亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        響應面法優(yōu)化瓊膠酶發(fā)酵培養(yǎng)

        2014-04-29 00:44:03修爽祖國仁
        安徽農(nóng)業(yè)科學 2014年23期
        關(guān)鍵詞:脂粉面法酵母

        修爽 祖國仁

        摘要[目的]優(yōu)化海洋細菌Vibrio agarivorans1產(chǎn)瓊膠酶液體發(fā)酵培養(yǎng)基的最佳組分。[方法]首先通過單因素試驗篩選出3個重要因子(瓊脂、NaCl和酵母膏質(zhì)量濃度),在單因素的基礎(chǔ)上,通過BoxBehnken試驗設(shè)計和響應面分析法確定了3個因子的最優(yōu)發(fā)酵條件。[結(jié)果]最佳營養(yǎng)組分為:瓊脂粉質(zhì)量濃度為3.9 g/L,NaCl質(zhì)量濃度為45.2 g/L,酵母膏質(zhì)量濃度為12.9 g/L,此條件下酶活力達到7.589 U/g,比優(yōu)化前提高了3.35倍。[結(jié)論]該研究對提高海洋細菌Vibrio agarivorans1產(chǎn)瓊膠酶具有重要意義。

        關(guān)鍵詞海洋細菌Vibrio agarivorans1;瓊膠酶;響應面

        中圖分類號S188;TS201.6文獻標識碼A文章編號0517-6611(2014)23-07729-03

        作者簡介修爽(1989- ),女,遼寧鞍山人,碩士研究生,研究方向:海洋微生物。

        收稿日期20140710瓊膠酶能將瓊膠多糖降解為瓊膠寡糖,目前瓊膠寡糖已廣泛應用于食品業(yè)、化妝業(yè)和醫(yī)藥工業(yè),如作為抗氧化劑、功能性食品基料、天然防腐劑、淀粉老化抑制劑及高甜度甜味劑的填充劑和分散劑[1-3]等。同時瓊膠酶也是分解海藻獲得單細胞或原生質(zhì)體及推測其多糖結(jié)構(gòu)的一種重要工具酶[4]。利用瓊膠酶降解瓊膠是制備低聚糖的一個重要途徑,由于其具有專一性,可選擇性地酶切特定鏈的特定位置,且反應條件溫和,降解流程易于控制,屬于綠色環(huán)保的技術(shù),這有利于寡糖的規(guī)模化制備,使酶解法在多糖降解中的應用日益增加。

        ENOKI等[5]認為瓊膠寡糖具有誘導細胞調(diào)亡、抑制NO等作用。另有研究發(fā)現(xiàn)瓊膠寡糖具抗氧化[6-7] 、促進雙歧桿菌生長、清除自由基等多種生理功能[8-9] 。

        筆者通過單因素試驗,確定對酶活影響較顯著的因素并選出不同因素的最優(yōu)條件,最后利用響應面法確定最優(yōu)培養(yǎng)基組分和酶活最優(yōu)值。

        1材料與方法

        1.1試驗材料

        1.1.1菌種。海洋細菌Vibrio agarivorans1,大連工業(yè)大學生物學實驗室保藏(大連黑石礁附近海域的江籬中分離得到)。

        1.1.2培養(yǎng)基。試管斜面培養(yǎng)基(2216培養(yǎng)基):瓊脂粉20 g/L、蛋白胨 5 g/L、酵母膏1 g/L、磷酸鐵0.1 g/L、海水1 L,pH 7.2。

        液體種子培養(yǎng)基:蛋白胨5 g/L、酵母膏10 g/L、CaCl2 0.5 g/L、NaCl 25 g/L、FePO4 1 g/L、K2HPO4 1 g/L、FeSO4 0.3 g/L,pH 7.2。

        液體發(fā)酵培養(yǎng)基:瓊脂粉2 g/L、蛋白胨5 g/L、酵母膏10 g/L、CaCl2 0.5 g/L、NaCl 25 g/L、FePO4 1g/L、K2HPO4 1 g/L、FeSO4 0.3 g/L,pH 7.2。

        1.1.3儀器與試劑。儀器:ZPS250智能生化培養(yǎng)箱,黑龍江東拓儀器有限公司;HH恒溫水浴鍋,鞏義市英峪生化儀器廠;TGL16G高速離心機,上海安亭科學儀器廠;ZHWY2120C恒溫培養(yǎng)振蕩器,上海智城分析儀器制造有限公司;722S可見分光光度計,上海分析儀器廠;瓊脂粉,北京博奧星生物技術(shù)責任有限公司。

        1.2方法

        1.2.1DNS配制。甲液:將6.9 g結(jié)晶苯酚溶于15.2 ml 10%NaOH溶液,蒸餾水稀釋至69 ml,在此溶液中加入6.9 g亞硫酸氫鈉。

        乙液:將255 g酒石酸鉀鈉溶于300 ml 10%NaOH溶液中,再加入880 ml 1%的3,5-二硝基水楊酸溶液。

        將甲乙2溶液混合即得黃色試劑,儲于棕色瓶中放置7~10 d后使用。在棕色瓶內(nèi)保存1年有效[10]。

        1.2.2 酶活力測定。分別取1 ml發(fā)酵液和1 ml含0.2%瓊脂的磷酸緩沖溶劑于試管內(nèi),40 ℃恒溫水浴鍋加熱30 min,再加入2 ml DNS試劑后沸水浴5~10 min,取出后定容至25 ml,以8 000 r/min離心10 min后取上清液用可見分光光度計在540 nm處測OD值[11-14]。

        酶活力定義:以1 ml酶液1 min產(chǎn)1 U/g還原糖定義為一個活力單位。

        酶活計算公式:1 000nΔA/kt,式中,ΔA為還原糖吸光值,n為發(fā)酵液稀釋倍數(shù),t為酶液的反應時間(min),k為標準曲線斜率。

        1.2.3產(chǎn)酶方法。挑取1環(huán)菌苔至5 ml種子培養(yǎng)基中,28 ℃、150 r/min,培養(yǎng)24 h后將5 ml種子加入45 ml產(chǎn)酶培養(yǎng)基中(裝于250 ml三角瓶中),28 ℃、150 r/min,培養(yǎng)一段時間后測定酶活。

        1.2.4單因素試驗。取一環(huán)菌株接入裝有5 ml液體種子液培養(yǎng)基的試管中,28 ℃、150 r/min,培養(yǎng)24 h,再將5 ml種子加入45 ml的液體產(chǎn)酶培養(yǎng)基中(裝于250 ml三角瓶中),28 ℃、150 r/min,培養(yǎng)一段時間后測定酶活性,研究瓊脂粉質(zhì)量濃度、酵母膏質(zhì)量濃度、NaCl質(zhì)量濃度對產(chǎn)酶的影響。

        1.2.5響應面分析。以瓊膠酶活性作為響應值,優(yōu)化過程為:①在單因素試驗的基礎(chǔ)上篩選出對瓊膠酶產(chǎn)量影響顯著的因素進行因素水平設(shè)計。②利用響應面法Boxbehnken設(shè)計,最終確定最優(yōu)發(fā)酵條件,并進行驗證試驗[15-16]。

        2結(jié)果與分析

        2.1單因素試驗

        2.1.1瓊脂粉質(zhì)量濃度對瓊膠酶酶活力的影響。在發(fā)酵培養(yǎng)基中,去掉原有瓊脂粉,分別加入1、2、3、4、5、6 g/L的瓊脂粉,在28 ℃、150 r/min的條件下培養(yǎng)24 h。結(jié)果見。由可知,當瓊脂粉質(zhì)量濃度為3 g/L時,酶活達到最高值5.84 U/g,因此最佳瓊脂粉質(zhì)量濃度為3 g/L。瓊脂是菌株產(chǎn)瓊膠的誘導物,也是培養(yǎng)基中重要碳源,因此瓊脂粉質(zhì)量濃度對酶活性影響較大。

        瓊脂粉質(zhì)量濃度對瓊膠酶酶活力的影響2.1.2NaCl質(zhì)量濃度對瓊膠酶酶活力的影響。在瓊脂粉質(zhì)量濃度3 g/L的液體發(fā)酵培養(yǎng)基中,去掉原有NaCl,分別加入15、25、35、45、55、65 g/L的NaCl,在28 ℃、150 r/min的條件下培養(yǎng)24 h。結(jié)果見。由可知,在NaCl質(zhì)量濃度為45 g/L時,瓊膠酶酶活力達到最高為6.58 U/g。因為Vibrio agarivorans1為海洋細菌,因此NaCl的質(zhì)量濃度對其影響較顯著。當NaCl質(zhì)量濃度過低時微生物所需的鹽離子不足,不利于菌株產(chǎn)酶,質(zhì)量濃度過高反而抑制微生物生長。

        NaCl質(zhì)量濃度對瓊膠酶酶活力的影響2.1.3酵母膏質(zhì)量濃度對瓊膠酶酶活力的影響。在瓊脂粉質(zhì)量濃度3 g/L、NaCl質(zhì)量濃度45 g/L的液體發(fā)酵培養(yǎng)基中,去掉原有酵母膏,分別加入6、8、10、12、14、16 g/L的酵母膏,在28 ℃、150 r/min的條件下培養(yǎng)24 h,結(jié)果見。由可知,當酵母膏質(zhì)量濃度為12 g/L時酶活力達到最高值6.92 U/g。酵母膏為培養(yǎng)基中重要氮源,適量的氮源有利于微生物的生長,營養(yǎng)物質(zhì)質(zhì)量濃度太低不能滿足微生物生長需要,過高也會抑制微生物生長。

        酵母高質(zhì)量濃度對瓊膠酶酶活力的影響2.2響應面試驗根據(jù)BoxBenhnken的中心組合試驗設(shè)計原理[17],綜合單因素試驗結(jié)果選取瓊脂粉質(zhì)量濃度、酵母膏質(zhì)量濃度及NaCl質(zhì)量濃度3個顯著因素,響應值Y為瓊膠酶酶活力,采用3因素3水平的響應面分析方法,因素和水平見。

        以瓊膠酶酶活力為響應值,菌株產(chǎn)瓊膠酶酶活性影響因素響應面分析試驗設(shè)計與結(jié)果見。

        通過Design Expert7.0軟件進行數(shù)據(jù)處理,結(jié)果見。從可以更直觀地反映因素的交互作用對酶活的影響,NaCl質(zhì)量濃度和酵母膏質(zhì)量濃度曲線較陡,說明其對酶活影響較顯著。

        解得:X1=0.09 X2=0.02 X3=0.04,即菌株的最優(yōu)培養(yǎng)基組分為:瓊脂粉質(zhì)量濃度為3.9 g/L,NaCl質(zhì)量濃度為45.2 g/L,酵母膏質(zhì)量濃度為12.9 g/L,最高酶活為7.602 U/g。為了檢驗模型預測結(jié)果的可靠性,依據(jù)響應面結(jié)果確定的最優(yōu)培養(yǎng)基組分進行驗證試驗,得到的酶活為7.589 U/g,與模型預測值基本吻合。

        3結(jié)論

        利用響應面法確定海洋細菌Vibrio agarivorans1最佳產(chǎn)酶培養(yǎng)基組分為:瓊脂粉質(zhì)量濃度為3.9 g/L,NaCl質(zhì)量濃度為45.2 g/L,酵母膏質(zhì)量濃度為12.9 g/L,在此條件下進行了驗證試驗,得到的最高酶活為7.589 U/g,與響應面預測結(jié)果基本吻合。在響應面法確定的最佳培養(yǎng)基組分下,酶活力較優(yōu)化前的2.261 U/g提高了3.35倍。

        42卷23期修 爽等響應面法優(yōu)化瓊膠酶發(fā)酵培養(yǎng)基參考文獻

        [1] 歐昌榮,湯海青,管斌.瓊膠酶生產(chǎn)菌的篩選、鑒定及其酶學性質(zhì)的初步研究[J].食品科學,2005,26(6):86-90.

        [2] 劉江濤,蔡俊鵬,吳冰.瓊膠酶及其綜合應的研究概況[J].現(xiàn)代食品科技,2005,21(1):177-179.

        [3] 王靜雪,江曉路,胡曉珂.細菌降解瓊膠的研究進展[J].中國水產(chǎn)科學,2001(3):93-96.

        [4] JEAN H E.The role of bacteria in the digestion of seaweed by the ablone Haliotis[J].Aquaculture,1997, 155:377-386.

        [5] ENOKI T,SAGAWA H,TOMINAGA T,et al.Drugs,food or drinks with the use of algaederived physiologically active substances:U S,0105029 A1[P].2003.

        [6] WANG J X,JIANG X L,MOU H J,et al.Antioxidation of agar oligosaccharides produced by agarase from a marine bacterium[J].Journal of Applied Phycology,2004,16:333-340.

        [7] CHEN H M,YAN X J.Antioxidant activities of agaro-oligos accharides with different degrees of polymerization in cell-based system[J].Biochimica et Biophysica Acta,2005,1722:103-111.

        [8] WEINBERGER F,RICHARD C,KLOAREG B,et al.Structure-activity relationships of oligoagar elicitors towards Gracilaria conferta[J].Journal of Phycology,2001,37:418-426.

        [9] HU B,GONG Q H,WANG Y,et al.Prebiotic effects of neoagarooligosaccharides prepared by enzymatic hydrolysis of agarose[J].Anaerobe,2006,12:260-266.

        [10] GU Y S.Determination methods of enzymatic activities of pectinase as a biologic additive in textile[J].Textile Reseach Journal,2002,3:29-35.

        [11] IMOTO T,YEGISHITA K.A simple activity measurement of lysozyme[J].Agricultural& Biological Chemistry,1971,35:1154-1156.

        [12] 顧燕松.紡織生物助劑果膠酶酶活的測定方法[J].紡織科學研究,2002(3):29-35.

        [13] 蔡俊鵬,劉江濤.產(chǎn)瓊膠酶菌株的篩選及其胞外酶活的測定[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2005,17(6):730-733.

        [14] 張信旭,高海波.3,5- 二硝基水楊酸測定古尼蟲草中多糖含量方法[J].貴州化工,2002,27(3):23-38.

        [15] JORGE V,RAUL A,ERMINIO M,et al.Identification of a marine agarolytic Pseudoalteromonas isolate and characterization of its extracellular agarase[J].Applied and Environmental Microbiology,1998,64(11):4378-4383.

        [16] 杜沛,朱麗娟,陳雙喜.響應面法優(yōu)化Bacillussubtilis HD2F9 產(chǎn)C2聚谷氨酸發(fā)酵培養(yǎng)基[J].河南大學學報,2010,40(5):498-502.

        [17]齊勇,王際輝,葉淑紅,等.響應面法優(yōu)化芽孢桿菌LJ-7發(fā)酵產(chǎn)酯酶條件[J]

        猜你喜歡
        脂粉面法酵母
        “素面朝天”朝的是天空嗎?
        科教新報(2024年26期)2024-07-05 10:57:37
        響應面法提取棗皂苷工藝的優(yōu)化
        落葉果樹(2021年6期)2021-02-12 01:29:04
        櫻花
        CHIC的化妝包
        響應面法優(yōu)化葛黃片提取工藝
        中成藥(2017年4期)2017-05-17 06:09:46
        酵母抽提物的研究概況
        酵母魔術(shù)師
        人CyclinD1在畢赤酵母中的表達
        響應面法優(yōu)化紅樹莓酒發(fā)酵工藝
        中國釀造(2016年12期)2016-03-01 03:08:19
        基于支持向量機響應面法的連續(xù)剛構(gòu)橋可靠度
        亚洲av无码一区二区三区在线| 国产女主播喷水视频在线观看| 一本久久精品久久综合| 蜜桃视频免费在线视频| 在线观看免费午夜大片| 国产超碰人人爽人人做人人添 | 无码熟妇人妻AV影音先锋| 国产免国产免费| 亚洲成av人片在www鸭子| 91羞射短视频在线观看| 久久精品熟女不卡av高清| 亚洲av中文无码字幕色三| 久久不见久久见免费影院国语 | 国产探花在线精品一区二区| 国产一级一级内射视频| 日本一区二区三区激视频| 国产激情无码Av毛片久久| 亚洲gv白嫩小受在线观看| 久久精品无码av| 日本真人添下面视频免费 | 少妇仑乱a毛片| 中文字幕一区二区三区四区五区| 精品极品视频在线观看| 亚洲精品日本久久久中文字幕| 天天躁日日操狠狠操欧美老妇| 精品国产乱码久久久软件下载| 无码任你躁久久久久久老妇| 亚洲国产婷婷香蕉久久久久久| 亚洲av色av成人噜噜噜| 国产一级黄片久久免费看| 波多野结衣一区二区三区免费视频| 中文在线√天堂| 国产自偷自偷免费一区| 亚洲a∨国产av综合av下载| 久久精品国产亚洲夜色av网站| 日本视频一区二区三区在线| 亚洲国产一区二区精品| 欧美片欧美日韩国产综合片| 国产精品99久久久精品免费观看| 国产尤物精品自在拍视频首页| 性生交大片免费看淑女出招|