摘要：目的 探討凋亡抑制基因Survivin生存素在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法 采用免疫組織化學(xué)MaxvisionTM法檢測(cè)25例宮頸癌、15例宮頸上皮內(nèi)瘤病變，其中5例低度病變（CINⅠ、CINⅡ）、10例高度病變（CINⅢ及原位癌）和5例正常宮頸組織中Survivin蛋白的表達(dá)，分析其與臨床病理特征之間的關(guān)系。結(jié)果 ①宮頸不同病變組間Survivin蛋白的表達(dá)差異有顯著意義（P<0.01）。②Survivin陽(yáng)性表達(dá)率在不同年齡、臨床分期、病理分級(jí)、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤直徑的宮頸癌患者之間無(wú)明顯相關(guān)性（r和P值分別是0.253，0.094；0.270，0.193；-0.016，0.939；0.288，0.163；0.058，0.783）。結(jié)論 Survivin 在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用，可作為反映宮頸癌生物學(xué)行為的指標(biāo)。

關(guān)鍵詞：宮頸癌；宮頸上皮內(nèi)瘤變；Survivin 免疫組織化學(xué)

生存素（survivin）是新近發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制蛋白（IAP）家族中的新成員，其抗凋亡作用的機(jī)制可通過(guò)caspase途徑和非caspase途徑實(shí)現(xiàn)[1]，屬于一種結(jié)構(gòu)相對(duì)獨(dú)特的哺乳類凋亡抑制蛋白（IAPs）家族成員， 具有對(duì)腫瘤組織高表達(dá)的特異性特點(diǎn)，臨床研究表明在胃癌、大腸癌、肝癌、肺癌、乳癌等幾種覺(jué)腫瘤中均存在survivin異常表達(dá)[2]，而正常成人組織呈現(xiàn)出低表達(dá)或不表達(dá)。本研究采用免疫組化方法檢測(cè)survivin蛋白在宮頸上皮內(nèi)瘤樣變（CIN）及宮頸癌組織中的表達(dá)，以探討survivin在宮頸癌組織的表達(dá)規(guī)律及臨床意義。

1資料與方法

1.1一般資料 選擇云南省昆明醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院婦瘤科2011年7月～2012年7月手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)的宮頸不同病變的病例。根據(jù)宮頸上皮病變程度分為低度病變、高度病變及宮頸浸潤(rùn)癌三組。宮頸上皮低度病變（CINⅠ；CINⅡ）患者5例、高度上皮病變（ CINⅢ及原位癌）10例、宮頸癌患者25例存檔石蠟標(biāo)本，另取5例正常宮頸組織為對(duì)照，患者年齡25～65歲，平均年齡44.84歲，≤45歲12例，>45歲13例，25例宮頸癌，年齡34～65歲，平均46.52歲。病理分級(jí)：G1～G2：3例，G2：3例，G2～G3：10例，G3：9例。根據(jù)2003年FIGO臨床分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰa～Ⅱa期4例，Ⅱb11例，Ⅲ-Ⅳ期10例。腫瘤直徑≤4cm：20例，腫瘤直徑>4cm：5例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者15例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者10例。入選病例均為首次診療病例，具有完整的病史、臨床及病理資料；所有病例宮頸局部均未接受放射、藥物及物理治療。

1.2方法 采用即用型快捷免疫組化MaxvisionTM法進(jìn)行檢測(cè)。所有切片均在同一實(shí)驗(yàn)室、同一時(shí)間、由同一技術(shù)人員使用同一批號(hào)的免疫組化試劑完成免疫組化染色。PBS液代替第一抗體作陰性對(duì)照。兔抗人Survivin多克隆抗體（濃縮型），（福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司）。以預(yù)實(shí)驗(yàn)宮頸癌Survivin的染色陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照，PBS代替一抗作空白對(duì)照。以EDTA液進(jìn)行抗原微波修復(fù)，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固。

1.3免疫染色的評(píng)估免疫組化染色結(jié)果采用半定量評(píng)分系統(tǒng)。染色強(qiáng)度分為0～3級(jí)（0級(jí)：陰性；1級(jí)：弱陽(yáng)性；2級(jí)：中等強(qiáng)度陽(yáng)性；3級(jí)：強(qiáng)陽(yáng)性）。根據(jù)組織切片中陽(yáng)性染色區(qū)域占腫瘤組織區(qū)域的比例，染色的范圍標(biāo)記評(píng)分為0（0）、1（1%～25%）、2（26%～50%）、3（51%～75%）、4（76%～100%）。兩個(gè)等級(jí)評(píng)分之和作為最后的染色積分，其積分≥2被認(rèn)為該組織切片免疫組織化學(xué)染色陽(yáng)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析， Survivin蛋白各組間的陽(yáng)性表達(dá)率用χ2檢驗(yàn)，Survivin蛋白表達(dá)與宮頸癌臨床病理學(xué)的相關(guān)性采用相關(guān)分析。

2結(jié)果

2.1 Survivin在不同組別子宮頸組織中的表達(dá) 由表1顯示：Survivin蛋白在25例宮頸癌中有2例弱陽(yáng)性表達(dá)（+），占8%（2/25）；23例均為中強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)（++-+++）占92.00%（23/25）；10例宮頸高度上皮病變（CINⅢ及原位癌）中有5例弱陽(yáng)性表達(dá)（+），占50%（5/10）；5例中強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)（++-+++）占50.00%（5/10），5例宮頸上皮低度病變（CINⅠ、CINⅡ）均弱陽(yáng)性表達(dá)（+），占100%（5/5）；5例正常宮頸組織中僅1例弱陽(yáng)性表達(dá)（+），占20%（1/5）；其余4例為陰性，占80%（4/5）；宮頸不同病變組間Survivin蛋白的表達(dá)差異有顯著意義（P<0.01）。

2.2 Survivin蛋白表達(dá)與宮頸癌患者臨床病理特征的關(guān)系 由表2可見(jiàn)，Survivin蛋白表達(dá)與患者年齡、腫瘤直徑、臨床分期、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無(wú)相關(guān)性（r和P值分別是0.253，0.094；0.270，0.193；-0.016，0.939；0.288，0.163；0.058，0.783）。

3討論

Survivin是近年新發(fā)現(xiàn)的凋亡蛋白抑制因子（inhibitor of apoptosis protein， IAP）家族成員之一，能抑制多種刺激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞增殖，表現(xiàn)出與腫瘤的發(fā)生發(fā)展的正相關(guān)性。survivin常異常表達(dá)于大多數(shù)惡性腫瘤中，而正常組織中呈低表達(dá)或不表達(dá)。大量研究證實(shí)，survivin基因?yàn)橐粋€(gè)具有特異性的腫瘤特凋亡抑制因子，也是一個(gè)理想的治療腫瘤的靶基因。Surivin在腫瘤組織中的過(guò)度表達(dá)可克服G2/M期凋亡關(guān)卡，于有絲分裂期間促進(jìn)轉(zhuǎn)化細(xì)胞的異常增殖，學(xué)者們將其視為維持細(xì)胞增殖與凋亡平衡的一個(gè)界面分子。采用免疫組化S-P染色法測(cè)定宮頸上皮內(nèi)瘤樣變（CIN）與宮頸癌的組織中特異性survivin基因，對(duì)于分析survivin在宮頸癌的表達(dá)規(guī)律有積極的臨床意義。

Lee 和Kim等人的研究結(jié)果顯示[3，4]：Survivin在宮頸癌變過(guò)程中陽(yáng)性表達(dá)率呈增高趨勢(shì)，在正常宮頸組織中不表達(dá)，且陽(yáng)性表達(dá)率與宮頸癌臨床分期及組織分級(jí)程度呈正相關(guān)，且大多發(fā)生在宮頸癌惡性轉(zhuǎn)化的早期，從而為判斷宮頸癌預(yù)后尋找到了一個(gè)有價(jià)值的判斷指標(biāo)。

宮頸不同病變組間Survivin蛋白的表達(dá)差異有顯著意義（P<0.01）； 由此可推斷Survivin表達(dá)與宮頸CIN向?qū)m頸癌發(fā)展間有著密切的關(guān)系，其可能是宮頸癌的癌前病變及癌變的早期事件，有可預(yù)測(cè)宮頸癌前病變轉(zhuǎn)變?yōu)閷m頸癌的可能性。

本實(shí)驗(yàn)中，我們觀察到Survivin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率總的趨勢(shì)是以正常子宮頸、CIN、子宮頸癌依次增高。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），survivin的這一伴隨子宮頸病變進(jìn)展而表達(dá)逐漸增強(qiáng)的過(guò)程，說(shuō)明survivin在子宮頸癌發(fā)生中所起的重要作用，這與以往Kim的研究相同。而與患者年齡、腫瘤大小、病理分級(jí)、臨床分期、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無(wú)相關(guān)性（P>0.05），這表明Survivin主要與宮頸癌早期癌變的發(fā)生發(fā)展有著密切的聯(lián)系，其可能是宮頸癌的癌前病變及癌變的早期事件。而與宮頸癌的后期發(fā)展似乎關(guān)系不大。這一點(diǎn)與其他學(xué)者的研究不同。這可能與研究樣本量小、實(shí)驗(yàn)方法及靈敏度有關(guān)。這還有待進(jìn)一步研究證實(shí)。

由于Survivin是一個(gè)腫瘤特異性的凋亡抑制因子，使得應(yīng)用反義Survivin基因治療具有良好的靶向性、特異性及安全性。靶向Survivin治療可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡并抑制其增殖，而對(duì)正常組織幾乎沒(méi)有不良影響，這是靶向Survivin治療所特有的優(yōu)點(diǎn)?？梢钥隙?，如果將反義藥物與傳統(tǒng)的化療藥物協(xié)同作用將會(huì)得到較好的臨床治療效果。Survivin作為一種新的具有腫瘤特異性的凋亡抑制基因，其抑制細(xì)胞凋亡的功能在腫瘤發(fā)病機(jī)制中的作用及作為腫瘤診斷的標(biāo)記物備受矚目。所以Survivin可作為一個(gè)新的腫瘤特異性標(biāo)記物，并可能成為腫瘤基因治療更理想的靶基因，其可聯(lián)合使用傳統(tǒng)的化療或放療方法，為腫瘤的治療提供新的途徑。

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[2]程瑞祥，馬志強(qiáng)，楊書(shū)文，等.Survivm在膀胱癌中的研究進(jìn)展[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué)， 2008，11：182-184.

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[4]Kim HS， Shiraki K， Park SH. Expression of survivin in CIN and invasive squamous cell carcinoma of uterine cervix[J]. Anticancer Res，2002，22（2A）：805-808.

編輯/申磊