吳志成，楊錫倉(cāng)，王明偉，竇 霞，李越峰

1 甘肅中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，甘肅 蘭州 730020；2 甘肅中藥炮制及質(zhì)控工程技術(shù)研究中心；3 甘肅中醫(yī)學(xué)院中藥學(xué)院

酒當(dāng)歸最佳炮制工藝研究*

吳志成1，2，楊錫倉(cāng)1，2，王明偉3，竇 霞1，2，李越峰3

1 甘肅中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，甘肅 蘭州 730020；2 甘肅中藥炮制及質(zhì)控工程技術(shù)研究中心；3 甘肅中醫(yī)學(xué)院中藥學(xué)院

目的：建立高效液相色譜法測(cè)定酒炒當(dāng)歸和酒浸當(dāng)歸中阿魏酸的含量，篩選出最佳的酒當(dāng)歸臨方炮制方法。方法：采用C18色譜柱，以乙腈-0.085磷酸溶液（17∶83）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為361nm，對(duì)酒當(dāng)歸中阿魏酸的含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果：酒浸當(dāng)歸阿魏酸含量比生當(dāng)歸和酒炒當(dāng)歸阿魏酸含量高。結(jié)論：酒浸當(dāng)歸臨方炮制工藝最佳；用HPLC方法測(cè)定酒當(dāng)歸中阿魏酸的含量，操作簡(jiǎn)單，可靠，重現(xiàn)性好，可作為當(dāng)歸炮制工藝控制的有效方法。

酒炒當(dāng)歸；酒浸當(dāng)歸；炮制工藝；阿魏酸

當(dāng)歸為傘形科植物當(dāng)歸Angelica sinensis（O1iv.）Die1s的干燥根，為多年生草本植物，具有補(bǔ)血活血，調(diào)經(jīng)止痛，潤(rùn)腸通便之功［1］。當(dāng)歸是甘肅省道地藥材，中醫(yī)臨床應(yīng)用廣泛，在中醫(yī)界有“十醫(yī)九歸”之說(shuō)。當(dāng)歸歷史上南齊有炒法，唐代有酒浸法，宋代有酒洗、酒潤(rùn)、米拌炒、酒拌、酒炒、醋炒等方法［2］。當(dāng)歸的現(xiàn)代炮制品分為：全當(dāng)歸、當(dāng)歸頭、當(dāng)歸身、當(dāng)歸尾、酒當(dāng)歸、土炒當(dāng)歸、當(dāng)歸炭［3］。酒當(dāng)歸是當(dāng)歸臨床應(yīng)用的主流飲片之一，具有活血通經(jīng)之功效［4］。總結(jié)前人關(guān)于酒當(dāng)歸的傳統(tǒng)炮制方法大體上有2種，一種是酒浸當(dāng)歸［5］，另一種為酒炒當(dāng)歸，阿魏酸作為當(dāng)歸指標(biāo)性成分之一，具有抑制血小板聚集，促進(jìn)血小板解聚、抗血栓形成、解除血管平滑肌痙攣、抗氧化和自由基，提高膜穩(wěn)定性以及抗炎、鎮(zhèn)痛、增強(qiáng)免疫功能、利肝保濕等作用［6-7］。本研究通過(guò)HPLC法檢測(cè)2種炮制品中阿魏酸的含量，以評(píng)估2種炮制方法的優(yōu)劣，為其臨床應(yīng)用提供參考。

1 材料

1.1 儀器 LC-20AD島津高效液相色譜儀（島津公司提供）；工作站（島津高效液相色譜LC工作站提供）；BSA224S標(biāo)準(zhǔn)型電子天平、CPA225D準(zhǔn)微量天平（賽多利斯科學(xué)儀器儀器系統(tǒng)有限公司提供）；KQ-250高頻數(shù)控超聲波清洗儀器（昆山市超聲儀器有限公司提供）；DJ-02型中藥粉碎機(jī)（上海淀久中藥機(jī)械制造有限公司提供）；HHS112型電熱恒溫水浴鍋（江蘇省醫(yī)療器械廠提供）；具塞三角瓶、容量瓶均符合玻璃儀器要求。

1.2 試藥 黃酒（紹興東江有限責(zé)任公司生產(chǎn)，灌裝日期及批號(hào)：2010年1月10日）；當(dāng)歸（甘肅岷縣梅川生產(chǎn)，批號(hào)：101107；甘肅岷縣岷陽(yáng)生產(chǎn)，批號(hào)：101023；甘肅岷縣閭井生產(chǎn)，批號(hào)：101115）；阿魏酸對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：0773-9910）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件［8］色譜柱：C18（4.6mm×150mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.085磷酸溶液（17∶83）；柱溫：35℃；DAD檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為316nm；流速為1mL/min；進(jìn)樣量：10.0μL。理論板數(shù)按阿魏酸計(jì)算應(yīng)不低于5 000。HPLC圖見(jiàn)圖1。

圖1 當(dāng)歸炮制品樣品與對(duì)照品HPLC圖

2.2 酒浸當(dāng)歸和酒炒當(dāng)歸的制備 本樣品共3批，每批450g，分成3份，每份150g，其中酒炒當(dāng)歸、酒浸當(dāng)歸樣品由甘肅省中藥炮制與質(zhì)控工程技術(shù)中心制備，酒當(dāng)歸樣品經(jīng)甘肅中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院主任中藥師楊錫倉(cāng)鑒定，符合酒當(dāng)歸（成品性狀）項(xiàng)下的規(guī)定，酒浸當(dāng)歸按照當(dāng)歸與酒比例10∶3浸潤(rùn)制備。

2.3 溶液制備

2.3.1 對(duì)照品溶液的制備［8］取阿魏酸對(duì)照品適量，精密稱定，加70％甲醇置棕色容量瓶中，制成0.0124mg/mL的溶液，即得。

2.3.2 供試品溶液的制備［8］當(dāng)歸粉碎，過(guò)3號(hào)篩，稱取粉末約0.2g精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70％乙醇20mL，密塞，稱定重量，加熱回流30分鐘，放至室溫，再稱定重量，用70％乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，靜置，取上清過(guò)0.45μm微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得。

2.4 線性關(guān)系的考察 分別吸取“2.3.1”項(xiàng)下0.0124mg/mL阿魏酸對(duì)照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0、14.0、16.0、18.0、20.0μL進(jìn)樣，以峰面積（y）對(duì)進(jìn)樣量（x）進(jìn)行線性回歸計(jì)算，得回歸方程為y=3095.1x-4.1566（r=0.9999）。結(jié)果表明進(jìn)樣量在0.0124～0.248μg時(shí)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取生當(dāng)歸樣品約0.2g，按“2.3.2”制備供試品溶液，在室溫條件下，分別于0，2，4，8，12，24小時(shí)進(jìn)樣，在“2.1”項(xiàng)色譜條件下測(cè)定，峰面積基本不變。阿魏酸峰面積RSD=0.75％，表明阿魏酸在避光條件下24小時(shí)穩(wěn)定性良好。

2.6 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取濃度為0.0124mg/mL的對(duì)照品溶液，在“2.1”項(xiàng)色譜條件下連續(xù)測(cè)定6次，每次進(jìn)樣10μL，阿魏酸峰面積RSD=0.12％，結(jié)果表明精密度良好。

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取生當(dāng)歸樣品約0.2g，平行6份，精密稱定，按“2.3.2”項(xiàng)制備供試品溶液，在“2.1”項(xiàng)色譜條件下測(cè)定，計(jì)算阿魏酸含量，其RSD=0.8％，表明重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取已知含量的炮制品（生當(dāng)歸）樣品共6份，稱定重量，置具塞三角瓶中，精密加入定量的阿魏酸對(duì)照品，按“2.3.2”項(xiàng)制備供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液進(jìn)樣，在同樣色譜條件下測(cè)定阿魏酸的含量，計(jì)算加樣回收率平均為99.49％，結(jié)果表明本法回收率高。

2.9 樣品阿魏酸含量測(cè)定 按“2.3.2”項(xiàng)制備供試品溶液，每一炮制品樣品平行3個(gè)，取3個(gè)平行樣品的平均值，不同炮制品當(dāng)歸中阿魏酸含量，見(jiàn)表1。

表1 當(dāng)歸各炮制品中阿魏酸含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

本研究顯示，不同炮制方法的當(dāng)歸飲片所含阿魏酸含量有所不同，其中酒炒當(dāng)歸阿魏酸含量比生當(dāng)歸阿魏酸含量低，但酒浸當(dāng)歸阿魏酸含量比生當(dāng)歸和酒炒當(dāng)歸阿魏酸含量高，騰菲等［9］僅是對(duì)各種條件下酒炒當(dāng)歸中阿魏酸含量進(jìn)行了測(cè)定研究，而本研究得出酒浸當(dāng)歸更優(yōu)，酒浸當(dāng)歸為目前酒當(dāng)歸中最佳的臨方炮制工藝。

本研究采用HPLC方法，對(duì)酒當(dāng)歸中阿魏酸的含量進(jìn)行測(cè)定，精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性良好，回收率高；操作簡(jiǎn)單、可靠，重現(xiàn)性好，可作為甘肅道地藥材當(dāng)歸質(zhì)量控制的有效方法。

當(dāng)歸采用不同方法炮制后，其活性成分之一的阿魏酸含量不同，其中酒浸當(dāng)歸的阿魏酸含量最高，生當(dāng)歸次之，酒炒當(dāng)歸最低。在臨床應(yīng)用中，用于抗血小板聚集，增強(qiáng)前列腺素活性，鎮(zhèn)痛，緩解血管痙攣，治療心腦血管疾病及白細(xì)胞減少等癥時(shí)，使用酒浸當(dāng)歸臨床療效會(huì)更好。炮制簡(jiǎn)單方便，比酒炒當(dāng)歸省時(shí)省力。因此，規(guī)范甘肅道地藥材當(dāng)歸的炮制過(guò)程，才能有效控制其質(zhì)量。

［1］張永，高昌琨，嚴(yán)安定.甘肅當(dāng)歸炮制前后HPLC特征圖譜及阿魏酸含量測(cè)定研究［J］.中國(guó)藥房，2011，22（47）：4470-4472.

［2］龔千鋒.中藥炮制學(xué)［M］.北京：中國(guó)中醫(yī)藥出版社，2007：176-177.

［3］馮寶麟.古今中藥炮制新探［M］.濟(jì)南：山東科學(xué)技術(shù)出版社，1984：173.

［4］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：124-125.

［5］郁洋.當(dāng)歸的炮制研究［J］.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2006，13（6）：45-47.

［6］劉會(huì)榮.阿魏酸鈉的藥理作用與臨床應(yīng)用［J］.中國(guó)藥業(yè)，2005，14（3）：78-79.

［7］歐仕益，包惠燕，藍(lán)志東.阿魏酸及其衍生物的藥理作用研究進(jìn)展［J］.中藥材，2001，24（3）：220-221.

［8］李成義，王延惠，魏學(xué)明，等.HPLC測(cè)定不同產(chǎn)地當(dāng)歸中阿魏酸的含量［J］.西部中醫(yī)藥，2012，25（1）：34-36.

［9］滕菲，張學(xué)蘭，張坤.正交試驗(yàn)法優(yōu)選酒當(dāng)歸的炮制工藝［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2009，27（1）：215-217.

Research on the Optimal Processing Technology of DangGui Prepared with Liquor

WU Zhicheng1，2，YANG Xicang1，2，WANG Mingwei3，DOU Xia1，2，LI Yuefeng3
1 University Hospital of Gansu Traditional Chinese Medicine，Lanzhou 730020，China；2 The Center for Chinese Medicine Preparation and Quality Control Engineering Technology of Gansu Province；3 School of Traditional Chinese Materia Medica in Gansu University of Traditional Chinese Medicine

Objective：To screen the best processing method of DangGui（Angelica sinensis）prepared with liquor by establishing HPLC method for the determination of the contents of ferulic acid in liquor-roasted DangGui and liquor-soaked DangGui.Methods：C18column was adopted，the mobile phase：acetonitrile-0.085 phosphoric acid solution（17：83），detection wavelength was 361 nm.The contents of ferulic acid were detected in DangGui processed with liquor.Results：The contents of ferulic acid in liquor-soaked DangGui were higher than those in rude DangGui and liquor-roasted DangGui.Conclusion：The processing technique for liquor-soaked DangGui is the best；the contents of ferulic acid in liquor-processed DangGui are determined by HPLC，the technique is simple，reliable，reproducible，and itcould be an effective method for quality control of processed DangGui.

liquor-roasted DangGui；liquor-soaked DangGui；processing technique；ferulic acid

R283.1

A

1004-6852（2014）01-0040-03

2013-05-27

甘肅中醫(yī)學(xué)院中青年基金項(xiàng)目（編號(hào)gsfy-09-22）

吳志成（1973—），男，副主任中藥師。研究方向：中藥炮制技術(shù)以及中藥鑒定。