摘 要 采用分子量適中且價格低廉的聚乙二醇（PEG 2000）與碳酸鈉組成雙水相體系萃取蛋清溶菌酶。通過制作相圖，分析得出25%（w/w）PEG 2000-15%（w/w）Na2CO3比例的雙水相是萃取蛋清溶菌酶較為合適的雙水相體系。研究表明PEG 2000-Na2CO3雙水相體系可將雜蛋白沉到下相，而溶菌酶則富集在上相中。當萃取體系組成為25%PEG 2000-15% Na2CO3時，蛋清溶菌酶的選擇性為6.697，雙水相萃取過程溶菌酶回收率為90.1%。

關(guān)鍵詞 雙水相萃取 PEG 2000 碳酸鈉 蛋清溶菌酶

中圖分類號：S816.7 文獻標識碼：A

Abstract The moderate molecular weight and low cost polyethylene glycol and sodium carbonate aqueous two-phase system was studied in lysozyme extraction from egg white. The results indicated that the lysozyme was concentrated in the upper-phase， while other proteins in the down-phase and the 25%（w/w）PEG 2000-15%（w/w）Na2CO3 aqueous two-phase system was best. Then the lysozyme was extracted and purified by PEG 2000-15% Na2CO3 aqueous two-phase system， which exhibited an efficient selectivity coefficient and recovery. While， the separation system composed of 25%（w/w）PEG 2000-15%（w/w）Na2CO3 was found to be efficient with a selectivity coefficient of 6.697， a recovery of 90.1%.

Key words aqueous two-phase extraction； PEG2000； Na2CO3； lysozyme from egg white

溶菌酶①②是一種專門作用于微生物細胞壁的糖苷水解酶，又稱N-乙酰己糖胺酶，相對分子質(zhì)量14600 Da，由129個氨基酸構(gòu)成，含較多堿性氨基酸，其等電點高達11左右。溶菌酶因水解細菌細胞壁而具有殺菌、抗病毒等功效。溶菌酶是一種天然安全的蛋白質(zhì)，能在胃腸內(nèi)作為營養(yǎng)物質(zhì)被消化和吸收，對人體無毒性，是一種安全性很高的營養(yǎng)保健品、食品保鮮劑和藥品。③

目前蛋清溶菌酶的提純方法多較為復(fù)雜，成本高，操作時間長，且制備的酶活力與純度較低。④⑤⑥⑦⑧雞蛋清中溶菌酶含量約為0.3%，⑨是提取溶菌酶的良好材料。本文采用熱變性、等電點沉淀及聚丙烯酸⑩處理相結(jié)合的方法從新鮮雞蛋清中粗提溶菌酶。聚丙烯酸是一種多聚電解質(zhì)，在特定的pH和離子強度條件下，與某些蛋白質(zhì)一起凝聚沉淀，而不作用于多糖、核酸等物質(zhì)。利用雙水相萃取技術(shù)從溶菌酶粗提物中進一步分離純化溶菌酶。

雙水相萃取技術(shù) （Aqueous two-phase system，ATPS）是兩種高聚物或者一種高聚物和鹽組成系統(tǒng)中利用這兩種物質(zhì)對水的親和性和兩種物質(zhì)間的疏水性的綜合作用而形成兩相。利用被提取的物質(zhì)在雙水相中受到各種作用力的綜合作用不同而達到分離的效果。分離過程中能夠有效保留酶等萃取物的生物活性。 操作方便，經(jīng)濟環(huán)保，因此較其他方法具有較大的優(yōu)點。

3 結(jié)論

本試驗建立了PEG 2000-Na2CO3雙水相相圖，確立了PEG 2000-Na2CO3的成像區(qū)域。同時發(fā)現(xiàn)溶菌酶的萃取效率與Na2CO3濃度及PEG濃度有關(guān)。萃取蛋清溶菌酶的最佳體系為25% PEG 2000-15%Na2CO3，此時蛋清溶菌酶的選擇性為6.697，雙水相萃取過程溶菌酶回收率為90.1%。但雙水相體系萃取的影響因素較多，這可能不是最佳選擇，還需要進一步探索。

*通信作者：付加芳

注釋

① 俞其林，勵建榮.溶菌酶及其應(yīng)用[J].農(nóng)產(chǎn)品加工，2007（8）：78-81.

② 林翠花，肖素榮，孟慶國.溶菌酶結(jié)構(gòu)特點及其應(yīng)用[J].濰坊學院學報，2005.5（2）：108-110.

③ 何金花，劉譽，劉冠杰，李琳娜，李海成，王麗娟.溶菌酶在醫(yī)藥中的研究及其研究進展[J].今日藥學，2008.18（2）：16-19.

④ 齊曉岑.蛋清提取溶菌酶技術(shù)[J].適用技術(shù)之窗，1999（2）：10.

⑤ 孫京新，姜連芳，李文香.蛋清中溶菌酶的提取[J].萊陽農(nóng)學院學報，1998.15（4）：285-288.

⑥ 李宗孝，原春蘭，張建超.蛋清中溶菌酶的提取研究[J].精細化工，2001.18（2）：103-105.

⑦ 楊景芝，孫衍華，白吉剛.雞蛋清溶菌酶提取工藝的改進[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2004.30（5）：85-87.

⑧ 遲玉杰，高興華，孔寶華.雞蛋清中溶菌酶的提取工藝研究[J].工藝技術(shù)，2002.23（3）：44.

⑨ 林翠花.溶菌酶結(jié)構(gòu)特點及其應(yīng)用[J].濰坊學院學報，2005.2（5）：108-110.

⑩ 余梅芳.從雞蛋殼中提取溶菌酶方法的研究[J].菏澤師專學報，2002.24（4）：36-37.

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