摘要：目的 探討血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）在胃腺癌組織中的表達(dá)和間質(zhì)內(nèi)微血管的計(jì)數(shù)情況及其臨床意義。方法 采用免疫組化S-P法檢測(cè)50例胃癌和10例正常胃組織中VEGF的表達(dá)，以CD34標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞，計(jì)數(shù)微血管密度。結(jié)果VEGF在癌組織中與正常組織中表達(dá)分別為：胃癌中27例表達(dá)陽(yáng)性（54%），正常對(duì)照組表達(dá)陽(yáng)性2/10（20%），差異顯著（P<0.01）。CD34表達(dá)在低分化胃癌中的表達(dá)較高分化差異顯著（P<0.05）。TNM分期采用AJCC標(biāo)準(zhǔn)（2010），TNM分期差異不顯著（P>0.05）；病理組織學(xué)分型采用Lauren分型標(biāo)準(zhǔn)，分為腸型、彌漫性、混合型。VEGF的表達(dá)與患者年齡、腫瘤部位、TNM分期及組織學(xué)類型、分化程度無(wú)相關(guān)性（P>0.05）；而與浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（P<0.05）。MVD與VEGF的表達(dá)呈正相關(guān)。結(jié)論VEGF和MVD在胃癌中表達(dá)增強(qiáng)，在癌組織的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移過(guò)程中起重要作用。

關(guān)鍵詞：胃癌；VEGF；MVD；免疫組織化學(xué)

本研究同時(shí)檢測(cè)VEGF和CD34在胃癌組織中的表達(dá)，并同時(shí)對(duì)其臨床意義進(jìn)行探討。

1資料與方法

1.1一般資料 收集我院2010年1月～2013年3月手術(shù)切除胃腺癌蠟塊，其中病理組織學(xué)分型采用Lauren分型標(biāo)準(zhǔn)，其中腸型14例、彌漫性24例、混合型12例分級(jí)I級(jí)者14例，分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)見參考文獻(xiàn)[1]。臨床分期采用TNM分期，I期22例、II期5例、III期23例?；颊吣挲g29～72歲，平均年齡54歲。所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性甲醛固定，石蠟包埋，均行4μm連續(xù)切片。

1.2方法 VEGF單克隆抗體、CD34和S-P免疫組化試劑盒及DAB顯色液均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。采用S-P免疫組化方法，操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。切片置入PBS沖洗10min；進(jìn)行高溫高壓抗原修復(fù)。加3%過(guò)氧化氫室溫靜置10min，阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，PBS沖洗10min，加一抗，室溫靜置60min，PBS沖洗15min，加聚合物增強(qiáng)劑，室溫靜置30min，PBS沖洗10min，再加酶標(biāo)抗鼠聚合物，室溫靜置30min，PBS沖洗10min，加DAB顯色液，自來(lái)水沖洗，蘇木精復(fù)染1min。用已知陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照，PBS代替一抗作陰性對(duì)照。

1.3結(jié)果測(cè)定

1.3.1 VEGF以細(xì)胞間質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒細(xì)胞為陽(yáng)性，癌旁非腫瘤性胃黏膜未見VEGF的過(guò)表達(dá)。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞在同類細(xì)胞中所占比例進(jìn)行分級(jí)。<5%的陽(yáng)性細(xì)胞反應(yīng)為（-），5%～25%的陽(yáng)性細(xì)胞反應(yīng)為（+），25%～50%的陽(yáng)性細(xì)胞反應(yīng)為（++），>50%的陽(yáng)性細(xì)胞反應(yīng)為（+++）。

1.3.2 MVD計(jì)數(shù) CD34以微血管及細(xì)胞簇著棕黃色為陽(yáng)性。在光鏡（×200）計(jì)算5個(gè)視野內(nèi)微血管數(shù)。對(duì)于有肌層且管腔>8個(gè)紅細(xì)胞的血管不予計(jì)數(shù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方分析 應(yīng)用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料處理運(yùn)用χ2檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1 VEGF在正常胃黏膜組織及腺癌組織中的表達(dá)情況 VEGF在正常胃黏膜組織中表達(dá)2例（20%），在腺癌中的表達(dá)27例（54%）。

2.2 VEGF的表達(dá)與腺癌臨床病理的關(guān)系 50例胃癌組織中，VEGF陽(yáng)性表達(dá)27例（54%），臨床分期愈高，VEGF表達(dá)有下降趨勢(shì)，浸潤(rùn)深度和轉(zhuǎn)移癌VEGF表達(dá)高，與正常胃組織比差異有顯著性P<0.01。見表2。

2.3癌組織中VEGF表達(dá)與MVD的關(guān)系 VEGF陽(yáng)性表達(dá)胃癌，MVD值為46.78±5.41，高于VEGF陰性表達(dá)者28.12±4.78，差異有顯著性。

3討論

VEGF是Ferrara等[2]1981年在牛垂體星狀細(xì)胞培養(yǎng)分離出來(lái)的一種蛋白。因其可特異性的作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)血管生成而得名。本研究顯示：VEGF和MVD在胃癌中的表達(dá)較正常組織強(qiáng)，臨床I期及病理高分化胃癌中微血管少，臨床II、III期及病理中分化及低分化中微血管多，說(shuō)明微血管隨腫瘤生長(zhǎng)而逐漸活躍。這與相關(guān)報(bào)道基本一致研究顯示，VEGF過(guò)表達(dá)和胃癌血管形成、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及胃癌發(fā)展密切相關(guān)，而且VEGF表達(dá)陽(yáng)性較陰性的患者預(yù)后差。

本研究發(fā)現(xiàn)，在腫瘤邊緣的微血管分布密集，與文獻(xiàn)報(bào)道先同[2]。部分內(nèi)皮細(xì)胞上見微血管微弱的VEGF染色。臨床分期及分級(jí)越高，MVD值越小，中晚期及分化差的癌中MVD值高，說(shuō)明腫瘤生長(zhǎng)對(duì)微血管有依賴性，微血管越多，腫瘤生長(zhǎng)就越快。

本研究表明在胃癌中VEGF表達(dá)較強(qiáng)，MVD值高。VEGF表達(dá)強(qiáng)者微血管密度高，VEGF在胃癌中有促進(jìn)微血管形成的作用。

參考文獻(xiàn)：

[1]陳忠年，沈銘昌，郭慕依.實(shí)用外科學(xué)[M].上海：上海醫(yī)科大學(xué)出版社，1997：600.

[2]周祥榮，李忠音，楊小東.PCNA和VEGF在胃癌組織中表達(dá)的關(guān)系及意義[J].華西醫(yī)學(xué) 2009；24：2585.

編輯/王海靜