廖貴城 劉麗丹 王文莉等

摘 要：經(jīng)過(guò)20代的選育，選育出了布氏艾美耳球蟲保定株早熟系蟲株，該早熟系蟲株與親本株均對(duì)常見(jiàn)的抗球蟲藥物——克球素、地克珠利、磺胺喹惡啉和尼卡巴嗪高度敏感，敏感性與保定親本株一致；分別接種200個(gè)該早熟系蟲株和親本株孢子化卵囊，21d后雞群均能抵抗1.0×105個(gè)布氏艾美耳球蟲強(qiáng)毒株孢子化卵囊的攻擊，說(shuō)明早熟株仍然保持良好的免疫原性。

關(guān)鍵詞：布氏艾美耳球蟲保定株；早熟株；藥物敏感性；免疫原性

中圖分類號(hào)：S858.312.72+3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B 文章編號(hào)：1673-1085（2014）09-0016-04

雞球蟲病是集約化養(yǎng)雞場(chǎng)中流行普遍、發(fā)病率高、危害嚴(yán)重的疾病之一[1]。布氏艾美耳球蟲（Eimeria. brunetti）在國(guó)內(nèi)外流行較為廣泛，屬中等致病力蟲種，可明顯地降低雞的飼料轉(zhuǎn)化率和增重，對(duì)雞的生產(chǎn)性能有較強(qiáng)的影響[2，3]。目前雞球蟲病疫苗是防控該疾病的主要手段，國(guó)內(nèi)市面上銷售的主要是正典雞球蟲病三價(jià)、四價(jià)疫苗，而包含布氏艾美耳蟲種的疫苗產(chǎn)品只有先靈葆雅公司的八價(jià)種雞球蟲活疫苗[1]。本公司采用Jeffers法，經(jīng)過(guò)20代的早熟選育，選育出了布氏艾美耳球蟲保定株早熟系蟲株，該蟲株潛隱期為88h，平均大小為24.4μm×20.0μm，形狀指數(shù)為1.22，與親本株一致，繁殖力和致病力顯著低于親本株[3，4，5]。為此，我們將該早熟系蟲株進(jìn)行免疫原性測(cè)定，評(píng)價(jià)該蟲株是否可作為疫苗的候選蟲種。

1 材料和方法

1.1 材料 布氏艾美耳球蟲保定株，布氏艾美耳球蟲保定株早熟系蟲株和布氏艾美耳強(qiáng)毒株由佛山市正典生物技術(shù)有限公司保存[3]；1日齡無(wú)球蟲感染嶺南黃雞購(gòu)自廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧研究所種雞場(chǎng)；無(wú)添加抗球蟲藥物和抗生素的全價(jià)飼料購(gòu)自中山市某飼料公司；克球素，成分為6%葵氧喹酯預(yù)混劑，購(gòu)自廣州市科虎生物技術(shù)公司；球安，成分為拉沙洛菌素，購(gòu)自河南大中農(nóng)動(dòng)物藥業(yè)有限公司；地克珠利，0.5%預(yù)混劑，購(gòu)自杭州豐禾生物技術(shù)有限公司；磺胺喹惡啉由佛山市正典生物技術(shù)有限公司提供；尼卡巴嗪，購(gòu)自山東魯西獸藥股分有限公司。

1.2 方法

1.2.1 布氏艾美耳球蟲保定株的親本株和早熟系蟲株藥物敏感性試驗(yàn)

1.2.1.1 將7日齡的無(wú)球蟲感染雞隨機(jī)分成7組，每組10羽；除第6、7組外，其它5組分別于飼料或飲水中添加克球素、球安、地克珠利、磺胺喹惡啉和尼卡巴嗪。飼養(yǎng)1d后，第1～6組的每組雞感染布氏艾美耳球蟲保定株親本株孢子化卵囊1000個(gè)/羽，隔離飼養(yǎng)。分別收集感染后96～192h的糞便。用麥克馬斯特方法（Mcmaster method）分別計(jì)數(shù)各組雞糞便中排出的卵囊數(shù)。以同樣的分組處理，第1～6組的每組雞感染布氏艾美耳球蟲保定株的早熟株孢子化卵囊1000個(gè)/羽，隔離飼養(yǎng)。分別收集感染后96～192h的糞便。藥敏試驗(yàn)見(jiàn)表1。

1.2.1.2 藥物敏感性評(píng)定指標(biāo)：以相對(duì)卵囊產(chǎn)量（ROP=感染用藥組排出的卵囊總數(shù)/感染不用藥組的卵囊總數(shù)×100%）作為判定球蟲對(duì)藥物抗藥性的指標(biāo)；當(dāng)ROP≥5%，則判定為耐藥；當(dāng)ROP≤5%，則判定為敏感。

1.2.2 布氏艾美耳球蟲保定株早熟株免疫原性

1.2.2.1 將雞隨機(jī)分成4組，每組10羽，第1組為陰性對(duì)照組，不免疫不攻蟲；第2組為陽(yáng)性組，不免疫攻蟲組；第3、4組為免疫組，第3組于4日齡經(jīng)口免疫200個(gè)布氏艾美耳球蟲早熟株孢子化卵囊，第4組于4日齡經(jīng)口免疫200個(gè)布氏艾美耳球蟲保定株孢子化卵囊。置實(shí)驗(yàn)室平養(yǎng)，地上鋪上木糠作為墊料。25日齡時(shí)，第2、3、4組雞每羽口服攻擊1×105個(gè)布氏艾美耳球蟲強(qiáng)毒孢子化卵囊，攻蟲后觀察6～7d，記錄各組雞的糞便、精神狀況和飲食欲，第7天各試驗(yàn)組稱重并剖殺，作病變記分。

1.2.2.2 免疫原性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：糞便記分標(biāo)準(zhǔn)及腸道病變記分；試驗(yàn)雞攻蟲前后增重情況，相對(duì)增重率=各試驗(yàn)組的平均增重/陰性對(duì)照組的平均增重×100%；免疫保護(hù)率。

2 結(jié)果

2.1 藥物敏感性 布氏艾美耳球蟲保定株的親本株和早熟株藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

由表2可知，除了球安用藥組外，親本株和早熟株的其它各用藥組的相對(duì)卵囊產(chǎn)量（ROP）均≤5%，該蟲株的親本株和早熟株對(duì)球安之外的4種藥物均敏感。

2.2 免疫原性

2.2.1 雞增重情況 見(jiàn)表3。

由表3增重結(jié)果可見(jiàn)，攻蟲后兩個(gè)免疫組雞的相對(duì)增重稍低于陰性組，但明顯高于陽(yáng)性組；陽(yáng)性組雞受強(qiáng)毒卵囊攻擊后增重受影響，而免疫了布氏艾美耳球蟲早熟株和親本株的雞相對(duì)增重率相近，說(shuō)明免疫后能產(chǎn)生一定的免疫力，當(dāng)用強(qiáng)毒攻擊時(shí)，對(duì)雞體的影響小于未接受免疫的雞。

2.2.2 糞便記分、腸道病變記分及保護(hù)率 攻蟲后6d，陽(yáng)性組雞的糞便明顯出現(xiàn)異常，發(fā)病雞拉稀、糞便呈黃色水樣，雞只飲食欲下降、精神沉郁、打堆、兩翅下垂，腳脫水干癟；早熟株免疫組和親本株免疫組雞糞便正?；蚝^多水分，雞只精神良好，有正常飲食，無(wú)明顯臨床發(fā)病癥狀。表4腸道平均病變記分的結(jié)果顯示，免疫組雞攻蟲后病變明顯低于陽(yáng)性組，用早熟系蟲株和親本株分別免疫后可以抵抗1×105個(gè)強(qiáng)毒孢子化卵囊的攻擊。

3 分析與討論

3.1 藥物敏感性 早熟株對(duì)球蟲的抗藥性與親本株比較，雖然早熟株每羽雞的排卵囊數(shù)量與低于保定親本株，但相對(duì)卵囊產(chǎn)量即感染用藥組與感染不用藥組的比率，顯示早熟株與保定株的藥物敏感性是一致的，早熟株和保定親本株都對(duì)球安有耐藥性，對(duì)其余四種藥物敏感，說(shuō)明早熟株具有保定親本株的遺傳特性。

3.2 免疫原性 通過(guò)免疫攻蟲試驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn)，早熟株與保定株同樣免疫劑量免疫21d后，能夠抵抗1×105個(gè)布氏艾美耳球蟲強(qiáng)毒孢子化卵囊的攻擊，陽(yáng)性組糞便記分為3分，糞便呈水樣且含淡黃色粘液，而兩免疫組的糞便無(wú)明顯異常；陽(yáng)性組平均病變記分為3.2分，兩個(gè)免疫組腸道平均病變記分均小于1分，從攻蟲后增重、糞便記分及病變記分結(jié)果表明陽(yáng)性組與免疫組的差異顯著，說(shuō)明經(jīng)過(guò)早熟選育之后，早熟株具有良好的免疫原性。胡景輝等研究指出，當(dāng)免疫500個(gè)布氏艾美耳球蟲孢子化卵囊時(shí)，該蟲株的免疫效果最好[6]；而在本研究中，當(dāng)接種劑量為200個(gè)時(shí)，就可以獲得理想的免疫保護(hù)效果。一般認(rèn)為子孢子和第一代裂殖體是球蟲產(chǎn)生免疫最重要的階段，早熟株是球蟲在發(fā)育史中最后一代裂殖生殖發(fā)生缺乏或缺陷，因而早熟系的免疫原性不會(huì)因?yàn)樵缡爝x育而產(chǎn)生影響[7]。本研究結(jié)果表明布氏艾美耳球蟲早熟系蟲株能使雞群建立良好的抗布氏艾美耳強(qiáng)毒株免疫力，是雞球蟲病活疫苗理想的候選蟲株。

參考文獻(xiàn)：

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[4] 廖貴城，劉麗丹，吳松明，等.布氏艾美耳球蟲保定株早熟系的選育及致病性研究[J].家禽科學(xué)，2014，5：15-18.

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