摘要：目的 探討生活飲用水中菌落總數(shù)的測(cè)定方法。方法 用普通牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基在保證無(wú)菌的環(huán)境下，采取生活飲用水的樣品，利用培養(yǎng)基制作平板。對(duì)生活飲用水用平板菌落技術(shù)測(cè)定菌落總數(shù)從而判斷生活飲用水是否符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，是否受到污染。結(jié)果 生活飲用水中菌落平均數(shù)為35，在國(guó)家飲用水標(biāo)準(zhǔn)范圍之內(nèi)。結(jié)論 本實(shí)驗(yàn)的成敗在于滅菌、無(wú)菌操作技術(shù)、培養(yǎng)基的溫度等方面是否操作正確，因此接種過(guò)程務(wù)必防止雜菌的侵入。

關(guān)鍵詞：生活飲用水；菌落總數(shù)

在飲用水處理中，出廠水加氯消毒后進(jìn)人管網(wǎng)，部分存活的微生物和管網(wǎng)中生物膜中的微生物會(huì)利用管網(wǎng)水中的微量生物降解有機(jī)物進(jìn)行再生長(zhǎng)［1］。水質(zhì)的好壞對(duì)人們生活起著至關(guān)重要的作用，而判斷水質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)，微生物在水中的數(shù)量、種類是必不可少的。生活飲用水的微生物學(xué)指標(biāo)檢驗(yàn)，在保證飲水安全和控制傳染病上有著重要意義，同時(shí)也是評(píng)價(jià)水質(zhì)狀況的重要指標(biāo)。我國(guó)生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)（GB 5749-2006）規(guī)定水樣在牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基即營(yíng)養(yǎng)瓊脂上有氧條件下37℃培養(yǎng)48h后，所得1ml水樣所含菌落的總數(shù)不得大于100。

長(zhǎng)期以來(lái)，國(guó)內(nèi)多采用異養(yǎng)菌平板計(jì)數(shù)法和最大或然數(shù)計(jì)數(shù)法來(lái)測(cè)定飲用水中的活菌數(shù)．但由于飲用水中的貧營(yíng)養(yǎng)環(huán)境有別于傳統(tǒng)培養(yǎng)基提供的富營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，大多數(shù)在顯微鏡下觀察到的細(xì)菌不能在傳統(tǒng)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，致使活菌計(jì)數(shù)結(jié)果偏低．近些年來(lái)，國(guó)外先后應(yīng)用吖啶橙染色直接計(jì)數(shù)、活菌直接計(jì)數(shù)等方法對(duì)飲用水中的菌落總數(shù)及活菌數(shù)進(jìn)行快速、直接的鏡檢計(jì)數(shù)．一些新的染色方法，如采用5一氰基一2，3一聯(lián)甲苯四唑鹽酸鹽、核酸探針等對(duì)活細(xì)菌計(jì)數(shù)，都取得了很好地效果，國(guó)內(nèi)這方面的研究卻未見(jiàn)報(bào)道。

因平板計(jì)數(shù)法相對(duì)簡(jiǎn)單，本實(shí)驗(yàn)即采用本方法，用普通牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基在保證無(wú)菌的環(huán)境下，采取生活飲用水的樣品，利用培養(yǎng)基制作平板。

1資料與方法

1.1 本實(shí)驗(yàn)于在昌吉州疾控中心實(shí)驗(yàn)樓微生物實(shí)驗(yàn)室完成。`

1.2 材料

1.2.1實(shí)驗(yàn)材料生活飲用水

1.2.2實(shí)驗(yàn)試劑牛肉膏蛋白胨NaCl1mol/LNaOH1mol/LHCl 蒸餾水

1.2.3實(shí)驗(yàn)儀器高壓蒸氣滅菌鍋培養(yǎng)皿三角燒瓶天平量筒玻璃棒電爐 藥匙pH試紙（pH5.5-9.0） 溫度計(jì)

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1滅菌

1.3.1.1首先將內(nèi)鍋層取出，再向外鍋內(nèi)加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。

1.3.1.2放回內(nèi)鍋層，并加入用報(bào)紙包好的培養(yǎng)皿、三角燒瓶、吸管。

1.3.1.3加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層鍋的排氣槽內(nèi)。再以兩兩對(duì)稱的方式同時(shí)旋緊相對(duì)的兩個(gè)螺旋，使螺旋松緊一致，勿使漏氣。

1.3.1.4用電爐加熱，并同時(shí)打開排氣閥，使水沸騰以排除鍋內(nèi)的冷氣。待冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥，讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸氣壓力增加而逐漸上升。當(dāng)鍋內(nèi)壓力上升到所需壓力時(shí)，控制熱源，維持壓力至所需時(shí)間。本實(shí)驗(yàn)用0.1MPa，121℃，20min滅菌。

1.3.1.5滅菌時(shí)間到后，切斷電源，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當(dāng)壓力表的壓力降至\"0\"時(shí)打開排氣閥，旋松螺旋，打開蓋子，取出滅菌物品。

1.3.2水樣的采取放開水龍頭使水流5min后，用已滅菌的三角燒瓶接取水樣，以待分析。

1.3.3制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基

1.3.3.1稱量 按培養(yǎng)基配方依次準(zhǔn)確的稱取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入燒杯中。牛肉膏常用玻璃棒挑取，放在稱量紙上，稱量后直接放入水中，稍微加熱，牛肉膏便會(huì)與稱量紙分離，然后立即取出紙片。

1.3.3.2溶化 在上述燒杯中先加入少于所需要的水量，用玻璃棒攪勻，然后，在石棉網(wǎng)上加熱使其溶解，將稱好的瓊脂放入已溶的藥品中，再加熱溶化，最后補(bǔ)足所損失的水分。

1.3.3.3調(diào)pH 在未調(diào)pH前，先用精密pH試紙測(cè)量培養(yǎng)基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培養(yǎng)基中逐滴加入1mol/LNaOH，邊加邊攪拌，并隨時(shí)用pH試紙測(cè)其pH，直至pH達(dá)7.6。反之，用1mol/L HCl進(jìn)行調(diào)節(jié)。

1.3.4菌落總數(shù)測(cè)定

1.3.4.1滅菌吸管吸取1mL水樣，注入其中一套滅菌的培養(yǎng)皿中。共做兩個(gè)平皿。

1.3.4.2分別傾注溶化并冷卻到45℃左右的肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)基的量為培養(yǎng)基高度的1/3，并立即在桌上作平面旋搖，使生活飲用水和培養(yǎng)基混勻。

1.3.4.3另取一空的滅菌培養(yǎng)皿，傾注肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)基的量為培養(yǎng)基高度的1/3，作空白對(duì)照。

1.3.4.4待培養(yǎng)基凝固后，倒置于37℃溫箱中，培養(yǎng)48h，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。兩個(gè)平板的平均菌落數(shù)即為1mL生活飲用水的菌落總數(shù)。

2結(jié)果

見(jiàn)表1。

生活飲用水中細(xì)菌總為（83+75）/2-44=35；實(shí)驗(yàn)中對(duì)照組的菌落數(shù)為44，可見(jiàn)培養(yǎng)基和培養(yǎng)過(guò)程中造成了雜菌污染。處理上表中數(shù)據(jù)知，該生活飲用水中細(xì)菌平均數(shù)為35，在國(guó)家飲用水標(biāo)準(zhǔn)范圍之內(nèi)。

3討論

在本實(shí)驗(yàn)中的空白對(duì)照培養(yǎng)基上長(zhǎng)了細(xì)菌菌落，說(shuō)明此培養(yǎng)基被污染了，雜菌來(lái)源可能是由于培養(yǎng)皿、三角燒瓶、吸管等儀器滅菌不充分；滅菌后在空氣中放置又落入雜菌；配置培養(yǎng)基時(shí)反復(fù)升降溫，使一些雜菌產(chǎn)生抗性等。因此，在制作培養(yǎng)基及培養(yǎng)的過(guò)程中要嚴(yán)格殺菌，并嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)步驟認(rèn)真操作，從而使得結(jié)果更加精確。

由于水中細(xì)菌種類繁多，它們對(duì)營(yíng)養(yǎng)和其他生長(zhǎng)條件的要求差別很大，不可能找到一種培養(yǎng)基在一種條件下，使水中所有的細(xì)菌均能生長(zhǎng)繁殖，因此，以某種培養(yǎng)基平板升生長(zhǎng)出來(lái)的水中菌落總數(shù)僅是近似值。

本實(shí)驗(yàn)的成敗在于滅菌、無(wú)菌操作技術(shù)、培養(yǎng)基的溫度等方面是否操作正確，因此接種過(guò)程務(wù)必防止雜菌的侵入。

參考文獻(xiàn)：

［1］沈萍，范秀容，等.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)（第四版）.北京：高等教育出版社，2007 .

編輯/許言