張漫 李娜 高木珍 張寧 劉曉輝 王輝

摘要：隨機(jī)選取本實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的8名化驗(yàn)員，分別測(cè)定豬肉組織中氟喹諾酮類藥物殘留量，通過(guò)對(duì)結(jié)果數(shù)據(jù)的分析，得出本實(shí)驗(yàn)室測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確程度。通過(guò)磷酸鹽緩沖溶液提取豬肉組織中的氟喹諾酮類藥物殘留，經(jīng)C18柱凈化后，用高效液相色譜法測(cè)定含量。環(huán)丙沙星、達(dá)氟沙星、恩諾沙星和沙拉沙星的平均回收率（%）分別為：95.6、86.9、89.3和95.6，批內(nèi)變異系數(shù)均≤14%，批間變異系數(shù)均≤6%。結(jié)果數(shù)據(jù)滿足標(biāo)準(zhǔn)要求，證明本實(shí)驗(yàn)室能準(zhǔn)確開展此項(xiàng)檢測(cè)活動(dòng)。

關(guān)鍵詞：氟喹諾酮類藥物；達(dá)氟沙星；恩諾沙星；環(huán)丙沙星；沙拉沙星；殘留檢測(cè)

Determination of Fluoroquinolones Residues in Pork Tissue

Abstract: We selecting 8 technicians in our laboratory randomly, letting they determine fluoroquinolones residues in pork tissues separately. Based on the analysis of the experimental data, we concluded the accuracy of my determination results. The Fluoroquinolones residues are extracted with phosphate buffer solution, cleaned by C18 SPE cartridge, then content was determined by HPLC. The average recoveries of four components were 95.6%, 86.9%, 89.3%, 95.6%.The variation coefficient of inter-assay were below 14%, intra-assay were below 6%. The results meet requirements , so we can carry out the test.

Key word: fluoroquinolones;danofloxacin; enrofloxacin; ciprofloxacin; sarafloxacin; residues determination

氟喹諾酮類藥物屬第3代喹諾酮類抗菌藥，適應(yīng)于敏感病原菌所致的呼吸道、胃腸道等感染，具有吸收好、組織濃度高、半衰期長(zhǎng)、抗菌譜廣等優(yōu)點(diǎn)，已成為獸醫(yī)臨床的常用藥。但隨著臨床用量的不斷增長(zhǎng)，因不合理用藥或?yàn)E用藥而導(dǎo)致的畜產(chǎn)品質(zhì)量安全問(wèn)題時(shí)有發(fā)生，并越來(lái)越引起社會(huì)的廣泛關(guān)注。本文在運(yùn)用“農(nóng)業(yè)部1025號(hào)公告-14-2008”標(biāo)準(zhǔn)[1]的基礎(chǔ)上，結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室的工作實(shí)際，隨機(jī)選取8名本實(shí)驗(yàn)室的化驗(yàn)員，同時(shí)并獨(dú)立完成豬肉組織中氟喹諾酮類藥物殘留檢測(cè)工作，得出檢測(cè)回收率，分析和判斷測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

天平，感應(yīng)0.01 g；分析天平，感應(yīng)0.000 01 g；Aglient 1 200高效液相色譜儀-配熒光檢測(cè)器；振蕩器；組織勻漿機(jī)；離心機(jī)；Varian BondElut?誖C18柱（100 mg/mL）固相萃取柱；0.45 μm微孔濾膜。

1.2 藥品與試劑

達(dá)氟沙星，批號(hào)10301，含量93.5%, Dr.Ehrenstorfer Gmbh公司；恩諾沙星，批號(hào)H0081206，含量99.9%,中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；環(huán)丙沙星，批號(hào)130451-201203，含量84.2%,中國(guó)食品藥品檢定研究所；沙拉沙星，批號(hào)20629，含量95.0%,Dr.Ehrenstorfer Gmbh公司。磷酸、氫氧化鈉、甲醇、三乙胺、磷酸二氫鉀均為分析純；乙腈為色譜純；超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：C18Analytical，5 μm， 4.6×250 mm；流動(dòng)相：0.05 mol/L磷酸溶液/三乙胺-乙腈（82+18）V/V，使用前經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾；柱溫：25℃；流速：0.8 mL/min；進(jìn)樣量：20μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：激發(fā)波長(zhǎng)280 nm，發(fā)射波長(zhǎng)450 nm。

2.2 樣品制備

2.2.1 空白樣品的制備 取豬肌肉組織200 g絞碎，作為空白樣品。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備精密稱取達(dá)氟沙星對(duì)照品10 mg，置于50 mL容量瓶中，用0.03 mol/L氫氧化鈉溶液溶解并稀釋成濃度為0.2 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；分別精密稱取恩諾沙星、環(huán)丙沙星、沙拉沙星對(duì)照品各50 mg，依次置于50 mL容量瓶中，用0.03 mol/L氫氧化鈉溶液溶解并稀釋成濃度為1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，置于4℃冰箱中保存[2]。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)工作液的制備分別精密量取1 mL達(dá)氟沙星標(biāo)準(zhǔn)貯備液、0.2 mL恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)貯備液、環(huán)丙沙標(biāo)準(zhǔn)貯備液星和沙拉沙星標(biāo)準(zhǔn)貯備液于同一100 mL容量瓶中，用乙腈稀釋定容，制成濃度依次為2 μg/mL的達(dá)氟沙星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星、沙拉沙星標(biāo)準(zhǔn)工作液，備用。

2.2.4 陽(yáng)性添加樣品的制備8批（人）分別各自稱取空白樣品4個(gè)，每個(gè)樣品稱取2（±0.05）g，其中一個(gè)作為空白樣品，其余三個(gè)樣品分別依次添加濃度為2 μg/mL的達(dá)氟沙星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星和沙拉沙星混合標(biāo)準(zhǔn)工作液0.2 mL，制成200μg/kg的陽(yáng)性樣品，用于測(cè)定回收率[3]。

2.3 提取凈化方法

將稱取的2（±0.05）g豬肌肉組織樣品置于30 mL勻漿杯中，加磷酸鹽沖溶液10.0 mL，10 000 r/min勻漿1 min。勻漿液轉(zhuǎn)入離心管中，中速振蕩5 min，以10 000r/min離心5 min，取上清液待用。用磷酸鹽緩沖溶液10.0 mL清洗刀頭及勻漿杯，轉(zhuǎn)入離心管中，洗殘?jiān)?，混勻，中速振? min，以10 000r/min離心5 min。合并兩次上清液，混勻，備用。固相萃取柱先依次用甲醇、磷酸鹽緩沖溶液各2 mL預(yù)洗。取上清液5.0mL過(guò)柱，用水1 mL淋洗，擠干。用流動(dòng)相1.0 mL洗脫，擠干，收集洗脫液。經(jīng)濾膜過(guò)濾后作為試樣溶液，供高效液相色譜測(cè)定[4]。

2.4 試驗(yàn)結(jié)果

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線 在選定的色譜條件下，0.005～0.5 μg/mL的范圍內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)曲線及相關(guān)系數(shù)如下，線性良好。配制濃度見(jiàn)表1。

環(huán)丙沙星：y=603.580 19x-0.229 998, r=0.999 39

達(dá)氟沙星：y=5 406.704 01x+0.941 808, r=0.999 75

恩諾沙星：y=1 303.249 25x+2.133 35, r=0.999 78

沙拉沙星：y=484.622 58x+0.153 636, r=0.999 93

2.4.2 測(cè)定結(jié)果 環(huán)丙沙星、達(dá)氟沙星、恩諾沙星和沙拉沙星分離良好，無(wú)干擾，定量限為20μg/kg，添加濃度為200 μg/kg，批內(nèi)變異系數(shù)均小于14%，批間變異系數(shù)均小于6%。環(huán)丙沙星、達(dá)氟沙星、恩諾沙星和沙拉沙星平均回收率（%）分別為：95.6、86.9、89.3和95.6，總體回收率（%）范圍為77～113。達(dá)氟沙星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星和沙拉沙星回收率見(jiàn)表2，色譜圖見(jiàn)圖1～3。

3討論

環(huán)丙沙星和沙拉沙星平均回收率為95%以上；達(dá)氟沙星和恩諾沙星平均回收率在85%～90%區(qū)間，總體回收率較好。

批內(nèi)變異系數(shù)的大小和化驗(yàn)員工作熟練程度及工作經(jīng)驗(yàn)有直接關(guān)系，熟練的化驗(yàn)員所測(cè)得的回收率批內(nèi)變異系數(shù)較低，工作時(shí)間較短的化驗(yàn)員所測(cè)得的回收率批內(nèi)變異系數(shù)較高。

環(huán)丙沙星、達(dá)氟沙星、恩諾沙星和沙拉沙星檢測(cè)殘留量的批間變異系數(shù)（%）均小于6%，誤差較低。

以上為本實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)數(shù)據(jù)，為其它實(shí)驗(yàn)室開展同類檢測(cè)提供數(shù)據(jù)支持?！觯ň庉嫞旱一?

參考文獻(xiàn)：

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