排合爾丁·穆太力甫 李建玲 馬正海

摘要 [目的]研究烏魯木齊地區(qū)牛口蹄疫O型AsiaΙ型雙價(jià)滅活疫苗的免疫效果。[方法] 應(yīng)用液相阻斷ELISA法檢測(cè)492份口蹄疫O型AsiaΙ型雙價(jià)滅活疫苗的免疫效果。[結(jié)果] 免疫牛群對(duì)?？谔阋逴型的平均免疫合格率為97.6%，對(duì)AsiaΙ型的平均免疫合格率為97.7%。[結(jié)論] 牛口蹄疫O型AsiaΙ型雙價(jià)滅活疫苗可以使免疫牛產(chǎn)生有效的免疫保護(hù)。

關(guān)鍵詞 口蹄疫病毒；O型；AsiaΙ型；雙價(jià)滅活疫苗；免疫保護(hù)

中圖分類號(hào) S857.65 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2014）27-09400-02

Immune Effect Detection of Bivalent Inactivated Vaccine of Otype AsiaⅠof Cattle Footandmouth Disease in Urumqi Area

Paiheerding Mutailifu¹，LI Jianling2*， MA Zhenghai¹

（1.College of Life Science and Technology， Xinjiang University， Urumqi， Xinjiang 830046； 2.Urumqi Animal Disease Control and Diagnostic Center， Urumqi， Xinjiang 830063）

Abstract [Objective] The research aimed to study the immune effect of bivalent inactivated vaccine of Otype Asia Ι of cattle footandmouth disease in Urumqi region. [Method] The immune effect of 492 bivalent inactivated vaccines of Otype Asia Ι of footandmouth disease was detected by using liquidphase blocking ELISA. [Result] The average immune qualified rate of the immunized cattle to Otype footandmouth disease was 97.6%， and the average immune qualified rate to Asia Ι type was 97.7%. [Conclusion] The effective immune protection of immunized cattle could be obtained by using bivalent inactivated vaccine of Otype AsiaΙ of cattle footandmouth disease.

Key words FMDV；Otype；AsiaI type；Bivalent inactivated vaccine； Immune protection

口蹄疫（Foot and mouth disease，F(xiàn)MD）是由口蹄疫病毒（FMDV）引起的偶蹄類動(dòng)物感染的一種急性、接觸性傳染病，主要危害豬、牛、羊等70種家畜和野生動(dòng)物，人類也易感，對(duì)畜牧業(yè)造成巨大的危害^[1]。自然感染口蹄疫的潛伏期一般較短，2～8 d，有時(shí)可能為1～14 d，這取決于病毒感染量、病毒毒株和傳染方式等。?？谔阋叩脑缙诎Y狀很可能包括牛的產(chǎn)奶量減少，并伴隨有厭食、精神沮喪和發(fā)熱。此后1 d左右口腔及周圍、蹄部和乳房（尤其是乳頭）可見水泡^[2-3]。FMDV屬于小RNA病毒科，病毒粒子外形呈二十面體，由4種結(jié)構(gòu)蛋白（VP1、VP2、VP3、VP4）各60個(gè)拷貝組成，其共有7個(gè)血清型（O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3、AsiaI型）。據(jù)國(guó)際口蹄疫參考實(shí)驗(yàn)室對(duì)疫情通報(bào)統(tǒng)計(jì)，O型在世界范圍流行最廣，其次為AsiaI和A型，C型和南非三型非常罕見，通常只在特定區(qū)域流行。目前，我國(guó)正面臨以O(shè)型和AsiaI型為主要的口蹄疫病的大流行^[4-6]。

快速診斷FMDV感染的家畜并對(duì)非疫區(qū)的動(dòng)物實(shí)施疫苗接種是控制口蹄疫暴發(fā)的主要策略。FMDV 7個(gè)血清型之間無(wú)交叉免疫保護(hù)，即使同一血清型不同毒株的抗原性也有較大變化，對(duì)FMDV主要抗原位點(diǎn)、細(xì)胞受體及其引起侵入機(jī)體的免疫學(xué)反應(yīng)等的深入研究對(duì)研制安全、高效的口蹄疫疫苗至關(guān)重要。目前，包括亞單位疫苗、載體疫苗、基因缺失疫苗、合成肽疫苗、核酸疫苗、植物反應(yīng)器可飼疫苗和多表位疫苗等在內(nèi)的新型口蹄疫疫苗均見報(bào)道^[7-9]，這些新型疫苗的研究取得了一些成果，但在免疫效果和生產(chǎn)成本等方面尚無(wú)法與常規(guī)疫苗競(jìng)爭(zhēng)，加上FMDV弱毒活疫苗有返強(qiáng)并使免疫動(dòng)物發(fā)病的危險(xiǎn)，已被世界上大多數(shù)國(guó)家所摒棄，因此目前口蹄疫預(yù)防和控制主要依靠口蹄疫滅活疫苗。

口蹄疫滅活疫苗是利用常規(guī)技術(shù)制造的以滅活病毒為抗原的一類疫苗，滅活疫苗因其安全有效而被廣泛應(yīng)用于易感家畜免疫接種。疫苗的免疫效果直接關(guān)系到口蹄疫的防控效果。為了掌握烏魯木齊市牲畜牛在接種口蹄疫O型AsiaI型雙價(jià)滅活疫苗后產(chǎn)生的免疫效果，筆者用口蹄疫液相阻斷ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒對(duì)烏魯木齊市不同地區(qū)該疫苗免疫牛血清中粒子抗原抗體水平及免疫保護(hù)力進(jìn)行研究，以期為口蹄疫的預(yù)防與控制提供參考。

1 材料與方法

1.1 疫苗效果檢測(cè)的樣品來(lái)源及數(shù)量

樣品來(lái)自于新疆維吾爾自治區(qū)烏魯木齊市7個(gè)區(qū)（天山區(qū)、米東區(qū)、頭區(qū)、水區(qū)、烏縣、大阪城、新市區(qū)）向?yàn)豸斈君R市動(dòng)物疾病控制與診斷中心送檢免疫牛血清492份。采血牛是按照國(guó)家強(qiáng)制性免疫接種要求（牲畜口蹄疫疫苗的免疫注射密度應(yīng)達(dá)到99%以上）給犢牛（奶牛）90日齡進(jìn)行初免，間隔1個(gè)月進(jìn)行1次強(qiáng)化免疫，以后每隔4個(gè)月免疫1次的免疫程序免疫的，牛、羊O型AsiaI型雙價(jià)口蹄疫滅活疫苗均為金宇保靈生物藥品有限公司產(chǎn)品。

1.2 檢測(cè)診斷試劑

口蹄疫液相阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒購(gòu)于中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所。

1.3 檢測(cè)方法

應(yīng)用口蹄疫O型、亞Ⅰ型抗體液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒對(duì)免疫牛血進(jìn)行O型、AsaiI型口蹄疫免疫抗體水平檢測(cè)，檢測(cè)方法參照試劑盒說(shuō)明書。

1.4 結(jié)果判定

每塊板設(shè)置4孔病毒抗原對(duì)照，直接用PBST稀釋至工作濃度，與血清/病毒抗原復(fù)合物同步加入酶標(biāo)板孔，50 μl/孔。以病毒抗原對(duì)照平均OD492 nm值的50%為臨界值，被檢血清OD492 nm值大于臨界值的孔為陰性孔，小于等于臨界值的孔為陽(yáng)性孔。某份血清系列稀釋中，陽(yáng)性孔的最高稀釋倍數(shù)為被檢血清是抗體效價(jià)。定性檢測(cè)中，2個(gè)重復(fù)孔只要有1孔為陽(yáng)性孔，則抗體滴度判定為1∶64，2孔均為陽(yáng)性孔，則判定為抗體滴度>1∶64；當(dāng)血清抗體滴度≥1∶64時(shí)，判定抗口蹄疫抗體效價(jià)合格；存欄家畜免疫抗體合格率達(dá)70%時(shí)，判定為疫苗免疫合格。

2 結(jié)果與分析

采用ELISA法檢測(cè)了492份口蹄疫O型AsiaΙ型雙價(jià)滅活疫苗免疫牛血清的免疫抗體水平、O型和AsiaΙ型口蹄疫抗體檢測(cè)的合格率。由表1可知，492份免疫牛血樣中，口蹄疫O型測(cè)定值抗體滴度達(dá)到1∶64以上的共有480份，平均免疫合格率為97.6%；口蹄疫AsiaΙ型共有482份，平均合格率為97.7%，完全符合國(guó)家疫苗免疫要求（存欄家畜免疫抗體合格率達(dá)70%時(shí)判定合格）。

3 討論

梁宏志等^[10]報(bào)道哈爾濱地區(qū)牛、羊進(jìn)行O型和Asia Ι 型雙價(jià)口蹄疫滅活疫苗合格率檢測(cè)免疫合格率均為72.3%。鄭慶維等^[11]報(bào)道云南省龍陵縣牛O型AsiaI型雙價(jià)滅活疫苗免疫合格率分別為74%和76%。該試驗(yàn)檢測(cè)出的?？谔阋逴型和AsiaΙ型雙價(jià)滅活疫苗的免疫合格率較高，說(shuō)明口蹄疫O型AsiaΙ型雙價(jià)滅活疫苗可以使免疫牛產(chǎn)生有效的免疫保護(hù)。

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