劉亦恒，吳多慶，朱振標(biāo)，黃重，陳曉虹，張海英

(1.?？谑腥嗣襻t(yī)院骨科中心，海南?？?570208；2.海南醫(yī)學(xué)院人體解剖學(xué)教研室，海南?？?71101)

巴戟天多糖對(duì)去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松癥的防治作用

劉亦恒1，吳多慶1，朱振標(biāo)1，黃重1，陳曉虹1，張海英2

(1.?？谑腥嗣襻t(yī)院骨科中心，海南?？?570208；2.海南醫(yī)學(xué)院人體解剖學(xué)教研室，海南海口571101)

目的觀察巴戟天多糖對(duì)去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松癥的影響。方法成年雌性SD大鼠30只，隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、巴戟天多糖組，每組10只。采用摘取雙側(cè)卵巢法建立骨質(zhì)疏松模型，造模2周后開(kāi)始給藥，給藥3個(gè)月后觀察巴戟多糖天對(duì)大鼠骨密度、骨礦物質(zhì)含量、血清雌二醇、骨鈣素及1，25-二羥基維生素D3的影響。結(jié)果給藥3個(gè)月后，與模型組比較，巴戟天多糖組能顯著提高去卵巢大鼠的骨密度、骨礦物質(zhì)、1，25-二羥基維生素D及骨鈣素的含量。結(jié)論巴戟天多糖對(duì)去卵巢所致的大鼠骨質(zhì)疏松癥具有良好的防治作用。

骨質(zhì)疏松；去卵巢大鼠；巴戟天多糖

骨質(zhì)疏松癥(Osteoporosis，OP)是以骨量減少、骨組織顯微結(jié)構(gòu)退化為特征，以致骨的脆性增高而骨折危險(xiǎn)性增加的一種全身性骨病，是老年人，尤其是絕經(jīng)后婦女最常見(jiàn)的代謝性骨病。中醫(yī)理論認(rèn)為：腎為先天之本，“主骨生髓”，骨的生長(zhǎng)、發(fā)育、強(qiáng)弱與腎精盛衰關(guān)系密切。南藥巴戟天屬茜草科植物巴戟天(Morinda officialis How)的干燥根，具有補(bǔ)腎助陽(yáng)、強(qiáng)壯筋骨的作用?，F(xiàn)代研究證明，巴戟天含有多種化學(xué)成分，如蒽醌類(lèi)、多糖類(lèi)、氨基酸、烯醚萜及苷類(lèi)等，多糖類(lèi)在巴戟天含量占20%左右[1-2]。前期實(shí)驗(yàn)表明，巴戟天多糖多糖能促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖能力和ALP的活性，影響骨代謝[3]。本實(shí)驗(yàn)觀察巴戟天多糖對(duì)雌性去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松癥的防治作用，為進(jìn)一步研究巴戟天多糖治療骨質(zhì)疏松癥提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器健康雌性SD大鼠30只，3個(gè)月齡，體重(270±20)g，購(gòu)自海南醫(yī)學(xué)院；巴戟天藥材產(chǎn)于海南萬(wàn)寧；大鼠雌二醇放射免疫測(cè)定盒(125I標(biāo)記)購(gòu)自北京北方生物技術(shù)研究所；骨鈣素、1，25-二羥基維生素D3、雌二醇ELISA試劑盒購(gòu)自上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司；DPX-L型雙能X射線骨密度儀(美國(guó)Lunar公司)；酶標(biāo)儀(北京六一儀器)等。

1.2 方法

1.2.1 巴戟天多糖的制備取200 g巴戟天干制品粉碎，烘干，過(guò)40目篩，加入10倍體積的水，煮沸1 h，濾過(guò)，再加入3倍體積的乙醇，靜置12 h，收集沉淀，得巴戟天燥粗多糖；粗多糖加水復(fù)溶，用Sevag法脫蛋白(重復(fù)2次)，活性炭脫色，無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，濾過(guò)。用蒸餾水溶解沉淀物，用無(wú)水乙醇加至其濃度為85%，離心收集沉淀物，得巴戟天多糖純品。由海南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系制備鑒定。

1.2.2 去卵巢大鼠模型制備隨機(jī)取20只大鼠，用2%戊巴比妥鈉40 mg/kg腹腔麻醉，取背側(cè)雙切口。于脊柱外側(cè)2 cm，髂前上棘上方1.5 cm，備皮去毛，消毒后切開(kāi)局部皮膚、肌肉和腹膜，輕輕將脂肪團(tuán)拉開(kāi)并分離，暴露卵巢，結(jié)扎卵巢下端輸卵管，摘除卵巢，縫合切口。另10只大鼠只做手術(shù)切口，不去除卵巢。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)分組30只雌性SD大鼠分為三組，每組10只，分別為模型組(生理鹽水+去卵巢)，假手術(shù)組(生理鹽水+假手術(shù))，巴戟天多糖組(去卵巢+ 100 mg/kg巴戟天多糖)。術(shù)后2周開(kāi)始，巴戟天多糖組予灌胃給藥，假手術(shù)組和模型組給予等體積的生理鹽水，共12周。

1.2.4 骨密度及骨鈣、骨磷測(cè)定于術(shù)后3個(gè)月，在麻醉狀態(tài)下對(duì)各組大鼠用雙能X射線骨密度儀的小動(dòng)物測(cè)量軟件測(cè)定右股骨頸的骨密度(BMD)。骨密度測(cè)定后收集大鼠右側(cè)股骨，馬福爐800℃灰化，灰化后標(biāo)本測(cè)定骨中鈣、磷的百分含量。

1.2.5 血清生化指標(biāo)測(cè)定于術(shù)后3個(gè)月采血，分別按照試劑盒操作說(shuō)明檢測(cè)血清雌二醇、血清骨鈣素及1，25-二羥基維生素D3水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用-SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±S)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 巴戟天多糖對(duì)去卵巢大鼠骨密度及骨鈣、磷的影響與假手術(shù)組比較，模型組的BMD和骨鈣、磷含量均降低，兩者之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)；與模型組較，巴戟天多糖組的BMD和骨鈣、磷含量均升高，兩組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)，見(jiàn)表1。

表1 巴戟天多糖對(duì)去卵巢大鼠骨密度及骨鈣、磷的影響(±S)

表1 巴戟天多糖對(duì)去卵巢大鼠骨密度及骨鈣、磷的影響(±S)

注：與假手術(shù)組比較，aP＜0.01，bP＜0. 05；與模型組比較，cP＜0.05，dP＜0.01。

組別模型組假手術(shù)組巴戟天多糖組動(dòng)物數(shù)(只) 10 10 10骨密度(g/cm2) 0.158±0.015a0.227±0.024 0.219±0.012d骨鈣(%) 61.47±2.86b64.98±1.35 64.19±1.26c骨磷(%) 27.64±1.21b29.74±1.47 29.37±1.85c

2.2 巴戟天多糖對(duì)大鼠血清雌二醇、骨鈣素和1，25-二羥基維生素D3的影響與假手術(shù)組比較，模型組大鼠血清雌二醇、骨鈣素和1，25-二羥基維生素D3水平顯著降低，兩者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)；與模型組比較，巴戟天多糖組鈣素和1，25-二羥基維生素D3水平升高，兩者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)，見(jiàn)表2。

表2 巴戟天多糖對(duì)去卵巢大鼠血清雌二醇、骨鈣素和1，25-二羥基維生素D的影響(±S)

表2 巴戟天多糖對(duì)去卵巢大鼠血清雌二醇、骨鈣素和1，25-二羥基維生素D的影響(±S)

注：與假手術(shù)組比較，aP＜0.01，bP＜0. 05；與模型組比較，cP＜0.05，dP＜0.01。

組別模型組假手術(shù)組巴戟天多糖組動(dòng)物數(shù)(只) 10 10 10雌二醇(ng/L) 9.820±1.024a18.145±3.741 10.841±4.512骨鈣素(μg/L) 1.489±0.157b2.586±0.345 2.605±0.378c1，25-二羥基維生素D3(ng/L) 2.822±0.244a11.206±0821 7.186±0.428d

3 討論

骨質(zhì)疏松癥是老年人尤其是絕經(jīng)后婦女常見(jiàn)、多發(fā)的骨代謝疾病。婦女絕經(jīng)后，由于卵巢功能下降，導(dǎo)致雌激素水平急劇下降，繼發(fā)甲狀旁腺功能亢進(jìn)使降鈣素分泌不足，從而導(dǎo)致骨代謝平衡破壞，骨吸收大于骨形成，骨量逐漸減少和骨組織微結(jié)構(gòu)退行性病變。故如何預(yù)防骨質(zhì)疏松癥一直是相關(guān)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。

巴戟天是我國(guó)四大南藥之一，具有補(bǔ)腎陽(yáng)、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕的功效。近年來(lái)，有研究表明巴戟天能增加去卵巢小鼠子宮重量及血清雌二醇含量，具有雌激素樣作用[4]。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)巴戟天多糖可以刺激體外培養(yǎng)的骨髓基質(zhì)細(xì)胞及成骨細(xì)胞增殖[5]，這預(yù)示著巴戟天用于防治骨質(zhì)疏松癥具有重要的研究意義。

骨密度(BMD)值是反映骨質(zhì)疏松程度，預(yù)測(cè)骨折危險(xiǎn)性的重要依據(jù)，也是診斷骨質(zhì)疏松的重要指標(biāo)。骨質(zhì)疏松癥總是伴隨著骨總量的丟失，即是鈣、磷的喪失，因此應(yīng)用骨鈣、骨磷含量的變化評(píng)價(jià)骨質(zhì)疏松藥物治療的有效性已得到了廣泛的認(rèn)同。大鼠切除卵巢后，模型組的BMD和骨鈣、骨磷含量下降，給藥3個(gè)月后巴戟天多糖組大鼠BMD和骨鈣、骨磷含量均升高，說(shuō)明巴戟天多糖有促進(jìn)大鼠骨礦物含量增加，提高BMD的作用。

骨鈣素又稱(chēng)骨γ-羧谷氨酸包含蛋白(Bone gamma-carboxyglutamic-acid-containing proteins，BGP)，是成骨細(xì)胞合成并分泌的，在鈣的生物調(diào)節(jié)中起著重要的調(diào)節(jié)作用。大鼠切除卵巢后，由于雌激素減少，骨平衡被破壞，骨轉(zhuǎn)換增加，骨量丟失增多，從而形成骨質(zhì)疏松。實(shí)驗(yàn)中巴戟天多糖組BGP水平升高，提示巴戟天多糖具有抵制骨吸收，降低骨轉(zhuǎn)換，提高骨質(zhì)量的作用。

維生素D(Vitamin D)為代謝物及其類(lèi)似物對(duì)骨質(zhì)疏松的防治有重要作用。1，25-二羥基維生素D3是維生素D生物活性的最高形式[6]，其主要靶器官是小腸黏膜、骨骼、腎小管，在維持鈣、磷代謝平衡中有重要作用，能增加腸道對(duì)鈣的吸收。已有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)了血清1，25-二羥基維生素D3與骨密度之間有緊密關(guān)聯(lián)，還能促成骨細(xì)胞的增殖和堿性磷酸酶的合成[7-8]。大鼠切除卵巢后，模型組中的1，25-二羥基維生素D3水平下降，給藥3個(gè)月后巴戟天多糖組1，25-二羥基維生素D3升高，說(shuō)明巴戟天多糖提高血清中1，25-二羥基維生素D3含量，達(dá)到促進(jìn)腸道對(duì)鈣、磷吸收的作用。

綜上所述，巴戟天多糖可以通過(guò)提高骨鈣素含量達(dá)到促進(jìn)成骨的作用，增加了去卵巢大鼠骨密度、骨礦物質(zhì)含量；通過(guò)提高1，25-二羥基維生素D3濃度，促進(jìn)腸道對(duì)鈣、磷的吸收，維持血鈣濃度以促進(jìn)鈣在骨的沉積，具有減緩骨吸收的作用。對(duì)于去卵巢大鼠所致骨質(zhì)疏松有較好的防治作用。

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Protective and therapeutic effects of morindae officinails polysaccharides on osteoporosis of ovariectomized rats.

LIU Yi-heng1,WU Duo-qing1,ZHU Zhen-biao1,HUANG Zhong1,CHEN Xiao-hong1,ZHANG Hai-ying2.1. Depantment of Orthopaedics,Haikou Municipal People's Hospital,Haikou 570208,Hainan,CHINA;2.Department of Anatomy,Hainan Medical College,Haikou 571101,Hainan,CHINA

ObjectiveTo observe the protective and therapeutic effects of morindae officinails polysaccharides on osteoporosis of ovariectomized rats.MethodsThirty adult female SD rats were divided randomly into sham-operated group,model group,morindae officinails polysaccharides group.Every group had ten rats.We extracted bilateral ovaries to establish osteoporosis model,which were treated with medicine two weeks postoperationally for consecutively 3 months.Then we observed the protective and therapeutic effects of morindae officinails polysaccharides on rat bone mineral density(BMD),bone mineral content,estrogen,osteocalcin,1,25-dihydroxyvitamin D3. ResultsAfter 3 months,the morindae officinails polysaccharides group could significantly improve the BMD,bone mineral content,osteocalcin,1,25-dihydroxyvitamin D3 of the ovariectomized rats,compared with model group. ConclusionMorindae officinails polysaccharides can antagonize osteoporosis of the ovariectomized rats.

Osteoporosis;Ovariectomized rats;Morindae officinails polysaccharides

R-332

A

1003—6350（2014）20—2973—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.20.1170

2014-05-05)

海南省自然科學(xué)基金(編號(hào)：811156)；海南省衛(wèi)生廳資助項(xiàng)目(編號(hào)：瓊衛(wèi)2010-69)；?？谑兄攸c(diǎn)科技項(xiàng)目(編號(hào)：2011-0135)

劉亦恒。E-mail：1398345154@qq.com