅱ型膠原的降解可能較其他證型劇烈，此類患者尿中的CTX-Ⅱ水平較其他證型尿中CTX-Ⅱ水平高，與本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果基本相符。

綜上所述，尿中CTX-Ⅱ水平的升高與腰椎間盤突出癥的發(fā)生具有相關(guān)性，且青壯年尿中CTX-Ⅱ水平較中老年者尿中CTX-Ⅱ水平高。血瘀型患者尿中CTX-Ⅱ水平較寒濕型、肝腎虧虛型患者高，濕熱型患者尿中CTX-Ⅱ水平也較肝腎虧虛型患者高，其他各組間無明顯差異。但因樣本基數(shù)較小，且受到諸多因素的影響，故中醫(yī)證型之間對(duì)尿中CTX-Ⅱ水平的影響關(guān)系及機(jī)制仍有待進(jìn)一步的研究。而另一方面，通過尿常規(guī)檢測(cè)CTX-Ⅱ來達(dá)到早期診斷腰椎間盤突出癥的情況，將理論運(yùn)用于臨床實(shí)踐還是一個(gè)漫長(zhǎng)的過程。

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R681.5+3

A

1004-745X（2014）08-1563-03

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2013-12-08）