摘要：目的 研究熱淋清咀嚼片，確定合理質(zhì)量檢測(cè)方法。方法 對(duì)咀嚼片的沒(méi)食子酸含量檢測(cè)進(jìn)行方法學(xué)研究。結(jié)果 確定了咀嚼片中沒(méi)食子酸在4.9～196.0 g/mL濃度范圍之間具有良好的線性關(guān)系（r=0.99995），平均回收率為99.68%，RSD為0.48%。結(jié)論 熱淋清咀嚼片含量檢測(cè)方法可行，質(zhì)量可控，穩(wěn)定。

關(guān)鍵詞：熱淋清；頭花蓼；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；咀嚼片

熱淋清為貴州苗族習(xí)用藥材頭花蓼的單方制劑，頭花蓼 （Polygonum capitatum Buch-Ham.exD.Don） 是蓼科植物，最早收載于《廣西中藥志》，稱(chēng)其為石莽草、石辣蓼，\"味辛，微澀，性溫，散瘀止痛，治風(fēng)濕，跌打。\"臨床主要用于尿路感染[1-2]、急慢性腎盂腎炎、非淋菌性尿道炎等疾病的治療[3]?？紤]到尿路感染患者常有尿頻、尿急、尿痛等癥狀，心理上懼怕飲用大量的水；以及糖尿患者患有尿路感染，不宜服用含糖藥品等因素，因此開(kāi)發(fā)了無(wú)糖型熱淋清咀嚼片。本課題對(duì)無(wú)糖型熱淋清咀嚼片的質(zhì)量檢測(cè)進(jìn)行了研究，經(jīng)過(guò)文獻(xiàn)檢索，在部頒標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上增加了高效液相色譜法測(cè)定沒(méi)食子酸含量檢測(cè)方法，得到滿(mǎn)意的分離效果，為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1儀器與材料

1.1儀器 HP1100高效液相色譜儀，DAD檢測(cè)器；AG204電子天平（瑞士METTLER TOLEDO）；XSP-18S型雙目顯微鏡。

1.2材料 熱淋清咀嚼片（某研究所中試產(chǎn)品）；沒(méi)食子酸對(duì)照品（批號(hào)0831-9501，中國(guó)藥品生物制品檢定所提供）；熱淋清膠囊；色譜純甲醇（TEDIA COMPANY， INC.ARB0401），N，N-二甲基甲酰胺（AR，天津廣成化學(xué)試劑廠060309）；磷酸（AR，天津廣成化學(xué)試劑廠051211）；冰醋酸。

2方法與結(jié)果

2.1質(zhì)量研究

2.1.1性狀 根據(jù)熱淋清咀嚼片的實(shí)際性狀描述為\"熱淋清咀嚼片為棕褐色的薄膜衣片，除去薄膜衣后顯棕褐色；氣香，味甜微澀。\"三批某研究所自制樣品與對(duì)照樣品熱林清膠囊形狀對(duì)比，見(jiàn)表1。熱淋清咀嚼片：某研究所中試三批，批號(hào)：070201、070202、070203。對(duì)照樣品：熱淋清膠囊由貴州弘康制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：060103。

2.1.2薄層鑒別 依據(jù)熱淋清膠囊標(biāo)準(zhǔn)[4]鑒別①項(xiàng)下進(jìn)行檢測(cè)：取熱淋清咀嚼片10片，除去薄膜衣，研細(xì)，稱(chēng)取3 g，加甲醇20 mL，水浴回流1 h，濾過(guò)，濾液濃縮至約2 mL，加在氧化鋁柱上，用甲醇50 mL洗脫，收集洗脫液，水浴上濃縮至約1 mL，作為供試品溶液。另取頭花蓼對(duì)照藥材1.5g，加水20 mL，煮沸30min，濾過(guò)，濾液濃縮至干，加甲醇20 mL使溶解，濾過(guò)，水浴上濃縮至約1 mL，作為對(duì)照藥材溶液。再另取熱淋清膠囊和缺頭花蓼的陰性樣品各3g，自供試品處理\"加甲醇20 mL\"起同法操作，制成對(duì)照樣品和缺頭花蓼陰性樣品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述四種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，氨氣中熏1min，置紫外燈（365 nm）下檢視，見(jiàn)圖1，供試品和對(duì)照樣品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，而陰性樣品在相應(yīng)的位置上不顯熒光斑點(diǎn)；供試品與對(duì)照樣品色譜中，在相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

2.1.3含量測(cè)定

2.1.3.1方法的選擇 早在1985年吳廼居等采用乙醚和乙醇提取與硅膠柱層析，首次分離得到6種化合物，經(jīng)理化性質(zhì)及IR、MS等光譜分析鑒定為：苯甲醛、乙酸、24-羥基二十四烷酮-3、29-羥基二十九烷酮-3β-谷甾醇、沒(méi)食子酸，并認(rèn)為沒(méi)食子酸為其主要有效成分[5]。同時(shí)也有文獻(xiàn)用薄層掃描法[6]、高效毛細(xì)管電泳法[7]及高效液相色譜法[8]對(duì)熱淋清顆粒、膠囊中的沒(méi)食子酸進(jìn)行了測(cè)定研究，為頭花蓼制劑中沒(méi)食子酸的含量提供了可行的快速測(cè)定方法。因此我們采用了高效液相色譜法測(cè)定沒(méi)食子酸，并摸索試驗(yàn)條件，據(jù)此，為了控制頭花蓼制劑的質(zhì)量。

2.1.3.2色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 采用惠普1100高效液相色譜儀；HP Spherisorb色譜柱（250 mm×4 mm，0.5 μm，十八烷基硅烷鍵合硅膠）。流動(dòng)相：甲醇-水-N，N-二甲基甲酰胺-冰醋酸（1∶96∶1∶2）。檢測(cè)波長(zhǎng)：272nm；柱溫：25℃；流速：1 mL/min。理論板數(shù)：按沒(méi)食子酸色譜峰計(jì)算應(yīng)≥3000，見(jiàn)圖2。

分離度：熱淋清咀嚼片含量測(cè)定的沒(méi)食子酸與其他色譜峰達(dá)到基線分離，分離度>1.5，見(jiàn)圖2。

2.1.3.3陰性干擾試驗(yàn) 按制備工藝方法制備不含頭花蓼的陰性樣品，按上述供試品溶液制備方法制成不含頭花蓼的陰性溶液。

分別精密吸取不含頭花蓼的陰性溶液與對(duì)照品溶液及供試品溶液，注人液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果在與沒(méi)食子酸對(duì)照品保留時(shí)間相同的位置上無(wú)色譜峰出現(xiàn)，表明不含頭花蓼的陰性溶液對(duì)熱淋清咀嚼片測(cè)定無(wú)干擾，見(jiàn)圖3。

2.1.3.4線性范圍試驗(yàn) 精密稱(chēng)取沒(méi)食子酸對(duì)照品適量，加50%甲醇溶液溶解并稀釋制成含沒(méi)食子酸為196.0 g/mL的貯備溶液；以該貯備溶液加50%甲醇溶液逐步稀釋配制成98.0 g/mL，49.0 g/mL，29.4 g/mL，9.8 g/mL，4.9 g/mL。分別取上述各溶液10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以濃度作橫坐標(biāo)（C），以峰面積作縱坐標(biāo)（A），作線性回歸，得回歸方程，見(jiàn)表2。

2.1.3.5精密度試驗(yàn) 取沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液，精密量取10 μL，注入液相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)得5次的沒(méi)食子酸峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)方差為0.44%。

2.1.3.6溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn) 取含量測(cè)定項(xiàng)下供試樣品溶液，置于室溫下，分別于第0，2，4，8，24 h取樣測(cè)定，熱淋清咀嚼片在24 h內(nèi)測(cè)定，沒(méi)食子酸峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)方差為0.23%，峰面積無(wú)明顯改變，說(shuō)明供試品溶液在室溫下放置24 h比較穩(wěn)定。

2.1.3.7回收率試驗(yàn) 精密取沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液（196.0 g/mL）適量，分別加入一定量的已知含量的熱淋清咀嚼片（批號(hào)：070207；含量：11.979 mg/g）中，加50%甲醇溶液，共制備處于線性范圍三組不同濃度（樣品+50%，樣品+100%，樣品+150%）的樣品溶液，依法取樣測(cè)定，平行測(cè)定 9份，統(tǒng)計(jì)方法加樣回收率，見(jiàn)表3。

2.1.3.8重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 取熱淋清咀嚼片10片，除去薄膜衣，研細(xì)，隨機(jī)取熱淋清咀嚼片5份，約0.15 g/份，精密稱(chēng)定，置錐形瓶中，加50%甲醇溶液適量，超聲處理1 h，放冷后，加50%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，取續(xù)濾液10 μL依法測(cè)定，見(jiàn)表4。

從結(jié)果可以看出，本含量測(cè)定方法重現(xiàn)性好，可以滿(mǎn)足分析要求。

3討論

含量檢測(cè)查閱了文獻(xiàn)報(bào)道[9]，流動(dòng)相選甲醇-水-N，N二甲基甲酰胺-冰醋酸，達(dá)到很好的峰形和分離度，沒(méi)食子酸在4.9～196.0 g/mL濃度范圍之間具有良好的線性關(guān)系A(chǔ)=32.626C+7.66191（r=0.99995），平均回收率為99.68%，RSD為0.48%，熱淋清咀嚼片含量檢測(cè)方法可行，質(zhì)量可控。所建方法專(zhuān)屬性、重復(fù)性好，建立本制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為本制劑的質(zhì)量監(jiān)控提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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