章立華 劉力 林小鳳等

摘要[目的]研究福建七葉蓮揮發(fā)油的化學(xué)成分，探討七葉蓮揮發(fā)油的抗炎鎮(zhèn)痛作用。[方法]采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)七葉蓮揮發(fā)油的化學(xué)成分進(jìn)行了分析，結(jié)合計(jì)算機(jī)檢索技術(shù)對(duì)分離的化合物進(jìn)行鑒定，應(yīng)用面積歸一法計(jì)算各成分的相對(duì)含量，采用醋酸扭體法、小鼠耳二甲苯致炎腫脹法評(píng)價(jià)七葉蓮揮發(fā)油的抗炎鎮(zhèn)痛效果。[結(jié)果]從七葉蓮部分揮發(fā)油中共分離出61種成分，并鑒定確認(rèn)了其中53種主要成分，其中主要化合物和含量分別為4萜品醇20.40%、（-）-斯巴醇16.01%、氧化石竹烯8.90%等；七葉蓮揮發(fā)油可明顯減少小鼠醋酸所致的扭體次數(shù)，可明顯緩解小鼠二甲苯所致的耳廓腫脹。[結(jié)論]福建七葉蓮揮發(fā)油中主要含萜品烯、醇類(lèi)化合物，且其揮發(fā)油具有明顯抗炎鎮(zhèn)痛作用。

關(guān)鍵詞七葉蓮；揮發(fā)油；氣相色譜-質(zhì)譜法；抗炎鎮(zhèn)痛作用

中圖分類(lèi)號(hào)S567文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2014）23-07732-04

基金項(xiàng)目新疆醫(yī)科大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新基金（CX2014035，XJC2011117）。

作者簡(jiǎn)介章立華（1987- ），男，江西南昌人，碩士研究生，研究方向：天然藥物的開(kāi)發(fā)。*通訊作者，副教授，碩士，從事天然藥物化學(xué)研究。

收稿日期20140707七葉蓮（Schefflera arboricola Hayata），五加科鵝掌柴屬植物七葉蓮，別名小葉鴨腳木、漢桃葉、七葉爛、七葉藤、七加皮、狗腳蹄、沒(méi)骨消等，產(chǎn)于福建、臺(tái)灣、廣東等地，全年可采，以根、莖、葉入藥[1]。本品性苦味甘、祛風(fēng)除濕、活血止痛，對(duì)三叉神經(jīng)痛、偏頭痛、各種癌癥及手術(shù)后的疼痛均有良好的療效。《中國(guó)藥典》（一部）1977年版對(duì)七葉蓮有收載。近年來(lái)，一些學(xué)者對(duì)其藥理作用、植物化學(xué)成分開(kāi)展了大量研究[2-3]，目前相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道七葉蓮中含有三萜皂苷、揮發(fā)油、油脂、黃酮及苷等[4] 。藥理研究表明該植物對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)有較強(qiáng)作用，此外還具有抗腫瘤、抑制平滑肌收縮等作用[5-6]。筆者采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)[7-8]測(cè)定福建七葉蓮揮發(fā)油的化學(xué)成分，采用醋酸扭體法、小鼠耳二甲苯致炎腫脹法[9] 評(píng)價(jià)七葉蓮揮發(fā)油的抗炎鎮(zhèn)痛作用，為進(jìn)一步研究七葉蓮揮發(fā)油的藥理作用提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1研究對(duì)象。試驗(yàn)所用的七葉蓮采自泉州市清源山，經(jīng)華僑大學(xué)分子藥物學(xué)研究院副教授劉建福鑒定為七葉蓮（Schefflera arboricola Hayata）的莖、葉。

1.1.2主要儀器。GC/MS 聯(lián)用儀，TURBOMASSAUTOSYSTEM XL型（PE公司）；電子天平，AB135S（Mettler Toledo公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，RE5298A（上海亞榮生化儀器廠(chǎng)）；循環(huán)水式多用真空泵，SHBⅢS（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）；三用恒溫水箱，HHW600（江蘇省金壇市醫(yī)療儀器廠(chǎng)）。

1.1.3主要試劑。二甲苯（批號(hào)20100126，沈陽(yáng)市新化試劑廠(chǎng)生產(chǎn)）；角叉菜膠（批號(hào)G1013-05G，Sigma 公司產(chǎn)品）；吲哚美辛（批號(hào)840643，上海第十七制藥廠(chǎng)）；醋酸地塞米松（批號(hào)091105，浙江仙琚制藥股份有限公司）；其余試劑均為分析純。

1.2方法

1.2.1七葉蓮葉揮發(fā)油提取與分離。 取新鮮七葉蓮葉15 kg，水蒸汽蒸餾取餾出液，用乙醚萃取3 次，合并乙醚萃取液，減壓蒸餾回收乙醚，用無(wú)水硫酸鈉干燥24 h 后，過(guò)濾，得到具有特殊氣味的無(wú)色揮發(fā)油5.97 g。

1.2.2GC/MS 聯(lián)用儀條件。

1.2.2.1色譜條件。Supelcowax10 彈性石英毛細(xì)管柱，色譜柱長(zhǎng)60 m，內(nèi)徑0.25 mm，分流進(jìn)樣，分流比60∶1，進(jìn)樣量0.25 μl，載氣氦氣（99.999%），載氣流速16 psi，流量1.09 ml/min。進(jìn)樣口溫度240 ℃，初始柱溫65 ℃，以3.3 ℃/min的速率升至230 ℃，并保持10 min。

1.2.2.2質(zhì)譜條件。電離方式為EI，功率70 eV，光電倍增270 V，質(zhì)量掃描范圍35～500 u，掃描間隔0.2 s，電子能量70 eV；離子源200 ℃，接口溫度220 ℃，進(jìn)樣量0.2 μl。工作站名稱(chēng)Turbmass 4.1，標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜庫(kù)NIST98，WILEY庫(kù)。

1.2.3揮發(fā)油的成分鑒定。用GCMS聯(lián)用儀進(jìn)行全掃描分析；用化學(xué)工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)檢NIST98圖譜庫(kù)進(jìn)行譜圖解析并確認(rèn)揮發(fā)油中各成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)；利用該儀器所配的NIST98和Wiley7譜庫(kù)進(jìn)行自動(dòng)檢索，在對(duì)所得的譜圖進(jìn)行人工核對(duì)和補(bǔ)充檢索，用面積歸一法測(cè)得各組分的百分含量。

1.2.4小鼠足趾測(cè)定裝置。根據(jù)毛細(xì)管放大法，用導(dǎo)管、活塞和移液管等自制而成。清潔級(jí)昆明種小鼠，雌雄兼用，體重20～22 g，購(gòu)自福州市吳氏實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào)2007000516322。喂食鼠顆粒飼料和自來(lái)水，給藥前禁食12 h。

1.2.5醋酸扭體法鎮(zhèn)痛試驗(yàn)。小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分成5 組。陰性對(duì)照組給予2% 吐溫80溶液10 ml/kg，連續(xù)灌胃5 d；陽(yáng)性對(duì)照組給予吲哚美辛溶液0.4 mg/kg，第4 天開(kāi)始灌胃給藥；樣品組給予相應(yīng)藥物，連續(xù)灌胃5 d。末次給藥后0.5 h，腹腔注射0.6% 醋酸溶液0.2 ml，用相機(jī)錄像（常規(guī)方法上改進(jìn)，保證記錄時(shí)間的平行性），觀(guān)察并記錄小鼠15 min 的扭體反應(yīng)次數(shù)，并計(jì)算扭體抑制率。

1.2.6對(duì)二甲苯誘發(fā)小鼠耳腫脹試驗(yàn)。雄性小鼠50只，隨機(jī)分5組。陰性對(duì)照組給予2% 吐溫80 溶液10 ml/kg，連續(xù)灌胃給藥5 d；陽(yáng)性對(duì)照組給予地塞米松溶液0.4 mg/kg，第4 天開(kāi)始灌胃給藥；樣品組連續(xù)灌胃5 d。末次給藥后0.5 h，小鼠左耳正反面各注射二甲苯于10 μl 致炎，15 min 后脫臼致死，用直徑為8 mm 的打孔器沿左右耳片同一部位打下圓耳片，稱(chēng)重，左右耳的重量差作為腫脹度，比較組間差異顯著性。其中，腫脹抑制率（%）=（對(duì)照組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度）/對(duì)照組平均腫脹度×100%。

2結(jié)果與分析

2.1七葉蓮揮發(fā)油化學(xué)成分分析對(duì)七葉蓮揮發(fā)油氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析，得出七葉蓮揮發(fā)油成分GCMS總離子圖（）。從可以看出，各化合物分離效果較好，基線(xiàn)穩(wěn)定，雜峰小和無(wú)拖尾峰，共分離出61種化合物。各色譜峰相應(yīng)的質(zhì)譜圖經(jīng)人工解析及計(jì)算機(jī)檢索，確定其化學(xué)結(jié)構(gòu)，共鑒定出53 種化合物，并用面積歸一化法測(cè)定出相對(duì)含量（）。由可見(jiàn)，從七葉蓮揮發(fā)油中共分離出61種化合物，53種化合物已經(jīng)鑒別出，其中4-萜品醇含量最高，占20.40%；其次是（-）-斯巴醇，占16.01%；氧化石竹烯占8.90%；里那醇占5.23%；其他化合物均低于5%。

2.2七葉蓮揮發(fā)油的抗炎鎮(zhèn)痛作用

2.2.1醋酸扭體法鎮(zhèn)痛試驗(yàn)。按“1.2.5”試驗(yàn)方法操作，結(jié)果表明（），與陰性對(duì)照比較，揮發(fā)油16 mg/kg 組可明顯減少小鼠的扭體次數(shù)（P<0.01），說(shuō)明七葉蓮揮發(fā)油具有一定的抗炎鎮(zhèn)痛作用。

2.2.2對(duì)二甲苯誘發(fā)小鼠耳腫脹的影響。按“1.2.6”試驗(yàn)方法操作，結(jié)果發(fā)現(xiàn)（），與陰性對(duì)照比較，揮發(fā)油16、8和4 mg/kg 組對(duì)二甲苯所致的急性炎癥均有明顯的抑制作用（P<0.01），且優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照組。說(shuō)明七葉蓮揮發(fā)油具有一定的抗炎鎮(zhèn)痛作用。安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)2014年

七葉蓮葉揮發(fā)油對(duì)醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響組別劑量∥mg/kg扭體次數(shù)∥次抑制率∥%陰性對(duì)照-55.6 ± 2.20陽(yáng)性對(duì)照0.428.3 ± 4.8*49.1揮發(fā)油1627.0 ± 4.2*51.4揮發(fā)油840.1 ± 3.527.9揮發(fā)油442.8 ± 3.723.0注：*表示與陰性對(duì)照比較差異顯著（P<0.01）。

七

3結(jié)論與討論

采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)七葉蓮揮發(fā)油的化學(xué)成分進(jìn)行了分析，結(jié)合計(jì)算機(jī)檢索技術(shù)對(duì)分離的化合物進(jìn)行鑒定，應(yīng)用面積歸一法計(jì)算各成分的相對(duì)含量，采用醋酸扭體法、小鼠耳二甲苯致炎腫脹法評(píng)價(jià)七葉蓮揮發(fā)油的抗炎鎮(zhèn)痛效果。結(jié)果表明，從七葉蓮揮發(fā)油中共分離出61種成分，并鑒定確認(rèn)了其中53種主要成分，其中主要化合物和含量分別為4-萜品醇20.40%、（-）-斯巴醇16.01%、氧化石竹烯8.90%等；七葉蓮揮發(fā)油可明顯減少小鼠醋酸所致的扭體次數(shù)，可明顯緩解小鼠二甲苯所致的耳廓腫脹?？梢?jiàn)，福建七葉蓮揮發(fā)油中主要含萜品烯、醇類(lèi)化合物，且其揮發(fā)油具有明顯抗炎鎮(zhèn)痛作用。

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（上接第7717頁(yè)）

有定向創(chuàng)造遺傳變異、優(yōu)良基因高效重組和聚合等優(yōu)點(diǎn)。通過(guò)轉(zhuǎn)基因、點(diǎn)突變等手段創(chuàng)造轉(zhuǎn)錄因子的超表達(dá)轉(zhuǎn)基因株系或突變體，可進(jìn)一步解析其對(duì)抗逆相關(guān)基因的調(diào)控機(jī)理，為提高作物的抗逆性、培育新的抗逆品種奠定基礎(chǔ)。

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