摘要：目的 通過(guò)檢測(cè)子宮腺肌病組織芯片中基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）的表達(dá)，探討其在子宮腺肌病中發(fā)生、發(fā)展的作用。方法 取組織芯片技術(shù)及免疫組化方法檢測(cè)42例子宮腺肌病患者異位內(nèi)膜組織（異位內(nèi)膜組）和15例因子宮肌瘤行子宮切除術(shù)患者非瘤區(qū)對(duì)照子宮內(nèi)膜組織（對(duì)照內(nèi)膜組）MMP-9的陽(yáng)性細(xì)胞的平均光密度值（OD值），及兩組子宮內(nèi)膜組織的增殖期和分泌期的OD值，并進(jìn)行比較。結(jié)果 MMP-9在異位內(nèi)膜組中OD值明顯高于對(duì)照內(nèi)膜組（P<0.05）；異位內(nèi)膜組中OD值，增殖期低于分泌期比較，（P<0.05）。對(duì)照內(nèi)膜組OD值，增殖期和分泌期比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 在子宮腺肌病異位內(nèi)膜中MMP-9高表達(dá)，提示其可能與ECM的降解、基底層內(nèi)膜侵入子宮肌層的發(fā)生密切相關(guān)。

關(guān)鍵詞：子宮腺肌病，基質(zhì)金屬蛋白酶-9，組織芯片

子宮腺肌?。╝denomyosis，AM）是子宮內(nèi)膜間質(zhì)和腺體侵及子宮肌層內(nèi)形成多灶性、并伴隨周圍平滑肌增生的一種良性病變。但其表現(xiàn)為局部種植和轉(zhuǎn)移，具有惡性腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移特點(diǎn)。有研究表明細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）的降解是眾多惡性腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟。而大量資料表明基質(zhì)金屬蛋白酶家族（matrix metalloproteinase MMPs）在細(xì)胞外基質(zhì)的降解中起關(guān)鍵作用。本文旨在探討其在AM發(fā)生和發(fā)展中的可能作用， 為研究AM的發(fā)病機(jī)制和防治提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機(jī)選取2010年10月～2011年10月瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院婦科，42例年齡35～52歲（43.52士9.65）的子宮腺肌病患者的病灶組織（異位內(nèi)膜組）為研究對(duì)象，22例增殖期，20例分泌期。隨機(jī)選取15例年齡33～51歲（41.40士5.99）的子宮肌瘤患者，非瘤區(qū)正常子宮內(nèi)膜組織為對(duì)照（對(duì)照內(nèi)膜組），8例增殖期，7例分泌期。術(shù)前6個(gè)月內(nèi)均無(wú)激素及對(duì)抗子宮腺肌病藥物治療史。

1.2 試劑 兔抗人MMP-9單克隆抗體（Santa Cruz）；生物素標(biāo)記二抗試劑盒（北京中杉）；免疫組化試劑盒（北京中杉）。

1.3 方法

1.3.1 制作組織芯片 所有組織蠟塊相應(yīng)的HE染色切片均由兩位病理醫(yī)師閱片核實(shí)診斷后，符合入選條件的蠟塊用于制作組織芯片，并標(biāo)記病灶部位。制作3×2×1cm受體蠟塊。對(duì)組織蠟塊標(biāo)記的病灶部位，用陣列儀取材針進(jìn)行鉆取，再將鉆取的組織芯片轉(zhuǎn)移至受體蠟塊鉆好的孔中。加溫熔蠟制成含有30個(gè)點(diǎn)排布的組織芯片蠟塊。

1.3.2 結(jié)果判定 MMP-9細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)為：以細(xì)胞核內(nèi)或漿內(nèi)有棕黃色顆粒者視為陽(yáng)性染色細(xì)胞。鏡下于無(wú)非特異性著色的不同區(qū)域隨機(jī)抽取5個(gè)高倍鏡視野采集圖像，采用Image Pro6.0專業(yè)圖像分析系統(tǒng)測(cè)量陽(yáng)性細(xì)胞平均光密度值（OD）值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 實(shí)驗(yàn)結(jié)果以（x±s）表示，應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件，統(tǒng)計(jì)方法采用t檢驗(yàn)和單因素方差分析，P<0.05為差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

MMP-9在異位內(nèi)膜組中OD值明顯高于對(duì)照內(nèi)膜組（P<0.05）；異位內(nèi)膜組中OD值，增殖期低于分泌期比較，（P<0.05）。對(duì)照內(nèi)膜組OD值，增殖期和分泌期比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

3討論

子宮腺肌病是子宮內(nèi)膜腺體和間質(zhì)細(xì)胞向肌層良性浸潤(rùn)并在其中彌散性生長(zhǎng)的疾病，屬于良性疾病，卻具有惡性腫瘤的一些特征，如無(wú)限制生長(zhǎng)、新生血管生成和凋亡細(xì)胞數(shù)量減少等，最顯著的特征是具有細(xì)胞侵襲能力，能局部或遠(yuǎn)程轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)其他組織[1]。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜異位癥與細(xì)胞外基質(zhì)ECM與基底膜（basement menbrane，BM）的降解密切相關(guān)。MMPs通過(guò)降解細(xì)胞基底膜，使組織屏障消失，異位內(nèi)膜組織向間質(zhì)浸潤(rùn)，子宮腺肌病可能存在同樣的情況[2]。有研究表明MMP-9在多種惡性腫瘤的發(fā)展浸潤(rùn)中起重要作用，且MMP-9的表達(dá)與腫瘤的臨床分期、病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后等相關(guān)[3]。Bruner[4]等在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，通過(guò)抑制MMPs的分泌，可以阻止異位病灶的形成。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示MMP-9主要表達(dá)于子宮內(nèi)膜組織的腺上皮細(xì)胞胞漿，少量表達(dá)于間質(zhì)細(xì)胞。MMP-9在異位內(nèi)膜，對(duì)照子宮內(nèi)膜組織中均有表達(dá)，但異位內(nèi)膜組MMP-9的表達(dá)明顯高于對(duì)照子宮內(nèi)膜組（P﹤0.05）。說(shuō)明異位內(nèi)膜中MMP-9的過(guò)度表達(dá)，使異位內(nèi)膜具有較強(qiáng)的蛋白水解能力，降解異位內(nèi)膜周圍的基底膜及其他ECM成分，使組織屏障消失，病灶向間質(zhì)浸潤(rùn)及病灶周圍結(jié)締組織。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示異位內(nèi)膜組織中MMP-9表達(dá)增高，可能是子宮內(nèi)膜侵襲性增強(qiáng)的原因。本實(shí)驗(yàn)MMP-9在不同內(nèi)膜中的表達(dá)情況與既往實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，子宮腺肌病異位內(nèi)膜組MMP-9的過(guò)度表達(dá)，且失去周期性變化，MMP-9的過(guò)度表達(dá)及異常表達(dá)與子宮腺肌病與惡性腫瘤具有相似的生物學(xué)行為的原因之一，即子宮內(nèi)膜細(xì)胞\"異位\"到肌層并向肌層侵潤(rùn)生長(zhǎng)的原因之一[5，6]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示異位內(nèi)膜組織中MMP-9的表達(dá)增高，可能是子宮內(nèi)膜侵襲性增強(qiáng)的原因。

組織芯片技術(shù)（TMA）是20世紀(jì)末發(fā)展起來(lái)的一種新技術(shù)[7]。組織芯片為醫(yī)學(xué)病理學(xué)提供了一種高通量、大樣本以及快速的分子水平的分析工具。本課題應(yīng)用組織芯片技術(shù)免疫組化的方法檢測(cè)子宮腺肌病異位內(nèi)膜及正常子宮內(nèi)膜中的MMP-9表達(dá)水平及意義進(jìn)行研究。為闡明子宮腺肌病的發(fā)病機(jī)制提供新的理論依據(jù)。也為臨床診斷和防治提供新思路。

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