摘要：目的 建立高效液相色譜法測(cè)定和胃暢中顆粒中橙皮苷含量。方法 檢測(cè)樣品經(jīng)甲醇加熱回流提取，再經(jīng)聚酰胺柱分離純化后，采用高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)。色普柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑[DiamonsilTM C18 5 μm 4.6×250 mm]，以水-乙腈（80∶20）的混合液（用磷酸調(diào)pH值至3.0）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為283 nm。結(jié)果 在27.16 μg/mL～190.12 μg/mL范圍內(nèi)，橙皮苷進(jìn)樣量與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為：Y=28655X-27185，r2=0.999，平均回收率為99.8%，RSD為0.31%（n=5）。結(jié)論 本方法簡(jiǎn)單易行、靈敏快捷、重現(xiàn)性好，精確度和精密度高，可用于和胃暢中顆粒的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；和胃暢中顆粒；橙皮苷

1儀器與材料

儀器：Waters 2695高液相色譜儀、四單元數(shù)碼梯度泵、在線真空脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、Waters 2489 UV檢測(cè)器、Empower數(shù)據(jù)工作站；Agilent 1100高液相色譜儀、N2000數(shù)據(jù)工作站；FA2004電子分析天平；Sartorius BT25S電子天平；UV-2101紫外分光光度計(jì)；SK250H超聲清洗儀。

試藥試劑：和胃暢中顆粒由本所自制；橙皮苷對(duì)照品，購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。乙腈、甲醇為色譜純，水為超純水，磷酸、甲醇為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色普柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，采用DiamonsilTM C184.6×250 mm，5 μm色譜柱；用磷酸調(diào)pH至3.0的水-乙腈（80∶20）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為283 nm。流速為1 mL/min，柱溫為室溫，理論塔板數(shù)按橙皮苷色譜峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

2.2對(duì)照品溶液的制備 取橙皮苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成中含50 μg/mL的溶液，即得。

2.3供試品溶液的制備 取本品適量，研細(xì)，精密稱定2.5 g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇50 mL，加熱回流1 h，放冷，濾過，用適量甲醇洗滌藥渣及濾器，合并濾液，蒸干甲醇，殘?jiān)盟?0 mL溶解，溶液全量轉(zhuǎn)移置聚酰胺柱（聚酰胺80～100目，2 g，內(nèi)徑15～20 mm，干法裝柱）中，用40 mL水分?jǐn)?shù)次洗脫，收集洗脫液置50 mL容量瓶中，并用水稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶 液[1]。

2.4陰性對(duì)照溶液的制備 原方中去陳皮、枳實(shí)藥材，按照制劑工藝進(jìn)行制備，得缺陳皮、枳實(shí)的陰性制劑。取陰性制劑2.5 g，按\"2.3\"項(xiàng)下操作，制備陰性制劑對(duì)照液，

按\"2.1\"項(xiàng)下的色譜條件，分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各20 μL，注入色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果：橙皮苷對(duì)照品和供試品色譜圖中橙皮苷峰與其他組分峰基線分離，分離度>1.5，陰性對(duì)照色譜圖中與橙皮苷對(duì)照品以及供試品色譜圖中相應(yīng)的保留時(shí)間處無(wú)色譜峰出現(xiàn)，表明其他組分對(duì)橙皮苷的測(cè)定無(wú)干擾[2]。

2.5線形關(guān)系考察 精密稱定橙皮苷對(duì)照品（經(jīng)五氧化二磷減壓干燥器中干燥12 h以上使用）13.58 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度搖勻，制成橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)貯備液（271.6 μg/mL）。分別精密吸取標(biāo)準(zhǔn)貯備液適量，用甲醇稀釋成對(duì)照品溶液，分別精密吸取上述系列對(duì)照品溶液各20 μL，按正文中的色譜條件，注入液相色譜測(cè)定峰面積，以對(duì)照品的量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積（A）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y=28655X-27185，r2=0.999，橙皮苷質(zhì)量濃度在27.16～190.12 μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系[3]。

2.6供試品含量測(cè)定 分別按\"2.3\"項(xiàng)下操作，制備不同批號(hào)（081124、081216、090106、090119、090121）的供試品溶液，按\"2.1\"項(xiàng)下的色譜系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果6個(gè)批號(hào)樣品所測(cè)得的含量分別為2.42 mg/g、2.42 mg/g、2.42 mg/g、2.42 mg/g、2.43 mg/g、2.42 mg/g。

3討論

3.1提取液前處理的考察 聚酰胺柱色譜對(duì)分離黃酮類化合物來(lái)說(shuō)，聚酰胺是較為理想的吸附劑，其吸附強(qiáng)度主要取決于黃酮類化合物分子中羥基的數(shù)目與位置及溶劑與黃酮類化合物或與聚酰胺之間形成氫鍵締合能力的大小，不同類型黃酮化合物，先后流出順序一般是：異黃酮、二氫黃酮醇、黃酮、黃酮醇；而柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷等均屬二氫黃酮類化合物，故本試驗(yàn)提取液采用聚酰胺柱層析洗脫處理，可以達(dá)到滿意的分離效果。

3.2提取方法的考察 分別采用超聲提取和加流回流的方法，制備在30 min、1 h、1.5 h的供試品溶液進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明加流回流提取方法測(cè)定的含量明顯高于超聲提取方法測(cè)定的含量，且加熱回流1 h后，提取基本完全且全量轉(zhuǎn)移至聚酰胺柱進(jìn)行樣品預(yù)處理的方法效果良好。

3.3系統(tǒng)適應(yīng)性的考察 根據(jù)《中國(guó)藥典2010年版》收載的陳皮、枳實(shí)、枳殼等藥材對(duì)橙皮苷、柚皮苷測(cè)定的色譜條件，在本實(shí)驗(yàn)中，普選用甲醇-水-磷酸（40∶60∶0.1）、乙腈-水-磷酸（30∶70∶0.1）、甲醇-乙腈-水（20∶10∶70）和用磷酸調(diào)pH至3.0的水-乙腈（80∶20）為流動(dòng)相，結(jié)果采用用磷酸調(diào)pH至3.0的水-乙腈（80∶20）保留時(shí)間適宜，橙皮苷峰與其他色譜峰能基線分離，對(duì)照品及供試品色譜圖中，橙皮苷主峰保留時(shí)間一致。同時(shí)，考察在25℃、30℃、40℃柱溫條件下和采用不同來(lái)源和型號(hào)C18色譜柱進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明，溫度和色譜柱對(duì)該試驗(yàn)無(wú)明顯影響。

參考文獻(xiàn)：

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社出版，2010.

[2]殷紅妹高效液相色譜法測(cè)定陳皮酊中橙皮苷的含量中華實(shí)用[J].中西醫(yī)雜志，2005，（17）： 934-935.

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編輯/張燕